人參皂苷抗小鼠皮膚衰老的實(shí)驗(yàn)研究與分析

吳紀(jì)凱

(蘇州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇 蘇州　215009)

人參皂苷抗小鼠皮膚衰老的實(shí)驗(yàn)研究與分析

吳紀(jì)凱

(蘇州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇 蘇州215009)

摘要：目的研究人參皂苷對(duì)小鼠皮膚衰老的抑制作用。方法選擇60只雌性醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)用小鼠，隨機(jī)分為正常組、衰老組和人參皂苷組(n=20)，以對(duì)比實(shí)驗(yàn)的方法，收集相關(guān)的數(shù)據(jù)，比較人參皂苷在抑制小鼠皮膚衰老中的效果。結(jié)果人參皂苷組小鼠較衰老組而言，SOD、皮膚羥脯氨酸、CAT和GSH-Px含量顯著上升，MDA含量顯著降低，差異具有顯著性(P<0.05)。結(jié)論人參皂苷對(duì)小鼠皮膚衰老有顯著的抑制作用。

關(guān)鍵詞：人參皂苷；小鼠皮膚衰老；抑制作用

人參皂苷含有RH2、RG、RB、RC等多種化學(xué)成分，其中，內(nèi)含的RG1物質(zhì)具有延緩衰老的作用，被認(rèn)為是延緩皮膚衰老，抗氧化的天然極品。本文以醫(yī)用小鼠為對(duì)象，采用對(duì)比實(shí)驗(yàn)法，觀察人參皂苷在抑制小鼠皮膚衰老中所起到的作用。現(xiàn)將相關(guān)的實(shí)驗(yàn)過程和結(jié)果報(bào)道如下。

1材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、儀器與試劑雌性醫(yī)學(xué)小鼠60只，平均年齡為3月，平均體重為25g。主要實(shí)驗(yàn)儀器為：FA1004型電子分析天平、HH-420型三用恒溫?cái)?shù)顯控溫水浴箱(、DHG-9075A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、內(nèi)切式組織勻漿機(jī)。主要實(shí)驗(yàn)試劑為：人參皂甙、D-半乳糖、硫代巴比妥酸、L-羥脯氨酸、鹽酸芐胺、四乙二氧基丙烷、5,5-二硫二硝基苯甲酸、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和過氧化氫酶(CAT)(上?；鈱?shí)業(yè)有限公司)試劑盒、考馬斯亮藍(lán)G250、超氧化物歧化酶試劑盒(上海博升生物科技有限公司)。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1動(dòng)物分組及樣本培植將60只小鼠隨機(jī)分為3組：正常組、衰老組和人參皂苷組(n=20)。正常組小鼠每日頸背部皮下注射等容積滅菌生理鹽水，衰老組小鼠注射12.5%D-半乳糖(1000 mg/kg-1)并每日灌胃等容積滅菌生理鹽水，人參皂苷組小鼠在注射12.5%D-半乳糖(1000 mg/kg-1)的基礎(chǔ)上，每日增加灌胃人參皂苷(100 mg/kg·d-1)。上述實(shí)驗(yàn)過程持續(xù)45天，以實(shí)現(xiàn)樣本培植。

1.2.2樣本取材方案45天后，采用頸椎猝死法處理所有小鼠，并對(duì)小鼠血液中的CAT、SOD等指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。此外，取每只小鼠背部脫毛后皮膚組織0.6 g左右，利用內(nèi)切式組織勻漿機(jī)制作成10%皮膚組織勻漿，用于測(cè)定小鼠的皮膚羥脯氨酸含量。

1.3數(shù)據(jù)測(cè)定

1.3.1全血GSH-Px、CAT活力數(shù)據(jù)測(cè)定參照上?；鈱?shí)業(yè)有限公司CAT、GSH-Px試劑盒說明書方法測(cè)定CAT、GSH-Px活力。

1.3.2皮膚勻漿MDA、SOD及CAT活力數(shù)據(jù)測(cè)定參照上海博升生物科技有限公司試劑盒使用說明方法測(cè)定SOD數(shù)據(jù)，硫代巴比妥酸[TBA]法測(cè)定MDA數(shù)據(jù)，CAT活力數(shù)據(jù)則參照上海基免實(shí)業(yè)有限公司試劑盒使用方法測(cè)定。

1.3.3皮膚羥脯氨酸含量數(shù)據(jù)測(cè)定首先，取小鼠背部皮膚脫毛并除去結(jié)締組織后，進(jìn)行脫脂，采用DHG-9075A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱進(jìn)行80度烘干，精密稱重50 mg，滴入6 mol/L HCl 2 ml，放入烤箱中進(jìn)行水解(24 h)。其次，取水解液0.5 ml將其PH值調(diào)節(jié)至6~8之間，定容15ml。再次，取0.2ml水解液，依次加入緩沖液1 ml,氯胺T 1ml,高氯酸1 ml,顯色劑1 ml,混勻,以60度恒溫進(jìn)行水浴。最后，15-20min后，以550nm波長(zhǎng)1cm光徑比色，空白調(diào)零，并配置標(biāo)準(zhǔn)曲線管。

1.4數(shù)據(jù)處理采用SPSS軟件對(duì)測(cè)定數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

小鼠全血中GSH-Px、CAT活力數(shù)據(jù)、皮膚勻漿MDA、SOD及CAT活力數(shù)據(jù)以及皮膚羥脯氨酸含量數(shù)據(jù)如下表所示：

表1　實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)表(P<0.05)

由表1可知，衰老組小鼠的GSH-Px、CAT、SOD和羥脯氨酸含量較正常組小鼠而言，呈現(xiàn)顯著降低態(tài)勢(shì)。以GSH-Px為例，從17.1±5.7 U/(mg.Hb)降低為9.2±5.7 U/(mg.Hb)。此外，人參皂苷組小鼠的GSH-Px、CAT、SOD和羥脯氨酸含量較衰老組小鼠而言，明顯上升，以GSH-Px為例，從9.2±5.7 U/(mg.Hb)上升為14.5±2.7 U/(mg.Hb)、而羥脯氨酸含量則由0.56±0.12 mg/g上升為0.78±0.13 mg/g，而MDA含量則顯著降低。

3討論

羥脯氨酸是皮膚膠原蛋白中的重要組成成分，GSH-PX是衡量集體抗過氧化能力的指標(biāo)之一，其含量下降對(duì)抑制衰老有著重要意義。CAT是過氧化物酶體的標(biāo)志酶，約占過氧化物酶體總量的40%，其酶促活性為機(jī)體提供了抗氧化防御機(jī)理，其含量上升對(duì)抑制皮膚衰老有積極效果。其含量下降對(duì)抑制皮膚細(xì)胞衰老有著重要價(jià)值。SOD能夠消除生物體在新陳代謝中產(chǎn)生的有害物質(zhì)，醫(yī)學(xué)研究已證實(shí)，其含量上升對(duì)延緩衰老有著重要作用。上述指標(biāo)可作為本實(shí)驗(yàn)中驗(yàn)證小鼠衰老程度的參照指標(biāo)。

D-半乳糖能夠使小鼠皮膚呈現(xiàn)快速衰老的趨勢(shì)，本實(shí)驗(yàn)中，通過對(duì)注射D-半乳糖小鼠GSH-Px、CAT等指標(biāo)的檢驗(yàn)，證實(shí)了這一結(jié)論。而通過對(duì)比衰老組和人參皂苷組小鼠的檢驗(yàn)指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，注射人參皂苷小鼠的GSH-Px、羥脯氨酸、CAT和SOD呈現(xiàn)明顯上升態(tài)勢(shì)，而MDA則出現(xiàn)了顯著下降，因此，可以判定：人參皂苷對(duì)于延緩和改善小鼠皮膚衰老有著積極的作用。

參考文獻(xiàn)：

[1]石楸鳴. 人參皂苷的藥理作用研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)藥房. 2010，31：124-126.

[2]崔巍,趙洪艷,王燕嬉. 人參皂甙抗衰老的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)老年學(xué)雜志. 2006，11：1042-1044.

中圖分類號(hào)：R927.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1004-7115(2015)04-0424-02

doi:10.3969/j.issn.1004-7115.2015.04.022

(收稿日期2015-1-19)