• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    食品中霉菌檢測(cè)方法的改進(jìn)研究

    2021-10-29 03:23:41劉勝桃宋鴿王秀艷李慧娟常建軍王宏
    食品安全導(dǎo)刊 2021年10期
    關(guān)鍵詞:培養(yǎng)污染

    劉勝桃 宋鴿 王秀艷 李慧娟 常建軍 王宏

    摘 要:目的:研究一種可行、適用、準(zhǔn)確的霉菌檢測(cè)培養(yǎng)方法,來(lái)解決培養(yǎng)過(guò)程中培養(yǎng)基干裂、環(huán)境污染、菌落計(jì)數(shù)不準(zhǔn)確的問(wèn)題。方法:對(duì)膜包裹法、培養(yǎng)盒法、直接培養(yǎng)法3種方法進(jìn)行比較,來(lái)評(píng)價(jià)3種方法的可行性、適用性和準(zhǔn)確性。結(jié)果:采用直接培養(yǎng)法培養(yǎng)的空白和樣品出現(xiàn)較大程度的污染及干裂現(xiàn)象,膜包裹法、培養(yǎng)盒法培養(yǎng)的樣品未造成污染,培養(yǎng)基未干裂不影響菌落計(jì)數(shù)。結(jié)論:采用隔離的方法能夠有效控制培養(yǎng)基干裂和污染的問(wèn)題,提高菌落計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性,同時(shí)可避免霉菌孢子在培養(yǎng)、觀察過(guò)程中擴(kuò)散到環(huán)境中,造成污染,培養(yǎng)盒法較膜包裹法更方便、快捷、易觀察,是實(shí)驗(yàn)室值得推廣的培養(yǎng)方法。

    關(guān)鍵詞:霉菌;污染;干裂;隔離;培養(yǎng)

    霉菌是絲狀真菌的統(tǒng)稱(chēng),廣泛分布于土壤、水、空氣等自然環(huán)境中[1-3],因此食品極易被霉菌污染[4]。霉菌可引起食品、農(nóng)產(chǎn)品的發(fā)霉變質(zhì),霉菌毒素可導(dǎo)致慢性中毒具有致癌、致畸、致突變作用[5],可對(duì)人體健康造成危害[6-12]。霉菌的監(jiān)測(cè)也成為食品檢驗(yàn)技術(shù)與食品衛(wèi)生質(zhì)量評(píng)價(jià)中的重要組成部分[13-16],我國(guó)先后5次修訂了食品中霉菌計(jì)數(shù)的方法標(biāo)準(zhǔn)[17-21],據(jù)此我國(guó)各級(jí)監(jiān)督檢測(cè)機(jī)構(gòu)全面開(kāi)展食品中霉菌的檢測(cè)工作,自《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)》(GB 4789.15—2016)實(shí)施以來(lái)將原標(biāo)準(zhǔn)中倒置平板培養(yǎng)改成正置平板培養(yǎng),霉菌培養(yǎng)中的污染和培養(yǎng)基干裂現(xiàn)象頻發(fā),這主要是因?yàn)槊咕淇僧a(chǎn)生數(shù)量巨大的孢子,同時(shí)霉菌的孢子具有小、輕、干、多、休眠期長(zhǎng)和抗逆性強(qiáng)等特點(diǎn),任何一個(gè)孢子在適宜條件下都能發(fā)展成新的個(gè)體。常規(guī)霉菌檢測(cè)的培養(yǎng)過(guò)程中,以及觀察移動(dòng)過(guò)程中,不可避免地造成空氣流動(dòng),霉菌孢子可趁機(jī)飄散進(jìn)入空氣中并隨處散播、繁殖,引起嚴(yán)重的交叉污染和外部侵染[22]。又因霉菌的培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng),培養(yǎng)基在培養(yǎng)過(guò)程中水分損失較大,即使加大了培養(yǎng)基的傾注量,也無(wú)法避免培養(yǎng)基干裂,從而導(dǎo)致影響菌落計(jì)數(shù)的問(wèn)題,而目前這兩項(xiàng)常見(jiàn)且棘手的問(wèn)題始終困擾著相關(guān)人員,且無(wú)有效的控制

    措施。

    本實(shí)驗(yàn)室在日常霉菌檢測(cè)中采取兩種隔離培養(yǎng)方法,即膜包裹法、培養(yǎng)盒法,對(duì)霉菌孢子擴(kuò)散、污染及培養(yǎng)基干裂的控制效果顯著,且成本低廉,操作簡(jiǎn)便,對(duì)比《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 霉菌和酵母計(jì)數(shù)》(GB 4789.15—2016)(以下簡(jiǎn)稱(chēng)國(guó)標(biāo)法)的計(jì)數(shù)結(jié)果,探討霉菌檢測(cè)過(guò)程中隔離式培養(yǎng)方法的可行性、實(shí)用性和準(zhǔn)確性[23-27]。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    1.1.1 樣品來(lái)源

    霉菌和酵母質(zhì)控樣(QC-FD-020),來(lái)自中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院測(cè)試評(píng)價(jià)中心;霉菌和酵母質(zhì)控樣(A062018M),來(lái)自北京美正檢測(cè)技術(shù)有限公司。

    1.1.2 試劑

    孟加拉紅瓊脂,CM164,北京陸橋技術(shù)服務(wù)有限公司。

    1.1.3 耗材

    霉菌培養(yǎng)盒,食品級(jí)PVC材質(zhì),分為4個(gè)凹槽,凹槽與培養(yǎng)皿直徑及高度相匹配,每個(gè)凹槽有3個(gè)透氣孔,培養(yǎng)過(guò)程中形成有氧培養(yǎng)環(huán)境,此裝置為一次性使用,計(jì)數(shù)后的培養(yǎng)皿連同裝置一同高壓滅菌處理即可;保鮮膜或封口膜。

    1.2 儀器與設(shè)備

    BSC-1300IIB2生物安全柜(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠);SSW-600-2S恒溫水箱(上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠);MJX-250BⅢ霉菌培養(yǎng)箱(天津市泰斯特儀器有限公司);MSⅢ basic漩渦混合器(德國(guó)IKA)。

    1.3 實(shí)驗(yàn)方法

    1.3.1 膜包裹培養(yǎng)法

    稱(chēng)取25 g樣品加入225 mL無(wú)菌生理鹽水中,充分振搖,制成1∶10樣品勻液,取1∶10樣品勻液1 mL,加入含有9 mL無(wú)菌生理鹽水的試管中,旋渦混勻,制成1∶100的樣品勻液,同時(shí)做空白對(duì)照,及時(shí)傾注冷卻至46 ℃的孟加拉紅培養(yǎng)基,待瓊脂凝固后,在潔凈室中將平皿4~6個(gè)疊放,外層包裹保鮮膜或封口膜,在疊放的皿與皿之間用刀劃上長(zhǎng)約2 cm的透氣孔,每層劃2~3個(gè)透氣孔,正置平板,置(28±1)℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),同時(shí)以直接培養(yǎng)法的樣品作為對(duì)照,觀察并記錄培養(yǎng)至第5 d的結(jié)果。

    1.3.2 霉菌盒培養(yǎng)法

    稱(chēng)取25 g樣品加入225 mL無(wú)菌生理鹽水中,充分振搖,制成1∶10樣品勻液,取1∶10樣品勻液1 mL,加入含有9 mL無(wú)菌生理鹽水的試管中,旋渦混勻,制成1∶100的樣品勻液,同時(shí)做空白對(duì)照,及時(shí)傾注冷卻至46 ℃的孟加拉紅培養(yǎng)基,待瓊脂凝固后將平皿正置于霉菌盒中,每個(gè)槽可放置一個(gè)培養(yǎng)皿,將上蓋蓋嚴(yán)即可放入(28±1)℃培養(yǎng)箱培養(yǎng),同時(shí)以直接培養(yǎng)法的樣品做對(duì)照,觀察并記錄培養(yǎng)至第5 d的結(jié)果。

    1.3.3 直接培養(yǎng)法

    稱(chēng)取25 g樣品加入225 mL無(wú)菌生理鹽水中,充分振搖,制成1∶10樣品勻液,取1∶10樣品勻液1 mL,加入含有9 mL無(wú)菌生理鹽水的試管中,旋渦混勻,制成1∶100的樣品勻液,同時(shí)做空白對(duì)照,及時(shí)傾注冷卻至46 ℃的孟加拉紅培養(yǎng)基,待瓊脂凝固后,正置平板,置(28±1)℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),同時(shí)以直接培養(yǎng)法的樣品作對(duì)照,觀察并記錄培養(yǎng)至第5 d的結(jié)果。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 膜包裹培養(yǎng)法、霉菌盒培養(yǎng)法與直接培養(yǎng)法結(jié)果比較

    對(duì)8組不同類(lèi)型的樣品(已知不含菌樣品)進(jìn)行霉菌檢測(cè),同時(shí)監(jiān)控5組空白實(shí)驗(yàn),每組樣品每個(gè)稀釋度均進(jìn)行兩組平行檢測(cè),用膜包裹培養(yǎng)法和霉菌盒裝置培養(yǎng)的8組實(shí)驗(yàn)樣品及5組空白對(duì)照,均未出現(xiàn)污染、培養(yǎng)基干裂的情況,同時(shí)使用菌片法進(jìn)行檢驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果一致。而采用直接法培養(yǎng)的13組樣品,10組樣品出現(xiàn)不同程度的污染,部分培養(yǎng)基干裂,樣品污染情況占比69%,培養(yǎng)基干裂數(shù)量占

    比77%。

    實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,膜包裹培養(yǎng)法和霉菌盒裝置培養(yǎng)法均可將環(huán)境中的污染來(lái)源完全隔離,且可以保證在較長(zhǎng)的培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)降低培養(yǎng)基水分的損失。但霉菌盒裝置在結(jié)果觀察過(guò)程無(wú)需打開(kāi)培養(yǎng)盒,可直接透過(guò)培養(yǎng)盒清晰地對(duì)菌落進(jìn)行觀察計(jì)數(shù),達(dá)到從樣品培養(yǎng)到出具結(jié)果,最終到廢棄物處理環(huán)節(jié),培養(yǎng)物與外界環(huán)境始終保證有效的隔離,避免了環(huán)境、樣品、人員相互污染的風(fēng)險(xiǎn)。膜包裹培養(yǎng)法、霉菌盒正置培養(yǎng)法與直接法培養(yǎng)結(jié)果如表1所示。

    2.2 膜包裹培養(yǎng)法、霉菌盒培養(yǎng)法準(zhǔn)確性測(cè)試

    使用膜包裹培養(yǎng)法及霉菌盒培養(yǎng)法對(duì)6組不同特性區(qū)間及不同廠家的霉菌質(zhì)控樣品進(jìn)行檢測(cè),每組樣品、每個(gè)稀釋度均進(jìn)行兩組平行檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果均在質(zhì)控樣品特性區(qū)間,將膜包裹培養(yǎng)法得到的結(jié)果與霉菌盒培養(yǎng)法得到的結(jié)果配對(duì)T檢驗(yàn),P=0.18>0.05,表明無(wú)顯著性差異;培養(yǎng)過(guò)程中未出現(xiàn)培養(yǎng)基干裂及污染的現(xiàn)象,空白對(duì)照均無(wú)菌落生長(zhǎng),證明了兩種隔離培養(yǎng)方式不會(huì)對(duì)霉菌的生長(zhǎng)產(chǎn)生影響,如表2所示。

    3 結(jié)論與討論

    本研究通過(guò)對(duì)膜包裹法、霉菌盒培養(yǎng)法、直接培養(yǎng)法培養(yǎng)過(guò)程進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)膜包裹法、霉菌盒培養(yǎng)法可有效解決在培養(yǎng)過(guò)程中水分流失造成的培養(yǎng)基干裂問(wèn)題,且無(wú)污染,同時(shí)對(duì)質(zhì)控樣品檢測(cè)發(fā)現(xiàn)上述兩種隔離培養(yǎng)方式不影響菌落計(jì)數(shù),不影響霉菌的生長(zhǎng)。因膜包裹法觀察過(guò)程中需要將膜拆開(kāi),而霉菌盒培養(yǎng)法較膜包裹法的優(yōu)勢(shì)在于在觀察和計(jì)數(shù)過(guò)程中不需要打開(kāi)霉菌盒裝置,透過(guò)裝置可清晰對(duì)菌落進(jìn)行觀察計(jì)數(shù),從平板培養(yǎng)到最終廢棄物處置,培養(yǎng)物與外界環(huán)境始終保證有效的隔離措施,避免了環(huán)境、樣品、人員相互污染的風(fēng)險(xiǎn)。操作方便、成本低廉,霉菌培養(yǎng)盒也可應(yīng)用于培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)和(或)溫度較高的微生物檢測(cè)項(xiàng)目,例如嗜熱需氧芽孢檢測(cè)等,是實(shí)驗(yàn)室值得推廣的培養(yǎng)方法。

    參考文獻(xiàn)

    [1]WANG X,WU Q H,WAN D,et al.Fumonisins: oxidative stress-mediated toxicity and metabolism in vivo and in vitro[J].Archives of Toxicology,2016,90(1):81-101.

    [2]BHAT R,REDDY K R N.Challenges and issues concerning mycotoxins contamination in oil seeds and their edible oils: Updates from last decade[J].Food Chemistry,2017,215:425-437.

    [3]侯佳琪,王璐,何苗,等.糕點(diǎn)中霉菌的檢驗(yàn)和控制[J].食品安全導(dǎo)刊,2017(24):93.

    [4]韓濤,楊雪妮,張芳.霉菌檢測(cè)中封閉式培養(yǎng)方法的建立和應(yīng)用[J].食品科學(xué),2019,40(16):308-313.

    [5]張晨夕,韓陽(yáng),陳丹丹.紙張中霉菌檢測(cè)方法研究[J].黑龍江造紙,2019(2):18-24.

    [6]董曼佳,楊其亞,孫偉,等.拮抗酵母菌控制玉米赤霉烯酮的研究進(jìn)展[J].食品科學(xué),2016,37(1):230-234.

    [7]LIN P F,CHEN F L,SUN J,et al.Mycotoxin zearalenone induces apoptosis in mouse Leydig cells via an endoplasmic reticulum stress-dependent signalling pathway[J].Reproductive toxicology,2015,52:71-77.

    [8]GAO W,JIANG L P,GE L,et al.Sterigmatocystin-induced oxidative DNA damage in human liver-derived cell line through lysosomal damage[J].Toxicology in vitro,2015,29(1):1-7.

    [9]MCKEAGUE M,BRADLEY C R,DE GIROLAMO A,et al.Screening and initial binding assessment of fumonisin B1 aptamers[J].International Journal of Molecular Sciences,2010,11(12):4864-4881.

    [10]IQBAL S Z,JINAP S,PIROUZ A A,et al.Aflatoxin M1 in milk and dairy products, occurrence and recent challenges: a review[J].Trends in Food Science & Technology,2015,29(1):1-7.

    [11]CARVAJAL-MORENO M.Metabolic changes of aflatoxin B1 to become an active carcinogen and the control of this toxin[J].Immunome Research,2015,11(3):2-14.

    [12]SELVARAJ J N,WANG Y,ZHOU L,et al.Recent mycotoxin survey data and advanced mycotoxin detection techniques reported from China: a review.[J].Food Additives and Contaminants-Part A Chemistry,Analysis,Control,Exposure and Risk Assessment,2015,32(4):440-452.

    [13]韋尚偉.食品檢驗(yàn)技術(shù)中存在的問(wèn)題[J].現(xiàn)代食品,2017(5):61-63.

    [14]鄒軍.我國(guó)食品檢驗(yàn)技術(shù)中存在問(wèn)題及解決方法探析[J].科技創(chuàng)新與應(yīng)用,2016(8):297.

    [15]陳平燕.我國(guó)食品檢驗(yàn)技術(shù)中存在的問(wèn)題探析[J].廣東蠶業(yè),2017,51(10):94-95.

    [16]高景會(huì).食品安全檢測(cè)中存在的問(wèn)題及解決對(duì)策[J].現(xiàn)代食品,2017(8):12-13.

    [17]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 霉菌和酵母數(shù)測(cè)定:GB/T 4789.15—1984[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,1984.

    [18]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 霉菌和酵母數(shù)計(jì)數(shù):GB/T 4789.15—1994[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,1994.

    [19]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 霉菌和酵母數(shù)計(jì)數(shù):GB/T 4789.15—2003[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2003.

    [20]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 霉菌和酵母計(jì)數(shù):GB 4789.15—2010[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2010.

    [21]國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì).食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 霉菌和酵母計(jì)數(shù):GB 4789.15—2016[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2016.

    [22]劉永永,紀(jì)丹,劉曉海,等.生化培養(yǎng)箱內(nèi)部的循環(huán)風(fēng)向?qū)γ咕鷻z測(cè)結(jié)果的影響[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào),2020,11(1):262-268.

    [23]李若旦才讓.提高食品檢驗(yàn)準(zhǔn)確性的措施[J].食品安全導(dǎo)刊,2016(18):33.

    [24]陳創(chuàng)輝.食品檢驗(yàn)結(jié)果的影響因素及提高檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的措施[J].食品安全導(dǎo)刊,2018(18):57.

    [25]陳杰.科學(xué)做好食品安全檢驗(yàn)檢測(cè)工作[J].中國(guó)食品,2018(6):68-70.

    [26]徐慧萍,李翠霞.我國(guó)乳品質(zhì)量安全的影響因素分析[J].中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng),2012,18(8):5-8.

    [27]郭利亞,王加啟,李發(fā)弟.淺析我國(guó)生鮮乳質(zhì)量安全監(jiān)管及對(duì)策[J].中國(guó)畜牧雜志,2012,48(12):42-45.

    猜你喜歡
    培養(yǎng)污染
    什么是污染?
    什么是污染?
    堅(jiān)決打好污染防治攻堅(jiān)戰(zhàn)
    堅(jiān)決打好污染防治攻堅(jiān)戰(zhàn)
    武術(shù)搏擊訓(xùn)練的運(yùn)動(dòng)反應(yīng)能力探討
    科技視界(2016年21期)2016-10-17 20:35:15
    淺析加強(qiáng)物理實(shí)驗(yàn)教學(xué) 培養(yǎng)學(xué)生實(shí)驗(yàn)探究能力
    科技視界(2016年21期)2016-10-17 19:14:43
    高中數(shù)學(xué)邏輯思維能力的培養(yǎng)
    科技視界(2016年21期)2016-10-17 19:06:43
    淺析新形勢(shì)下航空計(jì)量人才培養(yǎng)
    科技視界(2016年21期)2016-10-17 16:40:21
    培養(yǎng)學(xué)生社會(huì)適應(yīng)能力的策略研究
    成才之路(2016年26期)2016-10-08 11:16:35
    創(chuàng)新人才培養(yǎng)理論研究現(xiàn)狀及未來(lái)研究方向
    成才之路(2016年25期)2016-10-08 09:46:28
    夜夜爽天天搞| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 99久久九九国产精品国产免费| 精品午夜福利视频在线观看一区| 欧美激情在线99| 热99在线观看视频| 国产91精品成人一区二区三区| 日本五十路高清| 在线观看免费视频日本深夜| 色综合婷婷激情| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 在线看三级毛片| 老鸭窝网址在线观看| 国产一区二区在线av高清观看| 少妇丰满av| 一区二区三区激情视频| 嫩草影视91久久| 老司机在亚洲福利影院| 国产熟女xx| 在线观看66精品国产| 麻豆成人av在线观看| 老司机在亚洲福利影院| 伊人久久精品亚洲午夜| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产精华一区二区三区| 久久久久久大精品| 午夜免费观看网址| 久久国产乱子伦精品免费另类| 日韩免费av在线播放| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 脱女人内裤的视频| 亚洲久久久久久中文字幕| 亚洲成人久久爱视频| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产高清有码在线观看视频| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲专区中文字幕在线| 一级黄色大片毛片| 婷婷亚洲欧美| 欧美日本视频| 窝窝影院91人妻| 一本精品99久久精品77| 国产v大片淫在线免费观看| 久久九九热精品免费| 91在线精品国自产拍蜜月 | 国产精品一区二区三区四区久久| 日本免费一区二区三区高清不卡| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲av五月六月丁香网| 欧美最新免费一区二区三区 | 国产亚洲欧美98| 国产日本99.免费观看| 国产成人aa在线观看| av片东京热男人的天堂| 色视频www国产| 国产欧美日韩一区二区精品| 久久九九热精品免费| 欧美成人一区二区免费高清观看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 久久性视频一级片| 精品久久久久久久久久久久久| 18禁美女被吸乳视频| 欧美在线一区亚洲| 国产精品 国内视频| 免费在线观看成人毛片| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 成年版毛片免费区| 一区二区三区高清视频在线| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| av国产免费在线观看| 麻豆国产97在线/欧美| 性色avwww在线观看| 国内精品久久久久久久电影| 亚洲人成网站高清观看| 国产精品电影一区二区三区| 我的老师免费观看完整版| 亚洲片人在线观看| 岛国视频午夜一区免费看| 国产黄a三级三级三级人| 波多野结衣高清作品| 十八禁网站免费在线| 亚洲av成人av| 国产精品女同一区二区软件 | 欧美性猛交黑人性爽| 亚洲av电影在线进入| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 国产欧美日韩精品亚洲av| 久久久久久久午夜电影| 少妇人妻一区二区三区视频| 日本黄大片高清| 国产亚洲精品av在线| 亚洲成av人片在线播放无| 两个人看的免费小视频| www国产在线视频色| 国产成人啪精品午夜网站| 少妇人妻精品综合一区二区 | 亚洲av不卡在线观看| 久久久国产成人精品二区| 国内精品久久久久久久电影| www国产在线视频色| 国产av一区在线观看免费| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 日韩欧美国产在线观看| 内地一区二区视频在线| 亚洲国产精品久久男人天堂| 亚洲久久久久久中文字幕| 亚洲第一电影网av| 久久伊人香网站| svipshipincom国产片| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 亚洲自拍偷在线| 色在线成人网| 亚洲国产精品sss在线观看| 人人妻人人澡欧美一区二区| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产精品一及| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 亚洲国产欧美人成| 亚洲av成人av| 久久精品影院6| 国产三级黄色录像| 一个人免费在线观看的高清视频| 午夜福利免费观看在线| 色综合站精品国产| 51午夜福利影视在线观看| 久久久久久久精品吃奶| 亚洲av熟女| 国产精品久久视频播放| 日韩高清综合在线| 青草久久国产| 免费在线观看成人毛片| 亚洲精品456在线播放app | 午夜福利高清视频| 一区二区三区高清视频在线| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 久久久精品欧美日韩精品| 亚洲av第一区精品v没综合| 禁无遮挡网站| 欧美另类亚洲清纯唯美| 男女那种视频在线观看| 亚洲av五月六月丁香网| 悠悠久久av| 午夜福利18| 亚洲精品粉嫩美女一区| 午夜老司机福利剧场| 性欧美人与动物交配| 中文字幕高清在线视频| 国产高潮美女av| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产精品一区二区三区四区久久| 18禁美女被吸乳视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产久久久一区二区三区| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 又黄又粗又硬又大视频| 手机成人av网站| 精品不卡国产一区二区三区| 免费在线观看日本一区| 欧美国产日韩亚洲一区| 在线播放国产精品三级| 老司机午夜福利在线观看视频| e午夜精品久久久久久久| 国产成人aa在线观看| 精品熟女少妇八av免费久了| 久9热在线精品视频| 国产亚洲欧美98| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产成+人综合+亚洲专区| 悠悠久久av| 亚洲美女黄片视频| 长腿黑丝高跟| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 日韩欧美三级三区| 久久精品综合一区二区三区| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产91精品成人一区二区三区| 国产免费av片在线观看野外av| av国产免费在线观看| 美女黄网站色视频| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产高清激情床上av| 宅男免费午夜| 在线免费观看的www视频| 婷婷六月久久综合丁香| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 久久久久久人人人人人| 91久久精品电影网| 91字幕亚洲| 小说图片视频综合网站| 日本免费一区二区三区高清不卡| 国产黄片美女视频| 日韩精品中文字幕看吧| 99久久九九国产精品国产免费| 手机成人av网站| 日本五十路高清| 90打野战视频偷拍视频| 欧美一区二区国产精品久久精品| 综合色av麻豆| 变态另类丝袜制服| 亚洲熟妇熟女久久| 露出奶头的视频| 久久香蕉国产精品| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲av成人av| 男女床上黄色一级片免费看| 宅男免费午夜| 欧美黑人欧美精品刺激| 在线免费观看的www视频| 国产高清视频在线观看网站| 国产精品免费一区二区三区在线| 色吧在线观看| 亚洲,欧美精品.| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 69人妻影院| 日本一二三区视频观看| 亚洲人与动物交配视频| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 美女高潮的动态| 国产精品一区二区免费欧美| 伊人久久精品亚洲午夜| 白带黄色成豆腐渣| 亚洲中文字幕日韩| 我的老师免费观看完整版| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产av在哪里看| 3wmmmm亚洲av在线观看| 色吧在线观看| 国产一区二区在线av高清观看| 一个人免费在线观看的高清视频| 亚洲av一区综合| 免费搜索国产男女视频| 麻豆成人午夜福利视频| 国产成人av教育| 成人18禁在线播放| 久久久久免费精品人妻一区二区| 久久精品91蜜桃| eeuss影院久久| 99久久精品热视频| 88av欧美| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产精品精品国产色婷婷| www.www免费av| 在线观看日韩欧美| 嫩草影院入口| 很黄的视频免费| 国产97色在线日韩免费| 中文在线观看免费www的网站| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产熟女xx| 国产精品99久久99久久久不卡| 最好的美女福利视频网| 免费在线观看影片大全网站| 91字幕亚洲| 香蕉av资源在线| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 欧美zozozo另类| 日韩亚洲欧美综合| 亚洲av免费高清在线观看| 精品国产三级普通话版| 九色成人免费人妻av| 亚洲国产精品成人综合色| 成人av在线播放网站| 成人18禁在线播放| 91在线观看av| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 精品久久久久久,| 婷婷六月久久综合丁香| 亚洲av美国av| 久久久精品欧美日韩精品| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 99在线视频只有这里精品首页| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 日本一本二区三区精品| 又黄又粗又硬又大视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 色哟哟哟哟哟哟| 村上凉子中文字幕在线| 午夜a级毛片| 久久久国产精品麻豆| 91久久精品国产一区二区成人 | 久99久视频精品免费| 最新在线观看一区二区三区| 精品无人区乱码1区二区| 成熟少妇高潮喷水视频| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 欧美日韩国产亚洲二区| 国产一区二区三区视频了| 美女免费视频网站| www.999成人在线观看| 最近视频中文字幕2019在线8| 真人一进一出gif抽搐免费| 免费在线观看日本一区| 国产三级中文精品| 久久精品影院6| 成人无遮挡网站| 女警被强在线播放| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 欧美最新免费一区二区三区 | 成年免费大片在线观看| 在线播放国产精品三级| 欧美+日韩+精品| 一区二区三区激情视频| 少妇人妻一区二区三区视频| 久久香蕉国产精品| 在线观看日韩欧美| 日韩欧美在线二视频| 亚洲午夜理论影院| 熟女电影av网| 搡老岳熟女国产| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲精品影视一区二区三区av| 可以在线观看的亚洲视频| 国产综合懂色| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲精品在线观看二区| 男女床上黄色一级片免费看| 69av精品久久久久久| 三级毛片av免费| 亚洲在线观看片| 国产精品乱码一区二三区的特点| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 欧美在线黄色| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 美女cb高潮喷水在线观看| 欧美中文综合在线视频| 香蕉久久夜色| 亚洲一区二区三区色噜噜| 91av网一区二区| 国产三级黄色录像| 日韩高清综合在线| 精品日产1卡2卡| 中文字幕av在线有码专区| 国产视频一区二区在线看| 亚洲国产精品999在线| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产高清videossex| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 88av欧美| 日韩高清综合在线| 色av中文字幕| 亚洲一区二区三区不卡视频| 999久久久精品免费观看国产| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 精品久久久久久久毛片微露脸| 高清毛片免费观看视频网站| 精品一区二区三区av网在线观看| 久久香蕉精品热| 亚洲专区中文字幕在线| 国产精品爽爽va在线观看网站| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 日韩欧美在线乱码| 大型黄色视频在线免费观看| 高清日韩中文字幕在线| 91久久精品国产一区二区成人 | 色综合欧美亚洲国产小说| 日韩欧美在线乱码| 国产高潮美女av| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 欧美黄色淫秽网站| 欧美激情久久久久久爽电影| 欧美在线黄色| 午夜精品在线福利| 成人一区二区视频在线观看| 久久人人精品亚洲av| 99riav亚洲国产免费| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 亚洲欧美日韩无卡精品| 午夜福利免费观看在线| 桃色一区二区三区在线观看| 无限看片的www在线观看| 亚洲乱码一区二区免费版| 母亲3免费完整高清在线观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 18禁国产床啪视频网站| 老司机午夜福利在线观看视频| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲第一电影网av| 身体一侧抽搐| 亚洲精品色激情综合| 夜夜夜夜夜久久久久| 精品不卡国产一区二区三区| 欧美日韩乱码在线| 日本三级黄在线观看| 日本黄大片高清| 国产三级黄色录像| 91字幕亚洲| 亚洲avbb在线观看| 国产老妇女一区| 国产精品,欧美在线| 久久九九热精品免费| 午夜视频国产福利| av国产免费在线观看| 日本 欧美在线| 一级毛片女人18水好多| 成人国产一区最新在线观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 亚洲男人的天堂狠狠| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产欧美日韩精品亚洲av| 女警被强在线播放| 国产午夜精品论理片| 国内揄拍国产精品人妻在线| 黄片大片在线免费观看| 国产欧美日韩精品一区二区| 免费看a级黄色片| 久久6这里有精品| 99久久成人亚洲精品观看| 1000部很黄的大片| 听说在线观看完整版免费高清| 国产v大片淫在线免费观看| 欧美日韩综合久久久久久 | 久久精品综合一区二区三区| 欧美黄色淫秽网站| 欧美最新免费一区二区三区 | 欧美日韩黄片免| 综合色av麻豆| 亚洲av不卡在线观看| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久久国产精品麻豆| 国产精品久久久久久久久免 | 日本在线视频免费播放| 国产免费一级a男人的天堂| 免费看美女性在线毛片视频| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 精品人妻1区二区| 在线观看午夜福利视频| 中文字幕高清在线视频| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 成人性生交大片免费视频hd| 国产精品乱码一区二三区的特点| 久久久久久久久大av| 亚洲人成伊人成综合网2020| 老司机在亚洲福利影院| 国产国拍精品亚洲av在线观看 | 亚洲国产欧美网| www.色视频.com| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 亚洲熟妇熟女久久| 精品日产1卡2卡| 国产高潮美女av| 91久久精品国产一区二区成人 | 在线天堂最新版资源| 日本三级黄在线观看| 国产伦在线观看视频一区| 91麻豆精品激情在线观看国产| 久久久国产成人免费| 成年版毛片免费区| 国产三级黄色录像| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 午夜福利在线在线| 国产亚洲精品久久久com| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产一区二区在线av高清观看| 色av中文字幕| 好男人电影高清在线观看| 色播亚洲综合网| 成人精品一区二区免费| 国产91精品成人一区二区三区| 日本黄色片子视频| 国产极品精品免费视频能看的| 91在线精品国自产拍蜜月 | 亚洲美女视频黄频| aaaaa片日本免费| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 免费看美女性在线毛片视频| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产真实伦视频高清在线观看 | 动漫黄色视频在线观看| 一个人免费在线观看电影| 中文字幕久久专区| 男人舔女人下体高潮全视频| 三级毛片av免费| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 精品免费久久久久久久清纯| 日本一本二区三区精品| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 国产美女午夜福利| 99视频精品全部免费 在线| 免费看美女性在线毛片视频| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 免费在线观看成人毛片| 动漫黄色视频在线观看| 在线观看午夜福利视频| 国产免费男女视频| 国产三级黄色录像| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美 | 久99久视频精品免费| 日本成人三级电影网站| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 欧美区成人在线视频| 高清日韩中文字幕在线| 国产亚洲欧美98| h日本视频在线播放| 国产免费av片在线观看野外av| 夜夜夜夜夜久久久久| 亚洲专区中文字幕在线| a在线观看视频网站| 少妇熟女aⅴ在线视频| 淫秽高清视频在线观看| 日本一本二区三区精品| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲欧美激情综合另类| 身体一侧抽搐| a在线观看视频网站| 757午夜福利合集在线观看| 舔av片在线| 国产精品电影一区二区三区| 色吧在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| 少妇人妻一区二区三区视频| 女警被强在线播放| 亚洲国产高清在线一区二区三| 69av精品久久久久久| 久久久久免费精品人妻一区二区| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲不卡免费看| 午夜福利欧美成人| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 欧美一区二区精品小视频在线| 一本久久中文字幕| 欧美日韩精品网址| av视频在线观看入口| 在线观看舔阴道视频| 九九热线精品视视频播放| 99热这里只有是精品50| 国产主播在线观看一区二区| 少妇的丰满在线观看| 国产av在哪里看| 一级黄片播放器| 国产爱豆传媒在线观看| 亚洲国产色片| ponron亚洲| 日韩亚洲欧美综合| 麻豆久久精品国产亚洲av| 久久九九热精品免费| 一区二区三区激情视频| 国模一区二区三区四区视频| 成年版毛片免费区| 亚洲七黄色美女视频| 又黄又粗又硬又大视频| 中文字幕熟女人妻在线| 窝窝影院91人妻| 国产av不卡久久| 日韩大尺度精品在线看网址| 99精品欧美一区二区三区四区| 欧美大码av| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 特大巨黑吊av在线直播| 国产三级在线视频| 久久久久性生活片| 国产爱豆传媒在线观看| av女优亚洲男人天堂| 999久久久精品免费观看国产| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲av二区三区四区| 午夜福利在线观看吧| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 色播亚洲综合网| 又黄又爽又免费观看的视频| 国产伦人伦偷精品视频| 国产精品亚洲美女久久久| 中文字幕熟女人妻在线| 99久久99久久久精品蜜桃| 90打野战视频偷拍视频| 中文字幕av在线有码专区| 久久久国产精品麻豆| 在线国产一区二区在线| 欧美性猛交黑人性爽| 色综合婷婷激情| 天天添夜夜摸| 国产熟女xx| 搡老妇女老女人老熟妇| 一个人看视频在线观看www免费 | 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲精品色激情综合| 日韩大尺度精品在线看网址| 天堂√8在线中文| 成人精品一区二区免费| 久久久精品欧美日韩精品| 91九色精品人成在线观看| 香蕉丝袜av| 757午夜福利合集在线观看| 在线观看午夜福利视频| 色哟哟哟哟哟哟| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| av天堂在线播放| www国产在线视频色| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 特大巨黑吊av在线直播| 欧美在线黄色| 亚洲第一电影网av| 88av欧美| a级一级毛片免费在线观看| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 少妇熟女aⅴ在线视频| 中亚洲国语对白在线视频| 成人特级黄色片久久久久久久| 真人一进一出gif抽搐免费| 亚洲 国产 在线| 久久久国产成人精品二区|