高遷移率族蛋白A1、堿性成纖維細(xì)胞生長因子、促紅細(xì)胞生成素在宮頸癌中的表達(dá)及與患者臨床特征和預(yù)后的關(guān)系

盧書芳，閆秀玲，孫曉娜

平煤神馬醫(yī)療集團(tuán)總醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 平頂山4670000

宮頸癌是臨床常見的婦科惡性腫瘤之一，目前，臨床治療以根治性手術(shù)為主，但多數(shù)宮頸癌患者早期癥狀不明顯，因此，就診時(shí)多已處于中晚期，失去了最佳的手術(shù)治療機(jī)會(huì)，研究發(fā)現(xiàn)，高危HPV 持續(xù)感染進(jìn)展為宮頸癌所需要的時(shí)間較長，隨著腫瘤分子生物學(xué)的發(fā)展，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與協(xié)同因子有關(guān)，如原癌基因的激活、抑癌基因的失活及相關(guān)基因的異常表達(dá)。高遷移率族蛋白A1（high mobility group protein A1，HMGA1）屬于染色質(zhì)相關(guān)蛋白，在多種惡性腫瘤上皮組織中過表達(dá)，且與腫瘤發(fā)生發(fā)展及患者的預(yù)后密切相關(guān)；堿性成纖維細(xì)胞生長因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）與腫瘤新生血管生成密切相關(guān)；促紅細(xì)胞生成素（erythropoietin，EPO）屬于糖蛋白細(xì)胞因子，可參與腫瘤細(xì)胞抗凋亡、抗缺氧及腫瘤新生血管生成過程，目前，上述三種因子在宮頸癌中表達(dá)情況的臨床報(bào)道相對(duì)少見?；诖?，本研究探討HMGA1、bFGF、EPO 在宮頸癌中的表達(dá)及與患者預(yù)后的關(guān)系，以期為臨床提供指導(dǎo)和依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017 年1 月至2020 年6 月平煤神馬醫(yī)療集團(tuán)總醫(yī)院收治的宮頸癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理學(xué)檢查確診為宮頸癌；②年齡18～60 歲；③均接受宮頸癌根治術(shù)治療；④術(shù)前未接受放化療等治療；⑤臨床隨訪資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤；②合并免疫系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病。依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入98 例宮頸癌患者，年齡（50.98±9.65）歲；體重指數(shù)（body mass index，BMI）為（22.84±3.55）kg/m；已育63 例，未育35 例；絕經(jīng)59 例。同時(shí)選取本院收治的50 例子宮肌瘤患者，均接受子宮全切術(shù)治療，無肝腎功能障礙、免疫系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病等，年齡（49.32±8.19）歲；BMI 為（22.60±4.12）kg/m；已育33例，未育17 例；絕經(jīng)31 例。兩組患者年齡、BMI 和生育情況等臨床特征比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

﹥0.05），具有可比性。取98 例宮頸癌患者的宮頸癌組織和50 例子宮內(nèi)膜癌患者的正常宮頸組織，備檢。

1.2 免疫組化法檢測HMGA1、bFGF、EPO 的表達(dá)情況

取98 例宮頸癌組織和50 例正常宮頸組織中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，切片，厚度為3 μm，烘烤切片，置入10%二甲苯脫蠟10 min，分別置于100%、95%、85%、75%濃度梯度的乙醇中2 min，蒸餾水浸泡2 次，每次2 min。3%過氧化氫去離子水孵育10 min，蒸餾水沖洗2 min，滴加HMGA1、bFGF、EPO一抗和二抗[反應(yīng)條件：37 ℃溫箱孵育20 min，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）沖洗4 次，每次2 min]，二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，蘇木素復(fù)染10 min，鹽酸乙醇分化3 s，氨水反藍(lán)3 s，中性樹膠封片。

1.3 免疫組化法結(jié)果判定

HMGA1、bFGF、EPO 主要定位于細(xì)胞核，未著色為陰性，細(xì)胞核呈黃色或棕黃色染色為陽性，其中著色略深為1 分，著色較深為2 分，明顯加深為3分。陽性細(xì)胞所占比例：﹤5%為0 分，5%～10%為1分，11%～25%為2 分，26%～50%為3 分，﹥50%為4分。每張切片隨機(jī)觀察5 個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100 個(gè)細(xì)胞，取平均值。將著色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞所占比例評(píng)分相加，≥4 分為陽性，﹤4 分為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 HMGA1、bFGF、EPO 表達(dá)情況的比較

宮頸癌組織中HMGA1、bFGF 和EPO 陽性表達(dá)率均明顯高于正常宮頸組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

﹤0.05）。（表1）

表1 宮頸癌組織和正常宮頸組織中HMGA1、bFGF、EPO陽性表達(dá)率的比較[n（%）]

2.2 不同臨床特征宮頸癌患者宮頸癌組織中HMGA1、bFGF、EPO 表達(dá)情況的比較

不同年齡、BMI、絕經(jīng)情況、生育情況、病理類型、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況宮頸癌患者宮頸癌組織中HMGA1、bFGF、EPO 陽性表達(dá)率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

﹥0.05）。國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）分期為Ⅱ期的宮頸癌患者宮頸癌組織中HMGA1、bFGF 陽性表達(dá)率均高于FIGO 分期為Ⅰ期的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

χ

=7.760、17.626，

P

﹤0.05）；FIGO 分期為Ⅱ期、分化程度為低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者宮頸癌組織中EPO 陽性表達(dá)率均高于FIGO 分期為Ⅰ期、分化程度為中高分化和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

χ

=10.906、6.584、7.510，

P

﹤0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征宮頸癌患者宮頸癌組織中HMGA1、bFGF、EPO 陽性表達(dá)率的比較（n=98）

2.3 HMGA1、bFGF、EPO 表達(dá)的相關(guān)性分析

HMGA1 的表達(dá)與bFGF 的表達(dá)無相關(guān)性（

P

﹥0.05），與EPO 的表達(dá)呈正相關(guān)（

r

=0.337，

P

﹤0.05），bFGF 表達(dá)與EPO 的表達(dá)呈正相關(guān)（

r

=0.414，

P

﹤0.05）。

2.4 MGA1、bFGF、EPO 的表達(dá)與宮頸癌患者預(yù)后的關(guān)系

采用門診、電話隨訪的方式對(duì)宮頸癌患者進(jìn)行5～32 個(gè)月的隨訪，隨訪時(shí)間截至2020 年11 月，98例宮頸癌患者復(fù)發(fā)31 例，未復(fù)發(fā)67 例。復(fù)發(fā)與未復(fù)發(fā)宮頸癌患者的復(fù)發(fā)患者HMGA1、bFGF 陽性表達(dá)率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

﹥0.05）；復(fù)發(fā)宮頸癌患者EPO 陽性表達(dá)率高于未復(fù)發(fā)患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

﹤0.05）。（表3）

表3 復(fù)發(fā)和未復(fù)發(fā)宮頸癌患者HMGA1、bFGF、EPO 陽性表達(dá)率的比較[n（%）]

3 討論

宮頸癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅女性的身心健康和生命安全，目前，全球范圍內(nèi)，每年新發(fā)宮頸癌患者近50 萬例，其中4/5 發(fā)生于發(fā)展中國家，近年來隨著早期診斷技術(shù)的不斷發(fā)展，宮頸癌的早期診斷率明顯提升。目前，臨床主要采用手術(shù)切除治療早期宮頸癌，手術(shù)更適合應(yīng)用于Ⅰa～Ⅱa 期患者，而晚期病變進(jìn)行手術(shù)治療的預(yù)后較差，可以采取新輔助化療減少病灶間質(zhì)浸潤與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)后，再進(jìn)行手術(shù)治療。以往臨床主要根據(jù)查體、活檢或內(nèi)鏡檢查結(jié)果明確宮頸癌患者的臨床分期，但由于難以確認(rèn)腫瘤浸潤范圍及浸潤深度，導(dǎo)致分期準(zhǔn)確度較差，影響了宮頸癌治療方案的確定。早期明確診斷宮頸癌并準(zhǔn)確進(jìn)行臨床分期，對(duì)治療方案的選擇和患者預(yù)后的改善均有重要意義，目前，影響宮頸癌發(fā)病的具體機(jī)制尚未明確，主要經(jīng)過癌前病變、原位癌、浸潤癌的連續(xù)演變過程，受到環(huán)境、宿主及病毒等多種因素的影響，因此，如何準(zhǔn)確評(píng)估宮頸癌的病理特征已成為臨床宮頸癌治療的關(guān)鍵。

本研究探討分子生物學(xué)指標(biāo)HMGA1、bFGF、EPO 在宮頸癌中的表達(dá)，其中HMGA1 屬于染色體相關(guān)蛋白，廣泛存在于真核生物細(xì)胞中，研究發(fā)現(xiàn)，HMGA1 可影響正常的生物學(xué)過程，通過與核小體結(jié)合參與細(xì)胞分裂過程中的染色體運(yùn)動(dòng)，同時(shí)維持染色質(zhì)結(jié)構(gòu)，參與基因調(diào)節(jié)，通過參與增強(qiáng)子復(fù)合物的形成與蛋白質(zhì)相互作用調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄，并參與長序列啟動(dòng)子基因的調(diào)控。本研究結(jié)果顯示，HMGA1 在宮頸癌組織中的表達(dá)明顯上調(diào)，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，HMGA1 在宮頸癌組織中高表達(dá)，在正常的宮頸上皮組織中幾乎不表達(dá)，且在浸潤性宮頸癌中呈強(qiáng)陽性表達(dá)，表明HMGA1 可以作為診斷浸潤性宮頸癌的重要方法，且其表達(dá)強(qiáng)度與宮頸上皮病變程度呈正相關(guān)，與本研究結(jié)果相似。bFGF 一般由內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞分泌，主要作用是促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞游走與平滑肌細(xì)胞增殖，因此，bFGF 具有促進(jìn)腫瘤新生血管生成的作用，有學(xué)者采用免疫組化法檢測bFGF 在宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變和正常宮頸組織中的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，bFGF 可作為評(píng)估宮頸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的客觀指標(biāo)，且與宮頸癌患者臨床分期、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和宮旁浸潤有關(guān)。EPO則屬于對(duì)熱和酸穩(wěn)定的酸性糖蛋白質(zhì)，由淺表腎單位的腎小管周圍毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞或成纖維細(xì)胞合成，研究顯示，腫瘤細(xì)胞分泌EPO，主要參與抗凋亡、抗缺氧、促進(jìn)腫瘤新生血管生成、調(diào)節(jié)免疫功能、協(xié)同相關(guān)細(xì)胞因子的作用，其中促進(jìn)腫瘤新生血管生成是通過促內(nèi)皮細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)變?yōu)楣軤罱Y(jié)構(gòu)、促進(jìn)管狀結(jié)構(gòu)延長實(shí)現(xiàn)。

本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組織中HMGA1、bFGF 和EPO 的陽性表達(dá)率均明顯高于正常宮頸組織，表明HMGA1、bFGF 和EPO 在宮頸癌患者中均呈異常高表達(dá)。本研究結(jié)果顯示，F(xiàn)IGO 分期為Ⅱ期的宮頸癌患者宮頸癌組織中HMGA1、bFGF 陽性表達(dá)率均高于FIGO 分期為Ⅰ期的患者，F(xiàn)IGO 分期為Ⅱ期、分化程度為低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者宮頸癌組織中EPO 陽性表達(dá)率均高于FIGO 分期為Ⅰ期、分化程度為中高分化和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。表明HMGA1、bFGF、EPO 與腫瘤臨床分期可能有關(guān)，EPO 還可能與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分化程度有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，EPO 屬于腎臟分泌活性糖蛋白，可造成骨髓中紅系造血祖細(xì)胞增殖、分化，因此，宮頸癌復(fù)發(fā)患者由于腫瘤細(xì)胞增殖可導(dǎo)致EPO 表達(dá)陽性。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，局部微環(huán)境缺氧是宮頸上皮內(nèi)瘤變進(jìn)展的重要影響因素之一，EPO為缺氧調(diào)節(jié)因子，其過表達(dá)與惡性腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)密切相關(guān)，與本研究結(jié)果相似。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，復(fù)發(fā)宮頸癌患者EPO 陽性表達(dá)率高于未復(fù)發(fā)患者。本研究探討HMGA1、bFGF、EPO 在宮頸癌中的表達(dá)情況與患者的臨床特征有關(guān)，可影響腫瘤的生物學(xué)行為，對(duì)腫瘤的早期診斷、預(yù)后評(píng)估及治療方案的制訂均有重要意義，可通過某種方式下調(diào)或抑制相關(guān)因子的表達(dá)以對(duì)宮頸癌進(jìn)行治療，但仍有待進(jìn)一歩研究。

綜上述所，HMGA1、bFGF、EPO 在宮頸癌組織中表達(dá)上調(diào)，其與宮頸癌患者的FIGO 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及分化程度可能有關(guān)，EPO 的表達(dá)可能與宮頸癌根治術(shù)術(shù)后患者的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)。