趨化因子配體檢測對新生兒B族鏈球菌早發(fā)型敗血癥的預測價值

夏家敏，溫冬梅，馬娟萍，張 蓉，于 英，倪 倩

（1甘肅省酒泉市人民醫(yī)院兒科，甘肅酒泉 735000；2蘭州大學第二醫(yī)院兒童醫(yī)院兒科，蘭州 730000)

新生兒早發(fā)型敗血癥（early-onset sepsis，EOS）是出生后7 d 內發(fā)生的較嚴重的感染性全身性疾病，病死率較高[1]。B族鏈球菌（Group B streptococcus，GBS）是寄生在人下消化道、泌尿生殖道中的一種條件致病菌。數(shù)據(jù)顯示，我國孕婦GBS 帶菌率約10%～32%，而因妊娠特殊陰道環(huán)境，GBS 感染成為新生兒EOS 的常見、主要病因[2-3]。目前培養(yǎng)法是臨床診斷新生兒GBS EOS 的“金標準”，盡管特異性高，但診斷周期長，不利于醫(yī)師早期對病情評估，且無法滿足當前“治未病”理念需求。趨化因子是由細胞分泌的一類信號蛋白或小細胞因子，具有誘導反應細胞定向趨化的能力，且其通過配體與受體結合可發(fā)揮促炎反應、損傷修復、控制細胞遷徙等多種生物活性，其中趨化因子CX3C配體3（CX3CL3）、趨化因子CXC 配體9（CXCL9）、趨化因子CXC 配體10（CXCL10）是近年在感染性疾病領域研究較多的趨化因子配體家族成員[4-5]。但有關上述趨化因子配體與新生兒GBS EOS間關系的研究報道較少，故本研究旨在探究CX3CL3、CXCL9、CXCL10對新生兒GBS EOS的預測價值，為臨床完善相關診療機制提供參考?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2018年2月-2021年2月甘肅省酒泉市人民醫(yī)院90例血培養(yǎng)陽性的GBS EOS 新生兒作為研究組，以1:1 配對原則選取孕母GBS 定植新生兒90 例作為對照Ⅰ組、正常新生兒90 例作為對照Ⅱ組。納入標準：對照Ⅰ組母親孕期確診GBS 定植，出生后7 d 內新生兒未見感染癥狀；研究組、對照Ⅰ組孕35～37 周時GBS 篩查確診GBS 定植；研究組出生后3 d 內出現(xiàn)嗜睡或煩躁不安，黃疸，進奶量降低或拒乳等癥狀，經(jīng)外周血常規(guī)、細菌培養(yǎng)檢查符合《新生兒敗血癥診斷及治療專家共識（2019 年版）》[6]診斷標準；對照Ⅱ組母親孕35～37周時GBS 篩查陰性，身體健康無感染性疾病，且新生兒健康狀態(tài)良好；研究組、對照Ⅰ組均在產(chǎn)時靜脈用青霉素G 預防性治療；孕母、家屬知情理解本研究，簽署同意書。排除標準：存在其他病原體感染者；畸形兒；有代謝性遺傳疾病者；孕母存在結締組織病、腫瘤等嚴重疾病者。本研究經(jīng)甘肅省酒泉市人民醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審核通過（審批文號：2018L-921）。

1.2 方法新生兒娩出斷臍后即刻采用抗凝真空管采集臍動脈血3 mL，離心（轉速4 000 r/min，時間15 min，半徑10 cm），采集上層清液，分別采用上海超研生物科技有限公司酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑盒測CX3CL3 水平；采用上海晶抗生物工程有限公司酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑盒測CXCL9、CXCL10 水平。均由檢驗科資深檢驗技師參照試劑盒說明書操作。

1.3 觀察指標（1）對比3組趨化因子配體水平。（2）對比研究組不同孕母狀況及臨床特征患兒臍動脈血指標水平。（3）分析趨化因子配體預測新生兒GBS EOS的價值。

1.4 統(tǒng)計學處理采用SPSS 25.0 軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料以n（%）描述，采用χ2檢驗，計量資料采用Bartlett 方差齊性檢驗與Kolmogorov－Smirnov 正態(tài)性檢驗，均確認具備方差齊性且近似服從正態(tài)分布，以（±s）描述，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩組間比較采用LSD-t檢驗；受試者工作特征曲線(ROC)分析預測價值。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 一般情況研究組男性52 例，女性38 例，胎齡28～41周，平均（38.06±1.15）周，孕母年齡23～34歲，平均（28.91±2.33）歲。對照Ⅰ組男性49 例，女性41例，胎齡29～41 周，平均（38.13±1.13）周，孕母年齡22～32 歲，平均（28.33±2.17）歲。對照Ⅱ組男性51例，女性39 例，胎齡30～41 周，平均（38.22±1.09）周，孕母年齡24～34歲，平均（28.29±2.17）歲。3組性別、胎齡、孕母年齡均衡可比（P>0.05）。

2.2 3 組趨化因子配體水平比較研究組臍動脈血CX3CL3、CXCL9、CXCL10水平高于對照Ⅰ組、對照Ⅱ組，差異有統(tǒng)計學意義；對照Ⅰ組臍動脈血CXCL9、CXCL10 水平高于對照Ⅱ組，差異有統(tǒng)計學意義（t=20.233，P<0.001；t=16.149，P<0.001）；對照Ⅰ組、對照Ⅱ組臍動脈血CX3CL3 水平對比，差異無統(tǒng)計學意義（t=1.162，P=0.246），見表1。

表1 3組趨化因子配體水平比較（±s）

表1 3組趨化因子配體水平比較（±s）

組別研究組對照Ⅰ組對照Ⅱ組FP例數(shù)90 90 90 CX3CL3/（pg/dL）130.56±23.73 101.55±21.63 97.85±18.36 63.327<0.001 CXCL9/（pg/mL）316.58±46.29 261.77±52.34 125.86±34.77 427.378<0.001 CXCL10/（pg/mL）115.52±32.79 98.29±25.86 36.79±14.63 236.210<0.001

2.3 研究組不同孕母狀況及臨床特征患兒臍動脈血指標水平比較研究組不同性別、胎齡、阿氏評分、體質量患兒臍動脈血CX3CL3、CXCL9、CXCL10 水平對比，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；不同病情程度、不同預后患兒及孕母是否胎膜早破、是否絨毛膜羊膜炎患兒臍動脈血CX3CL3、CXCL9、CXCL10 水平對比，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表2。

表2 研究組不同孕母狀況及臨床特征患兒臍動脈血指標水平對比（±s）

表2 研究組不同孕母狀況及臨床特征患兒臍動脈血指標水平對比（±s）

注：病情程度參考小兒危重病例評分表(PCIS)評價<71分極危重；71～80分危重；>80分非危重

臨床特征性別男 女胎齡/周<37≥37阿氏評分/分<7≥7體質量/g<2 500≥2 500病情程度極危重危重非危重不同預后病死存活孕母狀況胎膜早破是 否絨毛膜羊膜炎是 否n 52 38 31 59 65 25 27 63 21 46 23 23 67 19 71 21 69 CX3CL3/（pg/dL）128.66±16.73 133.16±17.22 133.58±18.86 128.97±15.37 131.29±18.50 128.74±17.31 134.26±15.63 128.97±17.29 140.86±11.23 130.57±16.82 121.14±15.37 143.25±10.22 126.20±14.89 139.65±10.35 128.13±11.28 141.25±9.65 127.31±12.38 t或F/P 1.245/0.217 1.249/0.215 0.596/0.553 1.368/0.175 9.080/<0.001 5.086/<0.001 4.019/<0.001 4.734/<0.001 CXCL9/（pg/mL）314.56±45.35 319.34±46.78 319.85±47.29 314.86±48.05 320.15±46.28 307.30±47.44 317.25±47.26 316.29±45.38 338.98±28.71 316.25±32.46 296.79±25.43 341.56±22.61 308.00±31.47 329.65±19.65 313.08±20.44 335.25±20.43 311.58±19.85 t或F/P 0.487/0.627 0.471/0.639 1.172/0.245 0.091/0.928 10.885/<0.001 4.707/<0.001 3.163/0.002 4.753/<0.001 CXCL10/（pg/mL）113.26±28.96 118.61±25.73 117.28±29.64 114.60±31.20 118.30±28.53 108.29±29.77 117.31±30.22 114.75±31.30 130.02±16.36 115.36±25.40 102.60±22.81 133.56±15.43 109.33±16.77 126.35±13.62 112.62±12.84 129.25±14.29 111.85±15.43 t或F/P 0.907/0.367 0.394/0.695 1.473/0.144 0.359/0.720 7.836/0.001 6.097/<0.001 4.088/<0.001 4.600/<0.001

2.4 趨化因子配體預測新生兒GBS EOS 的價值分析以研究組作為陽性數(shù)據(jù)，以對照Ⅰ組作為陰性數(shù)據(jù)，繪制臍動脈血CX3CL3、CXCL9、CXCL10 單獨及聯(lián)合預測新生兒GBS EOS 的ROC，結果顯示，上述指標聯(lián)合預測新生兒GBS EOS 的AUC 值0.899 大于單一指標預測（P<0.05），見圖1、表3。

圖1 ROC圖

表3 趨化因子配體預測新生兒GBS EOS的價值分析

3 討論

新生兒群體中GBS 感染所致EOS 發(fā)病率約1.6%～2.1%，但病死率可達20% 以上[7]。目前新生兒GBS EOS 尚無特效治療方案，而如何加強早期監(jiān)測，盡早干預是預防此疾病發(fā)生及確保新生兒生命安全的重要環(huán)節(jié)。

近年有關新生兒GBS EOS 的研究較多，主要集中在疾病診斷層面，盡管有研究提出，C-反應蛋白、降鈣素原等臍血促炎性細胞因子可應用于新生兒早期感染的預測，但尚未形成有效的預警機制[8]。趨化因子配體是能調節(jié)趨化因子誘導反應細胞定向趨化的一類細胞因子，參與機體多種重要生理功能。臨床廣泛證實，趨化因子配體檢測在感染性疾病診斷中具有重要參考價值[9-10]。CX3CL3、CXCL9、CXCL10是近年研究較多的趨化因子配體家族主要成員，本研究在規(guī)范病例選取標準后發(fā)現(xiàn)，孕母GBS 定植時上述指標在臍動脈血中含量異常，且發(fā)生EOS 的新生兒異常程度更顯著。CX3CL3 是具趨化功能及黏附功能的細胞因子，其在炎癥反應中發(fā)揮重要作用。李曉曉等[11]通過檢測感染及健康新生兒臍動脈血CX3CL3 水平發(fā)現(xiàn)，二者并無差異，感染新生兒腦脊液CX3CL3 水平顯著升高。本研究發(fā)現(xiàn)對照Ⅰ組、對照Ⅱ組臍動脈血CX3CL3 水平間無明顯差異（P>0.05），與上述研究一致，但本研究發(fā)現(xiàn)EOS 的新生兒臍動脈血CX3CL3 水平高于對照Ⅰ組、對照Ⅱ組，尤其是孕婦發(fā)生胎膜早破及出現(xiàn)絨毛膜羊膜炎的患兒臍動脈血CX3CL3 水平升高更顯著（P<0.05），分析可能是胎膜早破及出現(xiàn)絨毛膜羊膜炎均是誘發(fā)EOS 的危險因素，當二者單獨或同時發(fā)生時可加重機體炎癥反應并誘導血管內皮細胞表達CX3CL3，提示外周血CX3CL3 或可為臨床評估新生兒GBS EOS 發(fā)生風險提供參考。

此外，CXCL9、CXCL10 是巨噬細胞極化過程所招募趨化因子配體成員，其主要作用是激活機體免疫系統(tǒng)，對抗病原體入侵[12-13]。林彥青等[14]在研究中提出，GBS 在宮內定植狀態(tài)時，休眠狀態(tài)的巨噬細胞M0 即向M1 極化并招募附近CXCL9、CXCL10 以激活免疫系統(tǒng)發(fā)揮抗感染、抗炎作用。由此推測新生兒臍動脈血CXCL9、CXCL10 水平或可為臨床完善感染狀態(tài)評價機制提供參考。本研究發(fā)現(xiàn)，研究組臍動脈血CXCL9、CXCL10 水平高于對照Ⅰ組、對照Ⅱ組，對照Ⅰ組高于對照Ⅱ組（P<0.05），提示臍動脈血CX?CL9、CXCL10 水平變化可能與新生兒GBS EOS 發(fā)生發(fā)展有關，且與CX3CL3 對比在鑒別GBS 感染中敏感性可能更佳。上述推測得到證實。結合現(xiàn)有研究分析可能是CXCL9、CXCL10 在宮內感染早期即可通過巨噬細胞極化過程異常表達，而CX3CL3 僅當血管內皮出現(xiàn)嚴重炎性損害時才急劇表達，同時不難發(fā)現(xiàn)三者在評價新生兒GBS EOS 發(fā)生發(fā)展中或可互為補充，為臨床評估病情程度等提供參考[15-17]。本研究進一步ROC 分析顯示，上述指標聯(lián)合預測新生兒GBS EOS 的AUC 大于單一指標預測（P<0.05），客觀說明CX3CL3、CXCL9、CXCL10 可為臨床評估新生兒GBS EOS 發(fā)生風險提供參考，尤其是孕母存在胎膜早破、絨毛膜羊膜炎等高危因素時更需注重CX3CL3、CX?CL9、CXCL10 的檢測以加強GBS EOS 發(fā)生風險防控。但新生兒GBS EOS 存在多種不同的臨床表現(xiàn)，而本研究不足之處在于，未探明不同臨床表現(xiàn)間臍動脈血CX3CL3、CXCL9、CXCL10 水平是否存在差異，需后期進一步探討。

綜上可知，CX3CL3、CXCL9、CXCL10可能參與新生兒GBS EOS 的發(fā)病，聯(lián)合檢測上述因子水平對新生兒GBS EOS 的發(fā)病風險有較高的預測價值，有助于臨床及早制訂防治措施。