上部掛灰煙葉形成與蠟質(zhì)層的關(guān)系研究進展

孫皓月 史洪濤 顧會戰(zhàn) 謝良文

摘? ? 要：角質(zhì)蠟質(zhì)是植物在長期抗性生理過程中形成的次生代謝產(chǎn)物，也是導(dǎo)致上部葉掛灰，煙葉可用性降低的重要原因。為保障煙葉原料水平和經(jīng)濟效益，解決上部葉掛灰問題成為一種必然需求。本研究報告了目前國內(nèi)外上部葉掛灰煙形成機理、原因分析及蠟質(zhì)層對其影響的研究現(xiàn)狀，結(jié)合生產(chǎn)實際在已有研究文獻的基礎(chǔ)上總結(jié)出蠟質(zhì)層厚度含量、化學(xué)組分、結(jié)構(gòu)對煙葉掛灰造成的影響進行歸納總結(jié)。為調(diào)整烘烤工藝、揭示煙葉蠟質(zhì)層調(diào)控機制、培育不易掛灰新品種提供參考。

關(guān)鍵詞：上部葉;掛灰煙葉;蠟質(zhì)層

中圖分類號：S572? ? ? ? ? 文獻標(biāo)識碼：A? ? ? ? ?DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2021.10.015

Research Progress on the Relationship? between the Formation of? Upper Browning Tobacco Leaves and the Wax

SUN Haoyue1， SHI Hongtao2， GU Huizhan2， XIE Liangwen3

（1.Henan Agricultural University， Zhengzhou，Henan 450000，China; 2.Guangyuan Tobacco Company of Sichuan Province，Guangyuan，

Sichuan 628000， China; 3. Sichuan Branch of China National Tobacco Company， Chengdu， Sichuan 610000， China）

Abstract： As a secondary metabolite generated by plants in the long-term resistance physiological process， cutin wax was considered an important factor in causing the browning on upper leaves and reducing usability of tobacco leaves. In order to guarantee the quality level and economic benefits of tobacco raw materials， it has become an inevitable demand to solve the problem of the browning on the upper tobacco leaves. This study reviewed the current status of domestic and foreign research on the formation mechanism， cause analysis， and the influence of waxy layer on the upper leaf browning. Then， combined with the actual production， based on the existing research literature， it summarized the influence of the thickness， content， chemical composition and structure of the waxy layer on the formation of the browning on tobacco leaves. The study aimed to provide references for adjusting the curing process， discovering the regulation mechanism of the waxy layer of tobacco leaves， and cultivating new varieties that are not prone to be browned.

Key words： upper leaves; browning tobacco; wax

上部葉占烤煙整株的1/3，其質(zhì)量影響著烤煙總體產(chǎn)量。由于上部葉濃度厚實飽滿，香氣濃郁，為卷煙產(chǎn)品增質(zhì)提香，改善吃味，對凸顯與鞏固卷煙牌號香型和品質(zhì)起著非常重要的作用[1]。但我國上部葉生產(chǎn)中存在的問題較多，葉片組織密而厚，成熟慢，主要體現(xiàn)在青、雜、僵，尤其是上部葉雜色（以掛灰煙為主）和葉片僵硬等問題仍未得到有效地解決。目前，我國上部葉質(zhì)量和可用性發(fā)展受到限制，與國外卷煙配方中上部煙葉占到整個煙葉使用率高達40%的比例相差較大[2]。

掛灰煙一直是煙葉烘烤的研究重點。在實際生產(chǎn)中，由褐變反應(yīng)而導(dǎo)致的煙葉掛灰是制約煙葉可用性的重要原因之一[3]，同時煙葉顏色是煙草外觀質(zhì)量評價的重要指標(biāo)，也是煙葉分級、煙葉評價標(biāo)準(zhǔn)、打葉配方質(zhì)量控制等方面的重要依據(jù)。從國內(nèi)烤煙生產(chǎn)一線研究人員發(fā)表的科技論文來看，掛灰煙的形成機制比較復(fù)雜，既與栽培條件有關(guān)，也受煙葉烘烤過程影響，具體表現(xiàn)為地域環(huán)境條件和微環(huán)境的變換;異常氣候變化;烤煙品種和葉片著生部位的不同，尤其是上部葉最容易掛灰;栽培條件和煙農(nóng)種植習(xí)慣的差異;煙葉成熟狀態(tài)和編裝煙的差異;烘烤工作人員對烘烤工藝和烘烤設(shè)施設(shè)備的熟悉掌握程度等?？偟膩碚f，這些復(fù)雜因素糅合在一起，導(dǎo)致對掛灰煙認識不足，發(fā)生機理不明，試驗重復(fù)困難，更難以提出系統(tǒng)的掛灰煙消減技術(shù)與對策，指導(dǎo)生產(chǎn)困難。因此，有待對上部葉掛灰問題進行深入、系統(tǒng)的研究。

1 掛灰煙形成的機理

烘烤過程中由于褐變的發(fā)生導(dǎo)致煙葉正表面出現(xiàn)局部或全部的灰色、深褐色斑點，稱之為掛灰。褐變是普遍存在的一種變色現(xiàn)象，在對食品、植物加工或貯藏的過程中，細胞不可避免受到損傷，酚類物質(zhì)發(fā)生氧化，色澤變暗，這些顏色變化都屬于褐變[4]。褐變按其發(fā)生的機理可分為酶促褐變與非酶促褐變。

1.1 煙葉的酶促褐變

在1883年Yoghid發(fā)現(xiàn)某種活性物質(zhì)可以使漆樹汁變硬后，由Betrand首次研究出這是一種酶蛋白，并在40年后由Keilind等研究出多酚氧化酶的分離過程，為酶促棕色化反應(yīng)的研究打下基礎(chǔ)[5]。酶促棕色化反應(yīng)是綠色植物細胞的一種正常生理生化反應(yīng)， 對提高植物抗性、調(diào)節(jié)光合作用等方面具有積極作用[6]。酶作為植物細胞中呼吸作用的轉(zhuǎn)遞介質(zhì)，維持醌類與酚類化合物的動態(tài)平衡，當(dāng)這種動態(tài)平衡被打破，酚類物質(zhì)迅速轉(zhuǎn)變成大量醌，醌的聚化或結(jié)合成黑褐色聚合物造成了褐變現(xiàn)象。由于多酚氧化酶、多酚類底物、氧3個條件同時具備才可能發(fā)生酶促褐變反應(yīng)，所以一般發(fā)生在含有活性酶的組織或鮮活的植物組織中[7]。煙葉內(nèi)富含多種酚類物質(zhì)和多酚氧化酶，在調(diào)制、烘烤、陳化等加工過程中，內(nèi)部酚、醌含量由于多酚氧化酶的作用下導(dǎo)致其失衡，煙葉外觀呈現(xiàn)褐色細小斑塊，如同蒙上一層灰一樣，通常先出現(xiàn)在葉尖或葉基部。在烘烤過程中由于氣候、成熟度、病害、烘烤工藝不完善等因素等造成煙葉掛灰等問題通常出現(xiàn)在煙葉變黃末期和定色期，變黃期煙葉變黃與失水不協(xié)調(diào)，定色期溫度驟升驟降都易造成煙葉掛灰。煙葉中多酚類物質(zhì)持續(xù)被氧化，氧化還原失衡，被氧化成的醌類物質(zhì)聚合產(chǎn)生黑色沉淀[8]。此時由于煙葉內(nèi)含物質(zhì)的不斷消耗，導(dǎo)致葉片變薄，重量減輕，煙葉柔韌性變差，光澤不鮮亮，煙葉底色微灰，質(zhì)量下降。

1.2 煙葉的非酶促褐變

在植物、食品加工與貯存過程中，常發(fā)生與酶無關(guān)的褐變，稱為非酶促褐變。非酶促褐變包括美拉德反應(yīng)、抗壞血酸氧化分解、多元酚氧化縮合反應(yīng)、焦糖化反應(yīng)及金屬離子引起的褐變等[10]。在煙葉的調(diào)制、發(fā)酵、醇化等加工過程中非酶促棕色化反應(yīng)均有發(fā)生，均為美拉德反應(yīng)。美拉德反應(yīng)是煙草特征香味形成的主要來源之一，對煙草中美拉德反應(yīng)的研究最早可追溯到20世紀(jì)末[11]。目前，美拉德反應(yīng)機理以Hoge提出的初級階段、高級階段、終級階段三階段分類最為經(jīng)典[12-13]。糖類和氨基酸縮合環(huán)化，經(jīng)過海因式重排與阿馬杜里重排形成阿馬杜里中間產(chǎn)物，在不同pH值條件下發(fā)生，經(jīng)過斯特雷科爾降解、分子脫氫、異構(gòu)化等一系列復(fù)雜反應(yīng)，最終形成黑色的大分子物質(zhì)，稱為類黑素[14-16]。在煙葉調(diào)制階段，大分子物質(zhì)的不斷降解導(dǎo)致美拉德反應(yīng)產(chǎn)物含量大量積累，且呈動態(tài)變化，其產(chǎn)物可以賦予煙葉特殊的香味，提升煙葉柔和度，改善煙氣吃味。

2 上部葉掛灰的原因分析

根據(jù)國內(nèi)外關(guān)于掛灰煙的研究和烘烤實踐中的研究發(fā)現(xiàn)，煙葉以上部葉最易掛灰。一般來說上部煙葉片較厚，干物質(zhì)積累多，束縛水含量高，葉綠素含量高，多酚類物質(zhì)多，多酚氧化酶活性高，這些因素是上部煙難烤的物質(zhì)基礎(chǔ)，而且上部煙在田間時間長，易受到氣候影響與病害的影響，遇到冷氣候，形成“冷害煙葉”;遇到降水，形成“返青煙葉”;病害容易發(fā)生;形成“病害煙葉”;以上外因均是上部煙成為烘烤中“問題煙”的外部因素。

2.1 鮮煙葉素質(zhì)是影響上部煙葉掛灰的首要因素

黑暴煙葉：韓錦峰等[17]研究發(fā)現(xiàn)黑暴煙含水量高，成熟時落黃差，田間鮮煙葉的多酚氧化酶活性較高，同時在烘烤過程的定色中后期失水率低，且多酚氧化酶依舊保持高活性并最終形成掛灰。也有研究發(fā)現(xiàn)黑暴煙在烘烤過程中前72 h含水率普遍偏高，葉片失水困難，且PPO活性顯著高于正常煙葉，烘烤過程中極易變褐掛灰[18]。

冷害煙葉：張樹堂[19]總結(jié)出在煙葉成熟期時氣溫下降使煙葉受冷害，煙葉內(nèi)含物質(zhì)轉(zhuǎn)換被擾亂而產(chǎn)生田間“冷掛灰”。這是高海拔煙區(qū)上部煙葉產(chǎn)生灰色煙的主要原因，特別是9月中旬以后采收的煙葉，由于溫度降低極易產(chǎn)生“冷掛灰”。在緯度高的煙區(qū)，影響更為明顯。鄒陽等[20]研究發(fā)現(xiàn)高海拔低氣溫導(dǎo)致煙葉在田間成熟度較低，成熟期推遲干物質(zhì)積累減少，烘烤后期常出現(xiàn)嚴重掛灰和青黃煙。四川煙草所在近年的研究中也發(fā)現(xiàn)，四川高海拔地區(qū)廣元和涼山，在9月份后，由于溫度下降較快，上部葉掛灰現(xiàn)象嚴重，這和云南院的結(jié)果相一致。

過熟煙葉：何偉等[21]研究發(fā)現(xiàn)一旦煙葉過熟，在田間或者烤房過多地消耗葉片內(nèi)部的營養(yǎng)物質(zhì)，導(dǎo)致葉片的細胞間隙增大，組織疏松，如果變黃期稍長，容易造成“饑餓掛灰”。

未熟煙葉：未熟煙葉含水量高，導(dǎo)致烘烤過程中變黃末期至定色PPO活性增高，煙葉由于組織結(jié)構(gòu)緊密變黃中后期失水速度較慢，多酚氧化酶的高活性導(dǎo)致未熟煙葉的烤后煙掛灰率明顯高于成熟煙葉[22]。

病害煙葉：據(jù)部分煙區(qū)反映，染病烤煙，如根結(jié)線蟲輕微發(fā)生的狀態(tài)，即使鮮煙葉看不出癥狀，烘烤過程中可出現(xiàn)斑點狀的掛灰現(xiàn)象，這與病害破壞煙葉細胞組織結(jié)構(gòu)緊密相關(guān)。一般情況下開片好，大田抗病性較強病害發(fā)生情況較少的上部葉，掛灰程度也明顯減輕[23-24]。

機械損傷煙葉：在加工過程中機械損傷破壞了膜的完整性， 促進了植物細胞的膜脂過氧化作用，導(dǎo)致H2O2等活性氧大量積累，破壞了細胞內(nèi)活性氧的平衡，膜脂過氧化作用中的最主要產(chǎn)物MDA積累加速了植物的褐變[25]。采收與運輸過程中，如果磨傷擦傷煙葉，造成機械損傷。損傷部分煙葉的細胞組織就會破裂，呼吸速率升高，膜脂過氧化造成多酚類物質(zhì)流出，烘烤過程易造成掛灰雜色。

2.2 烘烤環(huán)節(jié)中葉片的水分散失和掛灰關(guān)系密切

主要體現(xiàn)在黃干不協(xié)調(diào)上，呂作新等[9]研究發(fā)現(xiàn)關(guān)鍵期的葉片含水量與煙葉掛灰問題緊密相關(guān)，指出煙葉進入干葉中后期時，葉片的脫水率一般不低于鮮煙葉飽和含水量的30%，如果沒達到這一標(biāo)準(zhǔn)，干球溫度超過46 ℃的話，可以在短時間形成掛灰。旱天煙葉的水分含量較少，束縛水比例相對增高，自由水比例降低，煙葉組織結(jié)構(gòu)緊密，烘烤時易出現(xiàn)回青或掛灰[26]。尤其是上部葉，蠟質(zhì)較多，氣孔窄小，煙葉烘烤過程中排濕困難，煙葉支脈變黃順利，但失水程度達不到勾尖卷邊狀態(tài)，即黃干不協(xié)調(diào)，失水達不到要求，此時快速升溫易產(chǎn)生掛灰煙[27]。在煙葉烘烤過程中，不同成熟度煙葉水分含量的不同造成多酚氧化酶活性、多酚類物質(zhì)積累規(guī)律的不同影響著煙葉在變黃末期到定色前期酶促棕色化反應(yīng)[28]。一方面，也體現(xiàn)在裝煙上，如果上部煙裝煙量過大，水分難脫，掛灰煙葉時常出現(xiàn)[29]。近年來，在前期的研究中也發(fā)現(xiàn)，在烘烤過程中，當(dāng)采摘的上部葉失水速度較慢，更容易形成掛灰煙。因此，葉片失水速率是影響掛灰煙形成的最重要因素之一。

3 蠟質(zhì)層是影響上部葉掛灰的主要原因

覆蓋于植物地上器官，用于抵御干旱、高溫低溫、病蟲害等的保護屏障被稱為角質(zhì)膜。 植物角質(zhì)膜從結(jié)構(gòu)可分為3部分， 蠟質(zhì)層位于最外層，由鑲嵌于角質(zhì)層內(nèi)部的內(nèi)層蠟質(zhì)和覆蓋于角質(zhì)層外部的表皮蠟質(zhì)組成，占整個角質(zhì)膜的10%。植物蠟質(zhì)的合成和運輸需要不同細胞器和多種酶復(fù)合體的共同參與，是一個非常復(fù)雜的過程[30]。關(guān)于植物蠟質(zhì)層的生物合成機制已有較完善的研究，主要集中在模式植物擬南芥上。研究表明，植物表皮蠟質(zhì)的合成主要通過脫羰基化和?；€原途徑將超長鏈脂肪酸合成各種蠟質(zhì)組分，這些蠟質(zhì)組分通過ABC轉(zhuǎn)運蛋白家族的活性蛋白由質(zhì)膜輸出至細胞外基質(zhì)，釋放蠟質(zhì)化合物[31]。此外，徐靜等[32]的研究表明溫度、光照和水分等環(huán)境因子的變化在很大程度上會影響到植物表皮蠟質(zhì)合成的生物過程，進而影響蠟質(zhì)層各組分的含量與分布。

為更好適應(yīng)陸地生活，表皮蠟質(zhì)覆蓋于所有陸生植物地上部分各器官和組織表面，介于自然環(huán)境與生物環(huán)境之間，是植物組織與外界自然環(huán)境的第一接觸面，為植物適應(yīng)環(huán)境、抵抗各種生物與非生物脅迫、進行自我防護提供重要保障[33]。由多種疏水有機物混合組成與疏水結(jié)構(gòu)的保護層覆蓋，形成了植物表皮蠟質(zhì)，其最基本生理功能就是防止體內(nèi)水分的非氣孔性散失，以降低水分的蒸騰作用[34]。一般認為，表皮蠟質(zhì)的含量與厚度會影響到植物的水分蒸騰，植物的蠟質(zhì)含量高其耐旱能力也較強。葉小利等[35]對大豆的研究發(fā)現(xiàn)，在受到水分脅迫時，葉片表皮蠟質(zhì)含量較高的品種，其表皮蒸騰速率也保持在相對較低水平;Premachandra等[36]對玉米葉片的研究表明，植物耐旱能力通常與其葉片表皮蠟質(zhì)含量成正比;在張海祿等[37]的研究中，抗旱大麥品種葉片表皮的蠟質(zhì)含量在其受干旱脅迫初期變化明顯，推測表皮蠟質(zhì)含量的迅速增加可能是植物為抵抗干旱而進行自身調(diào)節(jié)的重要表現(xiàn)。這些結(jié)果都表明葉片蠟質(zhì)層的含量和厚度可能影響葉片水分的散失，從而調(diào)控植物的耐旱能力。目前，人們對于植物表皮蠟質(zhì)層保水性能的研究不僅從表皮蠟質(zhì)的厚薄程度與含量方面，蠟質(zhì)組分與結(jié)構(gòu)也起到了重要作用。

角質(zhì)蠟質(zhì)在植物長期的生態(tài)適應(yīng)過程中，不僅在抗旱保水中具有重要的生態(tài)學(xué)功能，其組成成分與結(jié)構(gòu)在植物逆境抵御、病蟲害防衛(wèi)等抵御惡劣生態(tài)環(huán)境及生物非生物脅迫中也起著關(guān)鍵性作用[38-39]。植物角質(zhì)層蠟質(zhì)主要包括脂肪族化合物和環(huán)狀化合物，脂肪族化合物主要由長鏈（大于C18）脂肪酸、超長鏈（C24～C36）脂肪酸、烷烴類、酯類、醇類、醛類、酮類等一系列疏水性物質(zhì)組成;環(huán)狀化合物包括酚類、酯類、黃酮類等。其化學(xué)組成復(fù)雜，且其組分含量、形態(tài)結(jié)構(gòu)隨生育時期變化而有所差異[40-41]。角質(zhì)蠟質(zhì)能夠有效阻止植物中水分非氣孔性散失，其保水性功能的主導(dǎo)因素比較復(fù)雜。不僅與蠟質(zhì)含量與厚度有關(guān)，蠟質(zhì)的組成成分與結(jié)構(gòu)也具有決定性作用。有研究表明蠟質(zhì)中烷烴類物質(zhì)與葉片保水性密切相關(guān)，在限制水分蒸騰上扮演重要角色[42]。Gerd V等[43]的研究發(fā)現(xiàn)，番茄果實中蠟質(zhì)的化學(xué)成分對表皮水分散失程度起決定性作用，蠟質(zhì)中脂肪族化合物是防止水分蒸騰的重要影響因素，而三萜類化合物等環(huán)狀組分的保水性能相對較弱;Oliveira等[44]通過對比發(fā)現(xiàn)兩地區(qū)植被中，蠟質(zhì)的化學(xué)組分是決定蒸發(fā)阻力程度的一個重要因素。

作為植物面對環(huán)境的“第一保護層”，蠟質(zhì)層會通過改變自身晶體結(jié)構(gòu)形態(tài)與化學(xué)組分構(gòu)建防御機制以減輕外界不利環(huán)境因子的脅迫。在煙草的表皮蠟質(zhì)層組成成分中烷烴類物質(zhì)占主導(dǎo)地位，初級醇與三萜類化合物含量較少，與果蔬等片狀、小棒狀、線狀、管狀等結(jié)構(gòu)不同，煙葉上下表皮蠟質(zhì)呈無裂紋、無晶體狀且較平滑的薄膜狀[33]。上部葉中蠟質(zhì)含量較多，在烘烤過程中由于內(nèi)部多酚類物質(zhì)氧化成醌類物質(zhì)，易出現(xiàn)淺灰色、灰褐色的褐變斑點，出現(xiàn)掛灰現(xiàn)象。煙葉在烘烤過程中隨著溫度的升高，蠟質(zhì)的分泌不斷增多，蠟質(zhì)結(jié)構(gòu)改變表面褶皺聚積[45]。Cgjuste等[46]發(fā)現(xiàn)，通過乙烯處理增加果實表皮蠟質(zhì)層含量，并引起表皮蠟質(zhì)形態(tài)變化，果實表皮蠟質(zhì)形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變有助于減少非冷害果皮的褐斑。李生娥等[47]通過對蘋果梨研究發(fā)現(xiàn)，使用HWD處理后果實表皮蠟質(zhì)溶化，減少了網(wǎng)狀裂紋的蠟質(zhì)結(jié)構(gòu)，降低組織中的通氧量來延緩了蘋果梨的成熟和衰老，并減少表皮褐變現(xiàn)象。在儲存過程中，蠟質(zhì)層結(jié)構(gòu)的改變影響著果皮的褐變面積[48]，套袋處理可以降低蠟質(zhì)含量，改變蠟質(zhì)結(jié)構(gòu)，影響果實抗逆性與褐變程度[49]。另外，套袋與否對蠟質(zhì)的化學(xué)組分種類和鏈長有明顯的影響，經(jīng)套袋處理的果實表皮蠟質(zhì)C30飽和鏈烷酸豐度明顯減少，從而改變果實衰老進程[50]?？梢娤炠|(zhì)層不僅能夠通過非氣孔性散失影響植物的褐變與衰老，化學(xué)組分與結(jié)構(gòu)也參與了植物的防御反應(yīng)。

隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，人們對植物角質(zhì)蠟質(zhì)對褐變影響的認知也不斷深入。有研究發(fā)現(xiàn)褐變處理后的茶樹新梢組織，物理防御可能被激活，通過滲透調(diào)節(jié)角質(zhì)蠟質(zhì)以抵御逆境脅迫[51]。關(guān)于改善上部葉掛灰的研究，主要涉及烤煙品種、成熟度、采收方式、烘烤工藝等方面，從蠟質(zhì)層方面研究仍然很不完善。至今關(guān)于烤煙蠟質(zhì)層的研究多基于烤煙蠟質(zhì)層本身結(jié)構(gòu)、成分的研究，對于改善烤煙蠟質(zhì)層來調(diào)控?zé)熑~失水特性以及蠟質(zhì)層化學(xué)組分和結(jié)構(gòu)對掛灰影響的研究還未見報道。而在實際烘烤生產(chǎn)過程中，蠟質(zhì)層嚴重阻礙了煙葉變黃與失水協(xié)調(diào)性，單從烘烤工藝、烤房環(huán)境等方面進行探索研究并不能改善煙葉本身的失水特性。

4 結(jié) 語

綜上所述，雖然國內(nèi)外已對掛灰形成機理和技術(shù)進行了探索，對掛灰煙的“酶促棕色化反應(yīng)”進行了豐富的研究，并結(jié)合實際生產(chǎn)中遇到的情況進行了解釋，但鑒于生產(chǎn)中掛灰煙形成原因的復(fù)雜性，葉片蠟質(zhì)層含量、化學(xué)組分與結(jié)構(gòu)怎樣影響煙葉的失水速率，導(dǎo)致葉片掛灰的理論方面還缺乏深入系統(tǒng)的研究。因此，筆者認為應(yīng)加強以下3個方面的研究。

（1）加強烤煙表皮蠟質(zhì)層的組成成分、厚度與形態(tài)結(jié)構(gòu)方面的研究，明確蠟質(zhì)層影響煙葉失水特性途徑、方式，探究蠟質(zhì)層與烘烤特性的關(guān)系，為調(diào)整烘烤工藝打下基礎(chǔ)。

（2）一方面加強成熟期蠟質(zhì)層的變化規(guī)律及其影響因素的研究，蠟質(zhì)通過應(yīng)對干旱、溫度等多種非生物脅迫來適應(yīng)環(huán)境的變化。探明環(huán)境因子對蠟質(zhì)層形成的影響，明確主效因。例如，四川涼山煙區(qū)，海拔較高，上部葉發(fā)育后期溫度的降低是影響葉片蠟質(zhì)層形成的主要因素;另一方面，探索采后煙葉蠟質(zhì)層變化規(guī)律與溫度和時間的關(guān)系，為烤煙后熟技術(shù)提供理論參考。

（3）開展對煙葉表皮蠟質(zhì)層合成調(diào)控機制的研究。不同品種植物蠟質(zhì)層轉(zhuǎn)錄途徑也不相同，目前在擬南芥、水稻、水果等植物中角質(zhì)蠟質(zhì)物理抗性與化學(xué)抗性作用已有較完善研究，但煙草中哪些蠟質(zhì)組分誘導(dǎo)提高了煙葉的抗性，哪些轉(zhuǎn)錄因子參與了煙葉蠟質(zhì)代謝調(diào)控，其作用機制仍未完全闡明，僅僅研究這些蠟質(zhì)基因的調(diào)控是不夠的。因此，需要認識到蠟質(zhì)合成的復(fù)雜性，尋找篩選其調(diào)控因子，隨著現(xiàn)代分子技術(shù)手段的發(fā)展和蠟質(zhì)相關(guān)基因的克隆，利用瞬時表達和轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究果實蠟質(zhì)合成關(guān)鍵基因的功能，進一步揭示這些基因?qū)麑嵄砥は炠|(zhì)合成的調(diào)控機制，從而培育出不易掛灰的烤煙新品種，對未來農(nóng)業(yè)生產(chǎn)具有深遠的科學(xué)意義和應(yīng)用前景。

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