叉頭框蛋白P3 在胃癌中的表達(dá)及與患者臨床特征和預(yù)后的關(guān)系

王希，張勇峰，段會(huì)娟

河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科，河南 洛陽(yáng)4710030

胃癌是消化系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤，全球范圍內(nèi)，胃癌的發(fā)病率居惡性腫瘤第四位，病死率居惡性腫瘤第二位。目前，胃癌的臨床治療以手術(shù)切除病灶聯(lián)合化療等綜合治療為主，但胃癌的臨床治療水平仍有待進(jìn)一步提高。近年來(lái)，精準(zhǔn)靶向治療是胃癌臨床研究的重點(diǎn)，免疫療法已成為臨床研究的熱點(diǎn)。叉頭框蛋白P3（forkhead box P3，F(xiàn)OXP3）等免疫細(xì)胞及其相關(guān)因子的表達(dá)水平與胃癌的發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移與預(yù)后密切相關(guān)，因此，調(diào)節(jié)性T（regulatory T，Treg）細(xì)胞可影響胃癌的進(jìn)展，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。FOXP3 是一種轉(zhuǎn)錄因子，在Treg 細(xì)胞的形成與免疫抑制中發(fā)揮重要作用。FOXP3 為Treg 細(xì)胞的特異性標(biāo)志物，而Treg 細(xì)胞的功能與表型呈多樣性，F(xiàn)OXP3 Treg 細(xì)胞在惡性腫瘤微環(huán)境中也存在諸多表型異質(zhì)性，不同腫瘤組織中的FOXP3 表達(dá)水平及功能亦可能存在差異。目前，臨床研究主要集中于胃癌患者的胃癌組織和外周血FOXP3的表達(dá)方面，在胃癌組織與癌旁組織中的研究較少。本研究探討FOXP3在胃癌組織及癌旁組織中的表達(dá)情況，為患者的病情和預(yù)后評(píng)估提供必要參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016 年1 月至2018 年12 月河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院收治的胃癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥18 歲；②經(jīng)手術(shù)病理或內(nèi)鏡活檢確診為胃癌。排除標(biāo)準(zhǔn)：①癌前病變及其他胃部疾?。虎诤喜⑵渌麗盒阅[瘤；③3 年隨訪資料完整；④因其他病因行胃、腹部手術(shù)。依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入115例胃癌患者，其中男90例，女25例；年齡﹤70 歲70 例，≥70 歲45 例。取115 例胃癌患者的胃癌組織及相應(yīng)的癌旁組織。

1.2 免疫組化法檢測(cè)FOXP3 的表達(dá)情況

取胃癌組織及相應(yīng)的癌旁組織常規(guī)切片，厚度3～5 μm，妥善黏附，65 ℃烘片1 h，置于二甲苯中10 min，重復(fù)1 次，以無(wú)水乙醇清洗5 min，重復(fù)1次。使用90%、80%、70%梯度的乙醇清洗，雙蒸水（doble distilled water，ddHO）清洗5 min；pH=6.0 的檸檬酸緩沖液1 L 于高壓鍋內(nèi)煮沸，將玻片放入高壓鍋內(nèi)煮沸3 min，自然冷卻后以ddHO 清洗3 次，每次5 min。室溫下以3%的過(guò)氧化氫浸泡15 min；pH=7.2 的磷酸緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）浸泡3 次，每次5 min；置入濕盒內(nèi)維持37 ℃加封閉液封閉1 h，PBS 浸泡3 次，每次5 min。加入一抗，4 ℃孵育過(guò)夜，PBS 浸泡3 次，每次5 min；加入二抗，室溫下孵育1 h，PBS浸泡3次，每次5 min。二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯 色，ddHO 漂洗5 min，蘇木素襯染后自來(lái)水沖洗，65 ℃的烤箱內(nèi)烘干，中性樹(shù)膠封片。

使用Dmetrix 掃描系統(tǒng)轉(zhuǎn)換為數(shù)字切片，由2名病理科副主任醫(yī)師以雙盲法閱片，如遇分歧由2名醫(yī)師協(xié)商一致后決定。顯微鏡下觀察細(xì)胞核著色強(qiáng)度（陽(yáng)性細(xì)胞），計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞所占比例，無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)0 分，﹤10%計(jì)1 分，10%～50%計(jì)2 分，﹥50%計(jì)3 分；0～1 分為低表達(dá)，2～3 分為高表達(dá)。

1.3 隨訪方法

治療后每月復(fù)查1 次，復(fù)查3 次后改為每3 個(gè)月復(fù)查1 次，于復(fù)查時(shí)隨訪，未到院復(fù)查的通過(guò)電話隨訪，以患者死亡或隨訪3 年為隨訪終點(diǎn)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 23.0 軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用

χ

檢驗(yàn)，等級(jí)資料的比較采用秩和檢驗(yàn)；采用Kaplan-Meier 繪制生存曲線，組間比較采用Log-rank檢驗(yàn)；以

P

﹤0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 FOXP3 表達(dá)情況的比較

胃癌組織中FOXP3 高表達(dá)52 例，低表達(dá)63例；癌旁組織中FOXP3 高表達(dá)47 例，低表達(dá)68 例；胃癌組織與癌旁組織中FOXP3 表達(dá)情況比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

χ

=0.443，

P

﹥0.05）。

2.2 不同臨床特征胃癌患者胃癌組織和癌旁組織中FOXP3 表達(dá)情況的比較

不同性別、年齡、腫瘤最大徑、分化程度、臨床分期、N 分期、M 分期胃癌患者癌旁組織中FOXP3表達(dá)情況比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

﹥0.05）。不同性別、年齡、分化程度、臨床分期、M 分期胃癌患者胃癌組織中FOXP3表達(dá)情況比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

﹥0.05）；不同腫瘤最大徑、N 分期胃癌患者胃癌組織中FOXP3表達(dá)情況比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

χ

=12.916、

Z

=-3.086，

P

﹤0.05）。（表1）

表1 不同臨床特征胃癌患者胃癌組織和癌旁組織中FOXP3 表達(dá)情況的比較（n=115）

2.3 生存情況的比較

隨訪24.86～45.64個(gè)月，胃癌組織中FOXP3低表達(dá)胃癌患者的平均總生存期為34.837個(gè)月（95%CI：33.291～36.384 個(gè)月），短于FOXP3 高表達(dá)患者的43.392 個(gè)月（95%CI：42.038～44.746 個(gè)月），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

χ

=30.450，

P

﹤0.05）；癌旁組織中FOXP3低表達(dá)胃癌患者的平均總生存期為34.959個(gè)月（95%CI：33.434～36.484 個(gè)月），短于FOXP3 高表達(dá)患者的44.278個(gè)月（95%CI：43.146～45.410個(gè)月），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

χ

=36.932，

P

﹤0.05）。（圖1、圖2）

圖1 胃癌組織中FOXP3低表達(dá)（n=63）與FOXP3高表達(dá)（n=52）胃癌患者的總生存曲線

圖2 癌旁組織中FOXP3低表達(dá)（n=68）與FOXP3高表達(dá)（n=47）胃癌患者的總生存曲線

3 討論

胃癌為消化系統(tǒng)種常見(jiàn)的惡性腫瘤，早期手術(shù)可以獲得理想的預(yù)后，但胃癌的病死率仍高居惡性腫瘤第二位。隨著胃癌治療的不斷深入研究，近年來(lái)，免疫療法已成為治療胃癌的重要手段。FOXP3 是Treg 細(xì)胞的特異性生物學(xué)標(biāo)志物，其在Treg 細(xì)胞分化、維持Treg 細(xì)胞功能與免疫抑制等方面均發(fā)揮著重要作用。Treg 細(xì)胞作為調(diào)控機(jī)體免疫功能穩(wěn)態(tài)與自身免疫耐受的重要調(diào)節(jié)細(xì)胞，在腫瘤免疫調(diào)控中發(fā)揮著重要調(diào)節(jié)作用，其在免疫應(yīng)答中通過(guò)抗原受體刺激后可抑制CD4T 淋巴細(xì)胞、CD8T 淋巴細(xì)胞、B 細(xì)胞的活化增殖。腫瘤組織中FOXP3 表達(dá)下調(diào)、Treg 細(xì)胞減少，多提示預(yù)后不良。腫瘤細(xì)胞核內(nèi)FOXP3 高表達(dá)是惡性腫瘤患者預(yù)后的重要保護(hù)因素。目前，F(xiàn)OXP3 在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)的臨床價(jià)值尚未完全清晰，有研究認(rèn)為，早期胃癌細(xì)胞中FOXP3 高表達(dá)與預(yù)后良好有關(guān)，表明FOXP3 具有拮抗腫瘤細(xì)胞的作用。

本研究結(jié)果表明，胃癌患者胃癌組織和癌旁組織中FOXP3 高表達(dá)患者的總生存期更長(zhǎng)，表明FOXP3 高表達(dá)可能是胃癌患者預(yù)后良好的保護(hù)因素。本研究結(jié)果顯示，不同腫瘤最大徑、N 分期胃癌患者胃癌組織中FOXP3 表達(dá)情況存在差異（

P

﹤0.05），表明胃癌組織中FOXP3 高表達(dá)患者的腫瘤最大徑更小、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移范圍更小且程度更輕，可為患者病情和預(yù)后評(píng)估提供科學(xué)參考。但本研究?jī)H獨(dú)立評(píng)估胃癌組織和癌旁組織中FOXP3表達(dá)情況，尚未比較胃癌組織、癌旁組織中FOXP3均高表達(dá)或低表達(dá)患者的生存情況，有待于進(jìn)一步研究明確。同時(shí)，本研究納入的樣本量較小，有待于進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行驗(yàn)證。

綜上所述，F(xiàn)OXP3 在胃癌組織和癌旁組織中的表達(dá)情況無(wú)明顯差異，其高表達(dá)往往提示腫瘤最大徑更小、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移范圍更小且程度更輕，患者生存期更長(zhǎng)。