甘草總黃酮對(duì)高脂條件下羅非魚(yú)肝損傷的保護(hù)作用

杜金梁，曹麗萍，賈 睿，顧?quán)嶇?勤，徐 跑，，JENEY Galina，馬玉忠，殷國(guó)俊，，*

(1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院 淡水漁業(yè)研究中心/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部淡水漁業(yè)和種質(zhì)資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 無(wú)錫 214081； 2.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院 淡水漁業(yè)研究中心/魚(yú)類免疫藥理學(xué)國(guó)際聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室，江蘇 無(wú)錫 214081； 3.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，河北 保定 071001； 4.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 無(wú)錫漁業(yè)學(xué)院，江蘇 無(wú)錫 214081； 5.匈牙利水產(chǎn)與漁業(yè)研究所 國(guó)家農(nóng)業(yè)研究中心，匈牙利 索爾沃什 5440)

脂肪肝損傷在羅非魚(yú)(Oreochromisniloticus)養(yǎng)殖過(guò)程中頻繁發(fā)生，是一種常見(jiàn)多發(fā)性疾病。羅非魚(yú)患此病后機(jī)體通常會(huì)表現(xiàn)為免疫力下降、增重緩慢、肉質(zhì)差、抗應(yīng)激能力降低，若此病發(fā)生在夏季，患病羅非魚(yú)更容易受到細(xì)菌病、病毒病的侵襲，造成魚(yú)類大面積死亡，給養(yǎng)殖戶造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重阻礙羅非魚(yú)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。研究表明，魚(yú)類脂肪肝損傷主要受以下幾種因素影響：飼料配方配比不合理、養(yǎng)殖密度過(guò)大、養(yǎng)殖環(huán)境差等[1-3]。關(guān)于魚(yú)類脂肪肝的發(fā)病機(jī)理，有學(xué)者認(rèn)為是由于肝內(nèi)脂肪合成和代謝發(fā)生紊亂，使得肝內(nèi)脂質(zhì)合成和脂質(zhì)氧化之間失衡所致[4-5]。也有學(xué)者認(rèn)為氧化應(yīng)激反應(yīng)是造成脂肪肝損傷的誘因[6-7]，到目前為止，關(guān)于魚(yú)類脂肪肝具體發(fā)病機(jī)制依然沒(méi)有定論。養(yǎng)殖過(guò)程中多采用在飼料中添加抗脂肪因子、肉堿等西藥防治魚(yú)類脂肪肝損傷，雖然取得了一定療效，但治療效果并不理想，且過(guò)多使用容易造成魚(yú)體內(nèi)藥物殘留，導(dǎo)致養(yǎng)殖環(huán)境污染，進(jìn)而影響人類健康。因此，急需研發(fā)綠色無(wú)殘留的抗脂肪肝藥物。目前，關(guān)于抗魚(yú)類脂肪肝損傷藥物篩選的報(bào)道還較少，學(xué)者們主要圍繞草魚(yú)和斑馬魚(yú)開(kāi)展了少量研究，如飼料中添加L-肉毒堿、膽汁酸等可以有效降低草魚(yú)的體脂含量和肝脂含量[8-9]；制首烏醇提取物對(duì)斑馬魚(yú)非酒精性脂肪肝具有較好的治療效果[10]；垂盆草提取物對(duì)于草魚(yú)脂肪性肝損傷具有良好治療作用[11]。當(dāng)前大部分治療脂肪肝藥物篩選研究主要集中在哺乳動(dòng)物，二苯乙烯苷、大麻二酚、歐芹根總黃酮等藥物對(duì)大鼠非酒精性脂肪肝損傷具有較好的治療作用[12-14]，治療羅非魚(yú)脂肪肝損傷藥物的篩選還鮮有報(bào)道。

隨著人類生活水平的不斷提高，魚(yú)作為餐桌上的必備食材，其安全性越來(lái)越受到重視，綠色健康養(yǎng)殖就顯得尤為重要。中草藥具有綠色無(wú)公害、無(wú)毒副作用、無(wú)藥物殘留等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用于治療疾病，具有很好的應(yīng)用前景。甘草(GlycyrrhizauralensisFisch)是臨床上應(yīng)用較廣的一種中草藥，其具有抗炎殺菌、保肝護(hù)肝等功效。甘草總黃酮(Glycyrrhizatotal flavones)是甘草提取物有效成分之一，關(guān)于甘草總黃酮治療哺乳動(dòng)物脂肪肝的報(bào)道較多。甘草總黃酮對(duì)SD大鼠非酒精性脂肪肝具有干預(yù)作用[15]；甘草黃酮提取物能夠調(diào)節(jié)大鼠血糖血脂[16]；甘草黃酮分散片可以修復(fù)四氯化碳造成的小鼠肝損傷[17]。目前甘草總黃酮對(duì)羅非魚(yú)脂肪肝損傷是否有治療作用未見(jiàn)報(bào)道。本研究以羅非魚(yú)作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，用高脂飼料構(gòu)建羅非魚(yú)脂肪肝損傷模型，探索甘草總黃酮對(duì)高脂條件誘導(dǎo)下羅非魚(yú)肝損傷是否具有保護(hù)作用，為開(kāi)發(fā)羅非魚(yú)綠色保肝藥物提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

羅非魚(yú)購(gòu)于中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)院淡水漁業(yè)研究中心屺亭漁場(chǎng)，體表完好、游姿正常，體重為(30±1)g。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前放置于循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中暫養(yǎng)1周，水溫設(shè)定為(30±1)℃，每天上午和下午各投喂1次飼料。

甘草總黃酮購(gòu)于上海源葉生物科技有限公司(貨號(hào)：S25400)；甘油三酯(triglyceride， TG)、總膽固醇(total cholesterol， TC)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase， SOD)、還原型谷胱甘肽(reduced glutathione，GSH)、丙二醛(malondialdehyde， MDA)、總抗氧化能力(total antioxidant capacity， T-AOC)試劑盒購(gòu)自南京建成海浩生物工程有限公司；蛋白水平測(cè)定所需試劑購(gòu)于上海碧云天生物技術(shù)有限公司；熒光定量PCR所需試劑購(gòu)于寶生物工程(大連)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 飼料組方與試驗(yàn)分組

選取180尾健康、無(wú)傷，體重為(30±1) g的羅非魚(yú)，隨機(jī)分為6組，每組30尾魚(yú)，分別為空白對(duì)照組、高脂飼料模型組和4個(gè)不同濃度(0.05、0.10、0.50、1.00 g·kg-1)甘草總黃酮藥物處理組。每組設(shè)定3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10尾魚(yú)。每日飼喂2次，按體重的4%來(lái)確定飼喂量，連續(xù)飼喂90 d?？瞻讓?duì)照組：僅飼喂基礎(chǔ)飼料(粗脂肪含量為6%)；高脂組：投喂高脂飼料(粗脂肪含量為21%)；甘草總黃酮藥物處理組：分別在高脂飼料中添加0.05、0.10、0.50、1.00 g·kg-1甘草總黃酮。各實(shí)驗(yàn)組日糧情況參照實(shí)驗(yàn)室飼料配方改良而成[18]，如表1所示。

表1 實(shí)驗(yàn)組日糧組成

1.2.2 樣本采集與處理

連續(xù)飼喂90 d后，采集羅非魚(yú)肝進(jìn)行肝勻漿液制備，并提取肝蛋白質(zhì)。肝勻漿液制備：將羅非魚(yú)肝用0.9% NaCl溶液漂洗，然后用勻漿器制成10%的肝勻漿液，3 500g離心10 min后，取上清液于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩８蔚鞍踪|(zhì)提?。簩⒏斡眉舻都羲?，加入細(xì)胞裂解液提取蛋白質(zhì)，以每20 mg肝加入150 μL裂解液為準(zhǔn)，充分裂解后，放入離心機(jī)10 000～14 000g離心3～5 min，取上清進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)操作。蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定參照蛋白質(zhì)定量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)。

1.2.3 生化指標(biāo)測(cè)定

取肝勻漿上清液按照說(shuō)明書(shū)測(cè)定SOD活性、GSH活性、MDA含量、TG含量、TC含量、T-AOC水平。

1.2.4 核轉(zhuǎn)錄因子-κB C-Rel和κB P 65蛋白表達(dá)水平檢測(cè)

Western blot參照張燕婉等[19]的方法，肝蛋白樣品經(jīng)過(guò)變性、SDS-PAGE電泳、半干轉(zhuǎn)膜儀轉(zhuǎn)膜、封閉液封閉、一抗孵育、二抗孵育、化學(xué)發(fā)光顯色等步驟后，檢測(cè)羅非魚(yú)肝中核轉(zhuǎn)錄因子-κB C-Rel和κB P 65蛋白表達(dá)情況。

1.2.5 熒光定量PCR

采用Trizol法提取羅非魚(yú)肝中總RNA，具體提取步驟參照Takara RNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。用全自動(dòng)酶標(biāo)儀測(cè)定總RNAD260/D280值，然后按照Takara反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。制備好的cDNA樣本將用于熒光定量PCR試驗(yàn)。熒光定量PCR所采用試劑來(lái)自寶生物工程(大連)有限公司，MTTP、ApoB100基因相對(duì)表達(dá)量采用2-ΔΔCt法[20]計(jì)算。qRT-PCR所用引物見(jiàn)表2。

表2 qRT-PCR引物信息

1.3 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS19.0軟件包中單因素ANOVA方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 甘草總黃酮對(duì)高脂條件下羅非魚(yú)肝中TC、TG含量的影響

如圖1所示，投喂高脂飼料90 d，羅非魚(yú)肝中TC、TG含量與對(duì)照組相比極顯著升高(P<0.01)。與高脂組相比，投喂含有不同濃度的甘草總黃酮飼料后，羅非魚(yú)肝中TC、TG含量不同程度降低，1.00 g·kg-1甘草總黃酮組羅非魚(yú)肝中TC含量顯著降低(P<0.05)，0.50 g·kg-1甘草總黃酮組羅非魚(yú)肝中TG含量極顯著降低(P<0.01)。說(shuō)明甘草總黃酮對(duì)于高脂飼料造成的羅非魚(yú)肝脂肪沉積有一定的緩解作用。

2.2 甘草總黃酮對(duì)高脂條件下羅非魚(yú)肝中GSH活性的影響

如圖2所示，投喂高脂飼料后，與對(duì)照組相比，羅非魚(yú)肝中GSH活性極顯著降低(P<0.01)；投喂含不同濃度的甘草總黃酮飼料后，0.50 g·kg-1甘草總黃酮組保肝效果較好，肝中GSH活性顯著(P<0.05)高于高脂組，其他藥物組GSH活性與高脂組相比無(wú)顯著差異(P>0.05)。表明甘草總黃酮對(duì)高脂飼料造成的羅非魚(yú)肝抗氧化系統(tǒng)損傷具有一定的保護(hù)作用。

2.3 甘草總黃酮對(duì)高脂條件下羅非魚(yú)肝中SOD活性的影響

如圖3所示，投喂高脂飼料后，與對(duì)照組相比，羅非魚(yú)肝中SOD活性極顯著(P<0.01)降低；飼料中加入不同濃度甘草總黃酮后，與高脂組相比，0.50 g·kg-1甘草總黃酮組羅非魚(yú)肝中SOD活性顯著升高(P<0.05)，這表明甘草總黃酮對(duì)高脂飼料造成的羅非魚(yú)肝氧化損傷具有一定的保護(hù)作用。

2.4 甘草總黃酮對(duì)高脂條件下羅非魚(yú)肝中T-AOC水平的影響

如圖4所示，投喂高脂飼料后，羅非魚(yú)肝中T-AOC水平較對(duì)照組極顯著下降(P<0.01)；投喂含有不同濃度的甘草總黃酮飼料后，與高脂組相比，0.05 g·kg-1、0.10 g·kg-1和0.50 g·kg-1甘草總黃酮組羅非魚(yú)肝中T-AOC水平均顯著升高(P<0.01或P<0.05)，以0.10 g·kg-1甘草總黃酮組升高幅度最大。這表明甘草總黃酮可以提高羅非魚(yú)肝的抗氧化能力，抑制高脂飼料造成的羅非魚(yú)肝損傷。

2.5 甘草總黃酮對(duì)高脂條件下羅非魚(yú)肝中MDA含量的影響

如圖5所示，與對(duì)照組相比，投喂高脂飼料組羅非魚(yú)肝中MDA含量極顯著升高(P<0.01)；投喂含不同濃度的甘草總黃酮飼料后，羅非魚(yú)肝中MDA含量與高脂組無(wú)顯著差異(P>0.05)。

2.6 甘草總黃酮對(duì)NF-κB C-Rel、NF-κB P65 蛋白表達(dá)的影響

如圖6所示，與對(duì)照組相比，高脂飼料組羅非魚(yú)肝中NF-κB P65蛋白和C-Rel蛋白表達(dá)水平極顯著(P<0.01)增加，這說(shuō)明高脂飼料誘導(dǎo)了NF-κB相關(guān)蛋白的表達(dá)；飼料中加入不同濃度甘草總黃酮進(jìn)行干預(yù)后，肝中NF-κB C-rel和NF-κB P 65蛋白表達(dá)水平不同程度降低，與高脂組相比，0.50 g·kg-1甘草總黃酮組降低顯著(P<0.05)，說(shuō)明甘草總黃酮可以促進(jìn)肝中脂蛋白的代謝，減輕肝損傷。

2.7 甘草總黃酮對(duì)MTTP、ApoB100基因表達(dá)的影響

如圖7-A所示，高脂飼料組羅非魚(yú)肝中MTTPmRNA表達(dá)水平顯著(P<0.05)低于對(duì)照組，飼料中加入甘草總黃酮干預(yù)后，0.10 g·kg-1、0.50 g·kg-1和1.00 g·kg-1甘草總黃酮組羅非魚(yú)肝中MTTPmRNA表達(dá)水平極顯著(P<0.01)高于高脂組。由圖7-B可知，高脂組羅非魚(yú)肝中ApoB100 mRNA表達(dá)水平極顯著(P<0.01)低于對(duì)照組，飼料中加入甘草總黃酮干預(yù)后，0.50 g·kg-1和1.00 g·kg-1甘草總黃酮組羅非魚(yú)肝中ApoB100 mRNA表達(dá)水平極顯著(P<0.01)高于高脂組。綜上，推測(cè)甘草總黃酮可以促進(jìn)脂肪在肝中轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝，減輕脂肪蓄積造成的肝損傷。

3 討論

目前，魚(yú)類脂肪肝發(fā)病機(jī)理研究眾多，但是造成魚(yú)類肝損傷的具體發(fā)病機(jī)制尚不清晰，且不同品種魚(yú)類發(fā)病機(jī)制可能存在差異；因此，深入研究魚(yú)類肝損傷的發(fā)病機(jī)理和藥物篩選工作，對(duì)于防治魚(yú)類脂肪肝損傷疾病具有重要意義。本研究主要從生化指標(biāo)、分子生物學(xué)指標(biāo)來(lái)探討高脂飼料對(duì)羅非魚(yú)造成肝損傷的情況，并評(píng)價(jià)飼料中添加甘草總黃酮是否對(duì)高脂飲食造成的羅非魚(yú)肝損傷具有保護(hù)作用。

3.1 甘草總黃酮對(duì)羅非魚(yú)肝中TG、TC含量的影響

甘油三脂和總膽固醇是臨床上診斷脂肪肝疾病的常用指標(biāo)，脂肪肝患者血清中TG、TC含量通常會(huì)出現(xiàn)升高現(xiàn)象[21-23]。近些年來(lái)，隨著研究人員對(duì)魚(yú)類脂肪肝損傷研究的不斷深入，TG、TC這2個(gè)經(jīng)典指標(biāo)被科技工作者們廣泛應(yīng)用到水產(chǎn)動(dòng)物中。有研究指出，患有脂肪肝損傷魚(yú)類的血清或者肝中血脂水平也呈升高趨勢(shì)[24-28]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與前人研究結(jié)果類似，羅非魚(yú)飼喂高脂飼料90 d后，肝勻漿中TG、TC含量極顯著升高，這表明在高脂飼料的誘導(dǎo)下，羅非魚(yú)肝中脂肪代謝出現(xiàn)障礙，造成脂肪在肝中蓄積。而飼料中加入甘草總黃酮藥物進(jìn)行干預(yù)后，可以不同程度降低肝中TG、TC的含量，這表明甘草總黃酮對(duì)于促進(jìn)脂肪代謝，減少脂肪在羅非魚(yú)肝中沉積具有一定的效果。已經(jīng)有學(xué)者在小鼠上得出了類似結(jié)果。王晶等[29]、劉國(guó)棟[30]研究表明，甘草總黃酮對(duì)小鼠高脂血癥有較好的干預(yù)作用，這說(shuō)明甘草總黃酮不僅可以促進(jìn)哺乳動(dòng)物機(jī)體脂質(zhì)代謝，對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物也具有較好的治療效果。

3.2 甘草總黃酮對(duì)羅非魚(yú)肝中抗氧化指標(biāo)的影響

抗氧化酶系統(tǒng)在維護(hù)機(jī)體健康方面發(fā)揮著重要作用，外界病原或者微生物侵害機(jī)體時(shí)，體內(nèi)的抗氧化酶系統(tǒng)就會(huì)被激活，保護(hù)機(jī)體免受致病因素?fù)p害[31]。SOD、GSH、T-AOC是評(píng)判機(jī)體抗氧化能力的常用生化指標(biāo)[32-33]。MDA是生物體脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物，脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)也是判定機(jī)體健康與否的重要因素，在致病因素的作用下，機(jī)體中MDA含量會(huì)不斷升高，導(dǎo)致細(xì)胞膜受損傷，細(xì)胞出現(xiàn)代謝功能障礙，繼而引發(fā)一系列病理反應(yīng)[34]。有報(bào)道證實(shí)，魚(yú)類肝損傷疾病的發(fā)生與氧化應(yīng)激反應(yīng)密切相關(guān)。Cao等[35]研究發(fā)現(xiàn)，甘草提取物對(duì)叔丁基氫過(guò)氧化物(t-BHP)可以導(dǎo)致建鯉肝產(chǎn)生大量自由基，造成肝細(xì)胞損傷。杜金梁等[36]研究發(fā)現(xiàn)，甘草提取物抗環(huán)境致毒物二噁英造成的魚(yú)肝損傷也與氧化應(yīng)激存在關(guān)聯(lián)。在本研究中，投喂高脂飼料90 d后，羅非魚(yú)肝勻漿中GSH活性、SOD活性、T-AOC水平均降低，MDA含量升高，表明高脂飼料誘導(dǎo)羅非魚(yú)肝發(fā)生了氧化應(yīng)激反應(yīng)，使羅非魚(yú)機(jī)體氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)出現(xiàn)失衡，導(dǎo)致羅非魚(yú)肝受損傷，肝中各生化指標(biāo)隨之發(fā)生變化。當(dāng)飼料中加入不同濃度甘草總黃酮后，各藥物實(shí)驗(yàn)組羅非魚(yú)肝GSH活性、SOD活性和T-AOC水平均不同程度升高，MDA含量降低。這說(shuō)明甘草總黃酮可以幫助機(jī)體抵抗氧化應(yīng)激造成的損害，減少自由基的產(chǎn)生，維持機(jī)體平衡狀態(tài)。

3.3 甘草總黃酮對(duì)羅非魚(yú)肝中核轉(zhuǎn)錄因子蛋白水平的影響

NF-κB作為核轉(zhuǎn)錄因子，其家族成員眾多，NF-κB P65和C-Rel是學(xué)者們研究比較多的2個(gè)家庭成員。已經(jīng)有大量文獻(xiàn)報(bào)道NF-κB信號(hào)通路與肝疾病的發(fā)生發(fā)展存在關(guān)聯(lián)[37-38]，肝受損傷后核轉(zhuǎn)錄因子會(huì)被激活。如郭威等[39]發(fā)現(xiàn)，L-谷氨酰胺可以抑制小鼠肝中NF-κB P65蛋白的表達(dá)；劉英娟等[40]發(fā)現(xiàn)，低濃度的槲皮素可抑制NF-κB P65和C-Rel蛋白表達(dá)。本研究結(jié)果與劉英娟等[40]的報(bào)道類似，高脂飼料顯著誘導(dǎo)了羅非魚(yú)肝中NF-κB P65蛋白和C-Rel蛋白表達(dá)，表明高脂飼料引起肝受損后激活了羅非魚(yú)肝中核轉(zhuǎn)錄因子，造成肝內(nèi)蛋白的分泌和合成出現(xiàn)異常。飼料中在加入甘草總黃酮后，NF-κB p65蛋白和C-Rel蛋白表達(dá)不同程度降低，這說(shuō)明甘草總黃酮對(duì)高脂飼料造成的羅非魚(yú)肝核轉(zhuǎn)錄因子蛋白表達(dá)具有一定抑制作用，能促進(jìn)脂蛋白在肝內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝，可以減輕肝損傷。

3.4 甘草總黃酮對(duì)羅非魚(yú)肝中極低密度脂蛋白組裝相關(guān)基因表達(dá)的影響

MTTP和ApoB100基因同屬于卵黃蛋白原家族成員，是肝中脂蛋白分泌和代謝所必需的重要轉(zhuǎn)移蛋白，它們?cè)诰S持肝正常生理功能方面發(fā)揮著重要作用[41]。MTTP基因主要通過(guò)與載脂蛋白B共同作用來(lái)實(shí)現(xiàn)肝中脂質(zhì)蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)肝中MTTP基因表達(dá)水平降低時(shí)，載脂蛋白B的合成量也會(huì)隨著降低，肝脂質(zhì)代謝會(huì)出現(xiàn)紊亂，引發(fā)脂肪肝疾病的發(fā)生[42-43]。本研究也出現(xiàn)類似結(jié)果，高脂飼料投喂羅非魚(yú)后，MTTP和ApoB100 mRNA表達(dá)水平均降低，這說(shuō)明高脂飲食造成羅非魚(yú)肝中脂類合成和代謝出現(xiàn)障礙，肝中脂類物質(zhì)不能及時(shí)轉(zhuǎn)運(yùn)，造成脂類物質(zhì)在肝中不斷蓄積。在高脂飼料中加入甘草總黃酮干預(yù)后，MTTP和ApoB100 mRNA表達(dá)水平升高，這表明甘草總黃酮可以促進(jìn)脂類物質(zhì)在羅非魚(yú)肝中轉(zhuǎn)運(yùn)，緩解脂類物質(zhì)在肝中不斷蓄積所造成的損害。

綜上，長(zhǎng)時(shí)間投喂高脂飼料可以造成羅非魚(yú)肝氧化應(yīng)激損傷，而飼料中添加0.50 g·kg-1甘草總黃酮對(duì)高脂飲食造成的肝損傷有一定的緩解作用，可以促進(jìn)脂類物質(zhì)的快速代謝，避免脂類物質(zhì)的持續(xù)聚集所造成的損害，減輕肝炎癥反應(yīng)，增強(qiáng)羅非魚(yú)機(jī)體的抗氧化能力。本研究結(jié)果對(duì)后期開(kāi)發(fā)治療羅非魚(yú)脂肪肝藥物具有一定的指導(dǎo)意義，甘草總黃酮具體藥理作用還需進(jìn)一步研究。