卡式微柱凝膠試驗(yàn)在臨床輸血檢驗(yàn)中的應(yīng)用

呂騰騰

芮城縣人民醫(yī)院，山西 運(yùn)城 044600

輸血是指將一個(gè)人身上抽取的血液輸入需要的患者體內(nèi)的過(guò)程，其不僅關(guān)系到患者生命安全，與其預(yù)后同樣密切相關(guān)。為確保輸血成功，捐贈(zèng)者與接收者的血型必須相容，否則接收者血液內(nèi)原本存在的抗體會(huì)攻擊外來(lái)血細(xì)胞，進(jìn)而出現(xiàn)血凝塊，嚴(yán)重威脅到患者的生命安全，故輸血前開(kāi)展檢驗(yàn)有著非常重要的意義［1］。傳統(tǒng)的輸血檢驗(yàn)方法包括酶法、鹽水介質(zhì)法等，上述方式雖然可達(dá)到檢驗(yàn)效果，但容易受到外界因素干擾，降低檢驗(yàn)準(zhǔn)確率，并且較復(fù)雜的操作過(guò)程會(huì)錯(cuò)過(guò)最佳治療時(shí)間，不利于患者轉(zhuǎn)歸。隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展進(jìn)步，操作簡(jiǎn)單、靈敏度高的卡式微柱凝膠試驗(yàn)被逐漸用于輸血檢驗(yàn)中。本次研究就該試驗(yàn)的實(shí)際效果展開(kāi)探究，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 儀器樣本準(zhǔn)備

1.1 儀器和檢測(cè)卡

本次試驗(yàn)所用抗人球蛋白卡為長(zhǎng)春博研生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，該檢測(cè)卡系在聚丙烯塑料透明卡上的六支微柱形管中填充葡萄糖凝膠和抗人球蛋白（多抗），凝膠微管分為反應(yīng)腔和凝膠分離柱。上腔部分或封口處有氣泡或滴液的卡，必須在使用前離心。本次試驗(yàn)所用不規(guī)則抗體檢測(cè)試劑為長(zhǎng)春博訊生物技術(shù)有限責(zé)任公司，該套試劑由3人份（單人份/瓶）直接抗人球蛋白試驗(yàn)陰性的O型健康成人紅細(xì)胞組成，紅細(xì)胞上含有能引起輸血性溶血反應(yīng)的抗原，抗原譜至少包括Rh系統(tǒng)的D、C、E、c、e抗原，Kidd系統(tǒng)的Jka、Jkb抗原，MNS系統(tǒng)的M、N、s抗原，Kell系統(tǒng)的K抗原，Duffy系統(tǒng)的Fya、Fyb抗原，Lewis系統(tǒng)的Lea、Leb抗原，P系統(tǒng)的P1抗原。每套試劑紅細(xì)胞中至少有2人份紅細(xì)胞含有D、C、c、e、s、Fya、K抗原，至少1人份紅細(xì)胞含有E、Jka、Jkb、M、N、Fyb、Lea、Leb、P1抗原。本次試驗(yàn)所用儀器是長(zhǎng)春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn)的TD-A型醫(yī)用離心機(jī)、FYQ型試劑卡孵育器。

1.2 樣本要求

紅細(xì)胞樣本：用紫色帽含EDTA抗凝劑的血常規(guī)管采集被檢對(duì)象靜脈血，該標(biāo)本不能放入4℃～10℃冰箱保存，以避免紅細(xì)胞在患者體外致敏所致假陽(yáng)性反應(yīng)，紅細(xì)胞標(biāo)本一定不能被細(xì)菌污染，否則出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)。盡可能應(yīng)用當(dāng)日采集的新鮮血液做本試驗(yàn)。如不得不用過(guò)夜血或者陳舊血，則必須首先用該標(biāo)本做陰性試驗(yàn)對(duì)照，以確定該標(biāo)本是否可以完成本次試驗(yàn)。溶血、嚴(yán)重脂血、或被污染的樣本不得用于此次試驗(yàn)。將標(biāo)本配置成紅細(xì)胞低離子溶液懸液，紅細(xì)胞最終濃度為0.5%～0.8%。濃度過(guò)高或過(guò)低的紅細(xì)胞懸液會(huì)引起異常結(jié)果。

血清樣本：采集被檢對(duì)象靜脈血，注入無(wú)抗凝劑試管中，4℃放置12小時(shí)，或者37℃放置2小時(shí)候后離心，2 000 rpm，10分鐘，取上清，該上清不得有絮狀物或者沉淀。血清標(biāo)本必須充分去除纖維蛋白，否則標(biāo)本中析出的或者紅細(xì)胞懸液中殘留纖維蛋白可阻礙紅細(xì)胞沉降，使非凝集細(xì)胞離心后在膠體表面形成一條紅線，呈假陽(yáng)性反應(yīng)。

2 資料與方法

2.1 一般資料

采取隨機(jī)數(shù)表法將在醫(yī)院需接受輸血治療的126例患者分為兩組，每組各63例，一組為應(yīng)用鹽水凝集法檢測(cè)血型抗原的對(duì)照組，另一組采取卡式微柱凝膠試驗(yàn)檢測(cè)血型抗原，設(shè)為的研究組，患者資料整理時(shí)間為2019年12月—2020年12月。對(duì)照組男、女分別為33例、30例，年齡20～74歲，平均年齡（46.82±5.37）歲；研究組男、女分別為31例、32例，年齡21～75歲，平均年齡（46.76±5.44）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）經(jīng)體檢滿足輸血要求者；（2）非稀有血型患者；（3）簽署知情同意書(shū)者。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）認(rèn)知障礙患者；（2）血液系統(tǒng)異?；颊撸唬?）各系統(tǒng)腫瘤或癌癥患者（4）妊娠期或哺乳期婦女。兩組一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），有可比性。

2.2 方法

2.2.1 保證試驗(yàn)采集的血清標(biāo)本均無(wú)不規(guī)則抗體 本次試

驗(yàn)在采集126例標(biāo)本前均對(duì)患者血清做了不規(guī)則抗體篩查試驗(yàn)。詳細(xì)如下：（1）將抗人球蛋白檢測(cè)卡做好患者的名字，編號(hào)標(biāo)記。（2）將4%不規(guī)則抗體檢測(cè)試劑（人血紅細(xì)胞）用LISS溶液稀釋到濃度0.8%，將50 ul（1滴）0.8%I、II、III型檢測(cè)紅細(xì)胞分別加入對(duì)應(yīng)的微管中。（3）將50 ul（1滴）患者的血清分別加入標(biāo)記I、II、III的微管中。（4）將加好紅細(xì)胞和血清的檢測(cè)卡放置到FYQ型孵育器中37℃孵育15分鐘。（5）孵育完成后用卡式法專用離心機(jī)離心機(jī)（TD-A型醫(yī)用離心機(jī)）離心。（6）肉眼觀察檢測(cè)卡的結(jié)果。本次不規(guī)則抗體篩查試驗(yàn)結(jié)果：對(duì)于本次試驗(yàn)的126份標(biāo)本，肉眼觀察到的紅細(xì)胞與血清結(jié)合物（抗原抗體復(fù)合物）均無(wú)有效形成，紅細(xì)胞全部明顯沉于微管底部，說(shuō)明本次126份患者血清標(biāo)本均無(wú)不規(guī)則抗體。

2.2.2 對(duì)照組采取鹽水凝集法檢測(cè)血型抗原 應(yīng)用玻片法或試管法促進(jìn)細(xì)胞凝集。研究組行卡式微柱凝膠試驗(yàn)，詳細(xì)如下：應(yīng)用凝聚胺試劑進(jìn)行配血操作，儀器選擇卡式微柱凝膠免疫卡、紅細(xì)胞血型免疫試劑及譜細(xì)胞等，機(jī)體存在可與試劑中Fc反應(yīng)的指示性紅細(xì)胞，若被檢測(cè)的血清中存在抗血小板抗體，則會(huì)有新的復(fù)合物產(chǎn)生，此時(shí)添加有著聚集作用的交聯(lián)試劑可形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。而卡式微柱凝膠系統(tǒng)柱子有離心力，形成的網(wǎng)狀復(fù)合物在與凝膠表層產(chǎn)生作用后可與紅細(xì)胞分離。由于不同血液標(biāo)本結(jié)合情況不一樣，也會(huì)表現(xiàn)出差異性的陽(yáng)性凝聚情況［2］。嚴(yán)格依照規(guī)范流程展開(kāi)相關(guān)操作，在試管內(nèi)加入0.6%氯化鈉溶液進(jìn)行正定型、反定型檢驗(yàn)。在卡式微柱凝膠管上做標(biāo)記并配置紅細(xì)胞懸浮液，在A、B兩管中加入50μl配置好的紅細(xì)胞懸浮液，取兩管中20μl溶液加入到已標(biāo)記的式微柱凝膠管中，并取50μl待檢血清及抗D血清加入到D試管中，在A1管中加入A、B型紅細(xì)胞懸液各50μl，在B1管中加入待測(cè)樣品。在37℃下孵育10 min，將50μl混合血小板的O型血加入凝膠管中并在900～1 000 r/min下離心，得到最終檢驗(yàn)結(jié)果［3］。

2.3 觀察指標(biāo)

（1）檢驗(yàn)符合率，包括正定型及反定型。正定型：研究組顯示柱內(nèi)凝膠與部分或全部紅細(xì)胞結(jié)合；對(duì)照組顯示紅細(xì)胞發(fā)生凝集。反定型：研究組表現(xiàn)為管內(nèi)紅細(xì)胞完全沉淀到柱子底部；對(duì)照組顯示紅細(xì)胞表現(xiàn)為游離狀態(tài)。（2）不良反應(yīng)情況，包括乏力、頭暈、胸悶等。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 檢驗(yàn)符合率

與對(duì)照組比較，研究組正定型及反定型符合率均更高（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 檢驗(yàn)符合率比較 例（%）

3.2 不良反應(yīng)

與對(duì)照組比較，研究組不良反應(yīng)發(fā)生率更低（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 不良反應(yīng)發(fā)生率比較 例（%）

4 討論

在輸血治療前，血型檢驗(yàn)可避免溶血、血栓等抗凝反應(yīng)發(fā)生，確保輸血安全性。同時(shí)，臨床也要保障輸血的及時(shí)性，若無(wú)法及時(shí)糾正血容量不足情況，也會(huì)導(dǎo)致較高的致殘率和死亡率。但傳統(tǒng)的鹽水法在檢驗(yàn)時(shí)容易受到外界因素影響，難以保障檢驗(yàn)準(zhǔn)確性，同時(shí)其自動(dòng)化程度較低，操作過(guò)程復(fù)雜，人工因素影響較大，不利于在最佳救治時(shí)間窗內(nèi)完成輸血治療［4］。傳統(tǒng)的鹽水法只能檢測(cè)出血清里的完全抗體IgM，不能檢測(cè)出患者血清中存在的不完全抗體IgG。作為一種新型的輸血檢驗(yàn)方法，卡式微柱凝膠試驗(yàn)?zāi)芙柚⑿∧z顆粒構(gòu)成的濾網(wǎng)及離心操作來(lái)分離血液中的紅細(xì)胞及非凝聚紅細(xì)胞，隨后利用計(jì)算機(jī)顯示不同紅細(xì)胞圖譜，在嚴(yán)格比對(duì)后可實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化解讀，快速準(zhǔn)確的完成血清配對(duì)。與傳統(tǒng)方法相比，卡式微柱凝膠試驗(yàn)自動(dòng)化程度高、檢驗(yàn)準(zhǔn)確率高，可檢測(cè)出患者血清中的完全抗體IgM和不完全抗體IgG，可有效提升輸血安全性。本次研究中，兩組分別采取鹽水凝集法及卡式微柱凝膠試驗(yàn)進(jìn)行檢驗(yàn)后，研究組正定型、反定型符合率更高，輸血不良反應(yīng)發(fā)生率更低。

綜上所述，在輸血檢驗(yàn)中，卡式微柱凝膠試驗(yàn)具有操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確率高，檢測(cè)影響因素少，特異性強(qiáng)，敏感性高，易于觀察等特點(diǎn)，可有效提升輸血安全性，可作為血型鑒定和交叉配血的首選方法，因此更值得推廣。