食品中黃曲霉毒素B1檢測方法研究

王媛

摘 要：自然界中的寄生曲霉菌和黃曲霉菌分泌出的黃曲霉毒素為次級代謝產(chǎn)物，易對糧食作物及其制品構(gòu)成污染，其存在范圍多在霉變的玉米、大米及花生等作物及其制品中。黃曲霉毒素毒性和致癌性極強，特別是黃曲霉毒素B1，會對人們的健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。近年來，食品安全領(lǐng)域中，已將黃曲霉毒素B1納入重點關(guān)注范圍內(nèi)。本文在闡述食品中黃曲霉毒素B1檢測重要性的基礎(chǔ)上，分析了幾種常用的檢測方法，以供參考與借鑒。

關(guān)鍵詞：食品;黃曲霉毒素B1;檢測方法

當(dāng)前，人們高度重視食品安全問題，在探索和研究各類食品安全檢測方法方面已取得了矚目成果。黃曲霉毒素B1的毒性和致癌性極強，通過污染糧食作物及其制品從而對人畜健康構(gòu)成威脅，需高度重視其檢測工作的開展。基于此，本文介紹了幾種用于檢測食品中黃曲霉毒素B1的方法。

1 食品中黃曲霉毒素B1檢測重要性

黃曲霉毒素B1的性質(zhì)穩(wěn)定，處于282 ℃的高溫下才會裂解，且持續(xù)2 h的高壓滅菌僅能降低其25%～33%的毒力，圖1是其結(jié)構(gòu)式。黃曲霉毒素B1的毒性會損害人及動物肝臟組織，甚至有可能引起肝癌，嚴(yán)重的情況下會導(dǎo)致死亡[1]。鑒于其致癌性極強的緣故，國家標(biāo)準(zhǔn)GB 2761—2017中明確規(guī)定了黃曲霉素B1的限量值，但食品具備復(fù)雜的基質(zhì)，在檢測食品中黃曲霉毒素B1時，必須使用靈敏度較高同時具備高度選擇性的方法，提高檢測結(jié)果精確性，以便保障人們的身體健康。

2 食品中黃曲霉毒素B1檢測方法

在檢測食品中黃曲霉毒素B1時，可供使用的方法有很多，本文主要介紹了電子鼻法、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、時間分辨熒光免疫分析法、酶聯(lián)免疫法及熒光分光光度法5種方法，并在表1中歸納了各種方法的優(yōu)劣勢。

2.1 電子鼻法

作為近年來新興檢測技術(shù)之一的電子鼻屬于電子感官儀，主要包含了傳感和自動化識別兩大系統(tǒng)。由于綜合應(yīng)用了數(shù)學(xué)、物理、材料、神經(jīng)及生理等諸多理論，能迅速完成復(fù)雜氣味和氣體的識別，通過氣味數(shù)學(xué)模型的構(gòu)建及應(yīng)用，完成霉變食物特殊氣味的檢測。該方法用于黃曲霉毒素檢測中，可通過對黃曲霉毒素污染后的糙米在酮、芳香烴、醛類揮發(fā)性物質(zhì)變化進(jìn)行檢測，以特征性氣味感知、不同氣味在傳感器響應(yīng)值方面的區(qū)別為根據(jù)，結(jié)合相應(yīng)的數(shù)學(xué)方法即可完成檢測[2]。根據(jù)該方法的檢測結(jié)果得知，電子鼻技術(shù)有極高的檢測準(zhǔn)確度。

2.2 高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

利用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測時，需結(jié)合色譜保留時間、質(zhì)譜碎片及其離子豐度比定性進(jìn)行測定。實際檢測中，存在干擾待測物質(zhì)離子化的相關(guān)因素，且自身待測物質(zhì)也可能會產(chǎn)生影響，降低或增加待測信號，形成基質(zhì)效應(yīng)。原因主要是生物樣品中內(nèi)源性成分的存在或融入樣品前處理中的外源性成分的影響。所以在樣品本身、基質(zhì)及前處理中，檢測結(jié)果會受到色譜條件及離子化模式的干擾，導(dǎo)致食品中黃曲霉毒素B1的檢測受到影響[3]。有研究采用該方法檢測黃曲霉毒素B1，結(jié)果表明，以甲醇和水60︰40的比例提煉樣品，采取黃曲霉毒素免疫親和柱凈化，流動相選擇0.1%的甲酸乙腈溶液和1%的甲酸水溶液，選擇平常模式下的電子噴霧離子源測定花生中黃曲霉毒素B1時，測得其含量范圍為0.1～56 ng/mL，具備較高的相關(guān)系數(shù)（0.999 45），檢測最低限和定量限分別為0.02 μg/kg、0.10 μg/kg。該結(jié)果證明了該方法在檢測復(fù)雜樣品中黃曲霉毒素時較為適用，且應(yīng)用價值較好。

2.3 時間分辨熒光免疫法

時間分辨熒光免疫法中的示蹤劑為具備獨特?zé)晒馓匦缘?價稀土離子及其螯合物，在完成抗體、抗原的標(biāo)記并在發(fā)生反應(yīng)體系后，通過TRFIA檢測儀對反應(yīng)物中熒光強度展開測定。該方法支持全自動操作，具備廣泛的應(yīng)用范圍，且操作流程短、有效期長、標(biāo)準(zhǔn)曲線量程寬[4]。采取該方法檢測食品中黃曲霉毒素B1時，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得知該方法具備0.01～30.00 μg/L的檢測范圍，靈敏度一般為0.02 μg/L，回收率91%～104%，適用于食品中黃曲霉毒素B1的檢測。

2.4 酶聯(lián)免疫吸附法

酶聯(lián)免疫吸附法建立在抗原抗體反應(yīng)理論的基礎(chǔ)上，通過單克隆或多克隆抗體技術(shù)的應(yīng)用檢測，原理是酶標(biāo)記的抗原抗體、吸附于載體上的免疫吸附劑和標(biāo)本中待測物之間形成特異免疫學(xué)反應(yīng)后，添加酶底物會有顯色反應(yīng)產(chǎn)生，根據(jù)反應(yīng)中顏色的深淺完成樣品中待測物含量的判斷[5]。該方法目前包含競爭法、間接法和抗體夾心法3種常用的測定方法。

在應(yīng)用該方法檢測時，由于酶活性極易受條件影響，因此測定結(jié)果一般不具備可觀的穩(wěn)定性，出現(xiàn)假陽性結(jié)果的可能極高，分析結(jié)果準(zhǔn)確性和精確度不高。同時，酶聯(lián)免疫試劑盒有著諸多種類，且不存在統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，具體使用前需要驗證試劑盒質(zhì)量、回收率和定量限，確保適用于本次檢測中。

2.5 熒光分光光度法

采用該方法檢測黃曲霉毒素B1時，由于黃曲霉毒素B1本身熒光活性偏低，選擇含有黃曲霉毒素的提取液通過免疫親和柱的凈化后，結(jié)合碘液或溴水展開衍生化反應(yīng)。反應(yīng)后，黃曲霉毒素B1會與G1衍生為熒光活性較高的穩(wěn)定形式，確定360 nm激發(fā)光、450 nm發(fā)射光的條件后，結(jié)合熒光分光光度計對黃曲霉毒素總量展開檢測。

近年來，有關(guān)黃曲霉毒素B1與G1的衍生方面研發(fā)了新方法，結(jié)合β-環(huán)糊精（β-CD）促成衍生反應(yīng)，在黃曲霉毒素B1衍生中應(yīng)用不同取代基的β-環(huán)糊精[6]。采取該方法檢測黃曲霉毒素B1時，通過羥乙基-β-環(huán)糊精（HE-β-CD）促成衍生化反應(yīng)后，在2～40 μg/kg，黃曲霉毒素B1與體系熒光間有良好的線性關(guān)系，檢出限0.079 μg/kg，相關(guān)系數(shù)0.999 8。

利用該方法分析花生樣品中黃曲霉毒素B1時，能獲取良好的精密度和準(zhǔn)確度。

3 結(jié)語

在檢測食品中黃曲霉毒素B1時，可供使用的方法諸多，且每種檢測方法都有獨特的優(yōu)點存在，但也存在一定的缺點。因此在具體檢測中，要求檢測機構(gòu)在遵循相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)及規(guī)定的基礎(chǔ)上，以自身條件為依據(jù)合理進(jìn)行檢測方法的選擇，并突出方法的高效率與高準(zhǔn)確度，保證檢測結(jié)果的精確性，保障人們的飲食安全。

參考文獻(xiàn)

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