軟葉針葵花粉和魚尾葵花粉致敏患者嗜堿性粒細(xì)胞活化情況研究

謝偉偉, 林秀聯(lián), 龍 綺, 蔡瓊香

(中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬?？卺t(yī)院 耳鼻咽喉頭頸外科, 海南 海口, 570208)

花粉過敏在臨床較常見，而軟葉針葵和魚尾葵花作為海南地區(qū)常見的植物，其導(dǎo)致的變態(tài)反應(yīng)多見[1-2]。嗜堿性粒細(xì)胞活化作為在變態(tài)反應(yīng)性疾病中研究較多的指標(biāo)，在花粉所致變態(tài)反應(yīng)中的研究較熱[3-5], 但關(guān)于軟葉針葵花粉和魚尾葵花粉致敏患者嗜堿性粒細(xì)胞活化的臨床研究很少。鑒于此，本研究探討了軟葉針葵花粉和魚尾葵花粉致敏患者嗜堿性粒細(xì)胞活化情況，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年3月—2020年2月本院收治的83例軟葉針葵花粉和魚尾葵花粉致敏患者納入觀察組，另選取同時(shí)期83名健康體檢者納入對照組。納入標(biāo)準(zhǔn): ① 年齡18～65歲者; ②觀察組患者符合《變應(yīng)性鼻炎診斷和治療指南(2015年，天津)》中的變應(yīng)性鼻炎診斷標(biāo)準(zhǔn)，且為軟葉針葵花粉和(或)魚尾葵花粉致敏者; ③ 對研究知情同意者。排除標(biāo)準(zhǔn): ① 合并慢性基礎(chǔ)疾病者; ② 2周內(nèi)發(fā)生上呼吸道感染者; ③1個(gè)月內(nèi)應(yīng)用抗過敏藥物治療者。對照組男46例，女37例，年齡19～65歲，平均(35.54±5.93)歲。觀察組男47例，女36例; 年齡20～63歲，平均(35.35±5.73)歲; 過敏原為軟葉針葵花粉致敏63例，魚尾葵花粉致敏50例; 過敏原種數(shù)為1種者53例(單一軟葉針葵花粉致敏33例，魚尾葵花粉致敏20例), 2種者30例; UniCAP分級為1～2級者30例, 3～4級者30例, 5～6級者23例。2組性別、年齡情況比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05), 具有可比性。

變應(yīng)性鼻炎的診斷標(biāo)準(zhǔn): ① 鼻塞、流涕、鼻癢等癥狀出現(xiàn)2種以上，可伴有眼癢、流淚、眼紅，癥狀持續(xù)存在或每天累計(jì)1 h以上; ② 鼻黏膜蒼白、水腫、水樣分泌物。變應(yīng)原檢測(皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)): 采用冷凍研磨法對軟葉針葵花粉、魚尾葵花粉的粗蛋白進(jìn)行提取，分別采用液氮反復(fù)研磨及磷酸鹽緩沖液(PBS)溶解攪拌，離心取上清液作為致敏原，將其滴于患者前臂，然后以點(diǎn)刺針取1小滴(稍大于針尖)于皮膚表層輕輕刺入，并以生理鹽水作為陰性對照液, 15 min內(nèi)出現(xiàn)紅腫塊或顏色改變則為陽性。入選患者可能同時(shí)合并有其他花粉過敏(皮試時(shí)為多種花粉過敏原同時(shí)檢測)。

1.2 方法

采集2組研究對象的靜脈血標(biāo)本待檢，將100 μL抗凝血加入流式細(xì)胞專用管，以15 μL變應(yīng)原浸液加入，混勻，于37 ℃下水浴5 min, 終止反應(yīng)，同時(shí)設(shè)置未活化的對照，采用溶血素進(jìn)行處理，時(shí)間為10 min, 離心去除上清液，將單克隆抗體加入，避光放置20 min, 離心洗滌2次，待檢，上機(jī)檢測，觀察嗜堿性粒細(xì)胞CD63、CD203c及CD45的熒光強(qiáng)度。上述操作均由2名經(jīng)驗(yàn)豐富的工作人員嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行操作。統(tǒng)計(jì)并比較2組的嗜堿性粒細(xì)胞(CD63、CD203c及CD45)活化情況，并比較觀察組內(nèi)不同過敏原類型、過敏原種數(shù)及UniCAP分級者的檢測結(jié)果，采用Spearman秩相關(guān)分析探討嗜堿性粒細(xì)胞活化指標(biāo)與UniCAP分級的關(guān)系。

1.3 評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

UniCAP分級是評估變態(tài)反應(yīng)程度的有效標(biāo)準(zhǔn)之一，以血清特異性IgE水平為依據(jù)進(jìn)行評估，大于0.35 kUA/L為陽性，0級為陰性，隨著變態(tài)反應(yīng)程度升高，其分級逐漸升高(1～6級)[6]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料的比較行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料的比較行t檢驗(yàn)，重復(fù)測量的計(jì)量資料比較進(jìn)行方差分析，研究指標(biāo)間的關(guān)系分析進(jìn)行Spearman秩相關(guān)分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 2組嗜堿性粒細(xì)胞活化情況比較

觀察組嗜堿性粒細(xì)胞CD63、CD203c及CD45的熒光強(qiáng)度高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見表1。

表1 2組嗜堿性粒細(xì)胞活化情況比較

2.2 觀察組內(nèi)不同過敏原類型患者的嗜堿性粒細(xì)胞活化情況比較

觀察組中不同過敏原類型患者的嗜堿性粒細(xì)胞CD63、CD203c及CD45熒光強(qiáng)度比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05), 見表2。

表2 觀察組內(nèi)不同過敏原類型患者的嗜堿性粒細(xì)胞活化情況比較

2.3 觀察組內(nèi)不同過敏原種數(shù)患者的嗜堿性粒細(xì)胞活化情況比較

觀察組內(nèi)不同過敏原種數(shù)患者的嗜堿性粒細(xì)胞CD63、CD203c及CD45熒光強(qiáng)度比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05), 見表3。

表3 觀察組內(nèi)不同過敏原種數(shù)患者的嗜堿性粒細(xì)胞活化情況比較

2.4 觀察組內(nèi)不同UniCAP分級患者的嗜堿性粒細(xì)胞活化情況比較

觀察組中不同UniCAP分級者的嗜堿性粒細(xì)胞CD63、CD203c及CD45熒光強(qiáng)度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 主要表現(xiàn)為UniCAP分級5～6級者的熒光強(qiáng)度高于1～2級及3～4級者，而3～4級者的熒光強(qiáng)度高于1～2級者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見表4。

表4 觀察組內(nèi)不同UniCAP分級患者的嗜堿性粒細(xì)胞活化情況比較

2.5 嗜堿性粒細(xì)胞活化指標(biāo)與軟葉針葵花粉和魚尾葵花粉致敏患者UniCAP分級的關(guān)系分析

Spearman秩相關(guān)分析結(jié)果顯示，嗜堿性粒細(xì)胞活化指標(biāo)CD63、CD203c、CD45與軟葉針葵花粉和魚尾葵花粉致敏患者的UniCAP分級均呈正相關(guān)(rs=0.911、0.876、0.903,P<0.05)。

3 討 論

花粉所致變態(tài)反應(yīng)在臨床常見，而在海南地區(qū)，軟葉針葵花粉和魚尾葵花粉所致變態(tài)反應(yīng)患者占比較高?；ǚ鬯逻^敏屬于Ⅰ型超敏反應(yīng)，由特異性IgE介導(dǎo)，其吸附于嗜堿性粒細(xì)胞[7-8], 因此嗜堿性粒細(xì)胞活化情況在變態(tài)反應(yīng)性疾病尤其是花粉所致過敏方面具有較高的研究意義[9-10]。CD63、CD203c及CD45作為嗜堿性粒細(xì)胞活化的特異性標(biāo)志物，其在嗜堿性粒細(xì)胞活化過程中呈現(xiàn)顯著升高的狀態(tài)[11-12]。臨床中關(guān)于軟葉針葵花粉和魚尾葵花粉所致變態(tài)反應(yīng)患者的嗜堿性粒細(xì)胞活化研究極為匱乏，本研究觀察了此類患者嗜堿性粒細(xì)胞活化情況，旨在為軟葉針葵花粉和魚尾葵花粉致敏患者的診斷與治療提供參考依據(jù)。

本研究中，軟葉針葵花粉和魚尾葵花粉致敏患者的嗜堿性粒細(xì)胞CD63、CD203c、CD45熒光強(qiáng)度均高于健康者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 且UniCAP分級較高患者的熒光強(qiáng)度高于分級較低者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 但不同過敏原類型及不同過敏原種數(shù)患者的檢測結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究Spearman秩相關(guān)分析結(jié)果顯示，嗜堿性粒細(xì)胞活化指標(biāo)CD63、CD203c、CD45均與UniCAP分級呈正相關(guān)(P<0.05)，由此肯定了嗜堿性粒細(xì)胞CD63、CD203c及CD45在軟葉針葵花粉和魚尾葵花粉致敏患者中的檢測意義，并說明其對于變態(tài)反應(yīng)程度有一定的反映價(jià)值，但對于這2類花粉的鑒別診斷及種類分析無明顯價(jià)值。分析原因，軟葉針葵花粉和魚尾葵花粉致敏情況促進(jìn)了特異性IgE的表達(dá)[13-15], 進(jìn)而使與之相關(guān)的嗜堿性粒細(xì)胞活化情況增強(qiáng)，相關(guān)標(biāo)志物CD63、CD203c及CD45熒光強(qiáng)度顯著升高[16-17], 而隨著變態(tài)反應(yīng)程度的增強(qiáng)，特異性IgE表達(dá)升高，嗜堿性粒細(xì)胞活化也隨之顯著增強(qiáng)，但不同花粉所致變態(tài)反應(yīng)導(dǎo)致的上述差異并不顯著，僅與變態(tài)反應(yīng)程度有關(guān)[18-20], 故不同花粉及不同過敏原種數(shù)者的表達(dá)差異并不顯著。由此類推，上述嗜堿性粒細(xì)胞活化情況可能僅與Ⅰ型超敏反應(yīng)程度有關(guān)[21-25], 而其對于過敏原的針對性了解價(jià)值并不顯著。

綜上所述，軟葉針葵花粉和魚尾葵花粉致敏患者嗜堿性粒細(xì)胞活化情況突出，且活化指標(biāo)CD63、CD203c、CD45表達(dá)程度與UniCAP分級密切相關(guān)，具有較高的檢測價(jià)值。