山蠟梅葉片提取物清除自由基活性及液質(zhì)聯(lián)用分析

陳慶祥 伍全根 胡豐林

摘 要：山蠟梅（Chimonanthus nitens）為臘梅科臘梅屬常綠灌木，其葉片中含有多種活性成分。該研究首次采用高效液相色譜、高分辨質(zhì)譜和二苯基苦基苯肼自由基（DPPH）聯(lián)合試驗(yàn)法，對(duì)山蠟梅葉片提取物的清除自由基活性及成分進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，山蠟梅葉甲醇提取物具有一定的清除DPPH自由基活性，其中安徽黃山、六安和市售的山蠟梅葉對(duì)0.4mg/mL DPPH自由基的半數(shù)清除濃度分別為2.23、2.31和2.82mg/mL。利用液質(zhì)聯(lián)用和清除自由基進(jìn)行聯(lián)合分析，山蠟梅葉甲醇提取物的主要成分為C7H12O6、C15H18O9、C15H14O5、C22H26O19和C27H30O16。其中，C15H18O9、C15H14O5和C27H30O16有著較強(qiáng)的清除自由基活性。3種活性化合物可能分別為咖啡酸葡萄糖苷、三羥基黃烷醇和蘆丁，其中咖啡酸葡萄糖苷和三羥基黃烷醇為首次從山蠟梅中發(fā)現(xiàn)的。

關(guān)鍵詞：山蠟梅葉;活性成分;液質(zhì)聯(lián)用和DPPH聯(lián)合分析

中圖分類號(hào) Q946? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A文章編號(hào) 1007-7731（2021）19-0013-03

Radical Scavenging Activity and Constituents Analysis of Methanol Extracts from Leaves of Chimonanthus nitens with HPLC-HRMS-DPPH Method

CHEN Qingxiang1 et al.

（1Forestry Bureau of Huoshan Count， Huoshan 237299， China）

Abstract： Chimonanthus nitens which contained several active constituents is an evergreen shrub of the Chimonanthus family. A combined analysis of HPLC-MS and DPPH assay was used for the first time to study radical scavenging activity and components of extract from leaves of Chimonanthus nitens. Results show that extracts from leaves of Chimonanthus nitens possess radical scavenging activity.? The half scavenging concentrations of leaves from Huangshan， Liuan and Jiangxi are 2.23， 2.31 and 2.82 mg/mL respectively. Results of HPLC-MS and DPPH assay show that the main components in leaves of Chimonanthus nitens are C7H12O6， C15H18O9， C15H14O5， C22H26O19 and C27H30O16， and C15H18O9， C15H14O5， C27H30O16 have radical scavenging activity. Data base enquiry show the three radical scavengers are possibly lutin， caffeoylglucoside and trihydroxyflavanol and the last compounds were detected from Chimonanthus nitens for the first time.

Key words： Leaves of Chimonanthus nitens; Bioactive constituents; Combined analysis of HPLC-MS and DPPH assay

山蠟梅（Chimonanthus nitens Oliv.）別名亮葉臘梅、毛山茶、巖馬桑、香風(fēng)茶，是我國(guó)特有的蠟梅科蠟梅屬灌木，主要分布在我國(guó)湖北、安徽、江西、江蘇、浙江、湖南、廣西、云南等省份的山地疏林下或林緣處[1]。山蠟梅在安徽山區(qū)普遍分布，山區(qū)老百姓習(xí)慣用山蠟梅葉做茶飲用，用于防治感冒。據(jù)報(bào)道，山蠟梅多以葉入藥，葉氣清香，味微苦而辛涼，具有解表祛風(fēng)、清熱解毒之功效，有預(yù)防感冒和治療慢性氣管炎等作用[2]?，F(xiàn)代藥物化學(xué)分析與藥效試驗(yàn)證明：山蠟梅葉的主要成分為黃酮、生物堿、肌醇和揮發(fā)油，具有抗菌消炎、抗病毒、增強(qiáng)肌體免疫力等功能，且無(wú)毒副作用[4-8]。

安徽山區(qū)有大量的野生山蠟梅。為做好山蠟梅的開發(fā)利用工作，本研究采用高效液相色譜、高分辨質(zhì)譜和二苯基苦基苯肼自由基試驗(yàn)聯(lián)用的方法，對(duì)安徽山蠟梅葉的清除自由基活性成分進(jìn)行了研究，并與市售樣品進(jìn)行比較，以期更全面地了解該植物的生物活性，同時(shí)為安徽山區(qū)的山蠟梅資源開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 山蠟梅葉樣品 供試樣品于2016年9月分別采自安徽六安和黃山，同時(shí)從市場(chǎng)購(gòu)買產(chǎn)地為江西的干燥山蠟梅葉產(chǎn)品做比較。

1.1.2 化學(xué)藥品 二苯基苦基苯肼自由基（DPPH）從Sigma公司購(gòu)買;溶劑甲醇為國(guó)產(chǎn)分析純;用于液質(zhì)聯(lián)用分析的甲醇為美國(guó)天地公司的HPLC級(jí)甲醇。

1.1.3 主要儀器 酶標(biāo)儀為美國(guó)Molecule Device公司的M2型;電子天平為上海分析儀器廠生產(chǎn)的萬(wàn)分之一天平。高分辨液質(zhì)聯(lián)用分析儀，包括美國(guó)安捷倫公司的1100型高效液相色譜儀（包括自動(dòng)進(jìn)樣器、二元高壓梯度泵、真空脫氣機(jī)和二極陣列檢測(cè)器），安捷倫6210型飛行時(shí)間質(zhì)譜儀。