APLP2基因多態(tài)性與冠心病的相關(guān)性研究

賈林·阿布扎力汗,迪拉熱·阿迪,馬依彤

(新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院冠心病二科,烏魯木齊 830054)

冠狀動脈粥樣硬化性心臟?。╟oronary artery disease,CAD）簡稱冠心病，是心血管系統(tǒng)疾病中最常見的一種。作為全球范圍內(nèi)發(fā)病率、死亡率及致殘率最高的疾病之一，已成為對人類健康造成嚴重威脅的公共衛(wèi)生問題[1-2]。冠心病是一種復雜的疾病，涉及多種發(fā)病機制、細胞類型，并受多種危險因素的影響，主要危險因素包括糖尿病、高血壓、高脂血癥、吸煙、肥胖癥、慢性炎癥、免疫性疾病、缺乏運動和遺傳因素等[3-5]。近年來，隨著基因組學技術(shù)的發(fā)展，全基因組關(guān)聯(lián)研究（genome wide association study,GWAS）和二代測序技術(shù)（next-generation sequencing,NGS）在冠心病病因?qū)W研究領(lǐng)域中的應用得到了廣泛關(guān)注，一些與冠心病風險相關(guān)的遺傳易感基因以及單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism,SNP）也被發(fā)現(xiàn)。本研究旨在探討脂代謝相關(guān)基因淀粉樣肽前體樣蛋白2（amyloid precursor-likeprotein 2，APLP2）單核苷酸多態(tài)性與冠心病的發(fā)病相關(guān)性及其臨床意義。

1 對象與方法

1.1 研究對象選擇2010年8月－2016年10月在新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院心臟中心住院并行冠狀動脈造影術(shù)的997例患者，其中，405例為病例組，593例為對照組。病例組的納入標準為冠狀動脈造影結(jié)果提示至少一支冠狀動脈血管狹窄程度大于50%。對照組則納入了與病例組同期住院的，完善冠脈造影術(shù)后排除冠心病者。兩組均排除惡性腫瘤、結(jié)締組織疾病、心臟瓣膜病、肝腎功能不全、慢性炎癥性疾病、胰腺疾病、肝硬化，及活動期肝炎的患者。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料的采集 采集住院患者的一般基線資料如年齡、性別、吸煙史、飲酒史、高血壓、糖尿病史等。

1.2.2 實驗室指標的測定 研究對象入院后隔夜空腹8-12h，采集所有患者的外周靜脈血樣。對血樣本進行了空腹血清甘油三酯（triglycerides，TG）、總膽固醇（total cholesterol,TC）、低密度脂蛋白膽固醇（lowdensity lipoprotein-cholesterol,LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein-cholesterol,HDLC）及空腹血糖（fasting plasma glucose,FPG）檢測。同時對每位受試者進行常規(guī)心電圖、心臟超聲、腹部超聲等檢查。

1.2.3 提取DNA及基因分型 對收集的血樣本使用標準全血基因組提取試劑盒（北京生物技術(shù)公司）從外周血白細胞中提取DNA。使用Haploview 4.2軟件和國際人類基因組單體型圖計劃網(wǎng)站數(shù)據(jù)庫(http://www.hapmap.org)，根據(jù)次要等位基因頻率（minor allele frequency,MAF）≥0.05和r2≥0.8作為切點值的連鎖不平衡模式，通過采用改進的多重連接檢測反應（improved multiplex ligation detection reaction,iMLDR）技術(shù)進行SNP基因分型（上海天昊生物科技公司）。最終獲得了APLP2基因兩個單核苷酸多態(tài)性位點SNP1(rs190276777)和SNP2(rs3740881)。

1.2 統(tǒng)計學分析使用SPSS23.0軟件進行分析。計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，在病例組和對照組中的差異用獨立樣本t檢驗的方法進行。而計數(shù)資料以百分位數(shù)的形式表示，使用卡方檢驗分析分類兩組變量的差異。以P值<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。多因素相關(guān)分析采用二元非條件logistic回歸分析方法，計算各研究因素的比值比（odds ratio，OR）。

2 結(jié)果

2.1 納入研究對象的一般基線特征病例組患者年齡較對照組高（P=0.002）。病例組患病率明顯高于對照組例（P<0.001）。病例組患者血清總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和甘油三酯（TG）水平明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。

表1 研究對象的基線資料

2.2 納入研究對象中基因型和等位基因頻率的分布APLP2基因rs190276777多態(tài)性位點（SNP1）的基因型分布、隱性模型(CC+CGvsGG)和相加模型(CC+GGvsCG)中的分布頻率在病例組和對照組存在明顯差異（P<0.001）。而APLP2基因rs3740881多態(tài)性位點（SNP2）的基因型分布、顯性模型、隱性模型和相加模型在病例組和對照中均無顯著差異（P>0.05），表2。

表2 APLP2基因多態(tài)性位點基因型和等位基因的分布情況/例（%）

2.3 APLP2基因在研究對象中的非條件Logistic回歸分析對納入研究的研究對象進行了，包括性別、年齡、吸煙、飲酒、高血壓病、糖尿病病、TC、TG、LDLC、HDL-C、FPG等冠心病傳統(tǒng)危險因素在內(nèi)的危險因素進行了二元非條件多因素Logistic回歸分析。分析結(jié)果顯示，APLP2基因rs190276777多態(tài)性位點表現(xiàn)為冠心病的獨立危險因素（OR=1.968，95%CI：1.209～3.204，P=0.006），而rs3740881多態(tài)性位點未表現(xiàn)為冠心病危險因素（OR=1.272，95%CI：0.189～1.975，P=0.284）。見表3。

表3 冠心病危險因素的Logistic回歸分析

3 討論

膽固醇調(diào)控在人體內(nèi)維持著嚴密的平衡狀態(tài)，一旦此平衡遭到破壞，就會造成一系列疾病，如高膽固醇血癥、動脈粥樣硬化、脂肪肝、心腦血管疾病等。APLP2是淀粉樣前體蛋白（amyloid precursor protein，APP）家族中的一員，APP家族成員包括APP、淀粉樣肽前體樣蛋白1（amyloid precursor-like protein 1，APLP1）和APLP2，研究者們最初在阿爾茨海默病（Alzheimer's disease,AD）患者中發(fā)現(xiàn)該家族[6]。人類APLP2基因位于染色體11q24.3上，編碼的有763個氨基酸[7]。單核苷酸多態(tài)性是一種最常見的基因組變異形式。但是目前關(guān)于人類APLP2基因多態(tài)性與冠心病之間的相關(guān)性研究很少。有研究結(jié)果顯示，APP和APLP2通過調(diào)節(jié)ApoE受體LRP1的水平來影響ApoE和膽固醇水平[8-11]。然而，關(guān)于血清膽固醇水平以及APLP2基因多態(tài)性之間的研究甚少，為此展開了本研究。

本研究假定rs190276777的GG基因型可能是冠心病的危險遺傳標記。在調(diào)整混雜因素之后，對冠心病的危險因素進行二元非條件Logistic回歸分析，當對冠心病傳統(tǒng)危險因素包括：性別、年齡、吸煙、飲酒、高血壓病、糖尿病、TG、TC、LDL-C、HDL-C和FPG等進行調(diào)整之后，分析結(jié)果顯示APLP2基因rs19027677位點表現(xiàn)為冠心病的獨立危險因素。表明APLP2基因rs19027677位點的G等位基因在該人群中也可能是心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)的危險遺傳標記。本研究尚存在以下局限性：首先，飲食情況與冠心病具有一定的相關(guān)性，在本研究中未將這一因素納入分析，這成為本研究的局限性之一；其次，該研究為單中心研究且樣本量較少，在后續(xù)的研究中，本課題組將進行多中心前瞻性隊列研究。

綜上所述，本研究結(jié)果表明攜帶APLP2基因rs190276777位點G等位基因的人群比攜帶C等位基因的人罹患動脈粥樣硬化性心血管疾病的可能性更高。這種關(guān)系與血清中升高的血脂水平和其他心血管風險決定因素無關(guān)。然而APLP2基因多態(tài)性與CAD發(fā)病的相關(guān)的機制在很大程度上還不清楚，尚需進一步探究。