砂仁復(fù)方對5-FU所致大鼠腸道菌群調(diào)節(jié)作用研究*

李 菊，趙榮華，陳 鑫，何玉瀟，牛璐璐，孫瑞芬

（云南中醫(yī)藥大學(xué)，云南 昆明 650500）

惡性腫瘤嚴(yán)重威脅著全球公眾的生命健康，是全世界亟待解決的健康問題，在我國腫瘤死亡占全部死因的1/4[1]。腫瘤控制已經(jīng)成為世界各國政府的衛(wèi)生戰(zhàn)略重點[2]。腫瘤治療最主要的手段為手術(shù)及放化療，而化療藥物的長期使用會產(chǎn)生一系列的毒副反應(yīng)，影響患者生存質(zhì)量甚至危及患者生命[3-5]。而胃腸道反應(yīng)是化療后主要不良反應(yīng)之一，除了常見的惡心、嘔吐等癥狀外，化療藥物能引起腹脹、腹瀉、食欲減退、便秘，并能直接殺傷腸腔正常菌群，破壞腸道菌群穩(wěn)態(tài)[6-8]。如何緩解化療患者胃腸反應(yīng)，并保持腸道菌群的平衡，成為了腫瘤化療能否耐受的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

中醫(yī)治療胃腸道疾病具有較好的療效[9]。砂仁復(fù)方以砂仁為主，輔以人參、滇黃精制成。砂仁為豆蔻屬多年生草本植物，在臨床上具有保護胃粘膜、改善胃腸機能、止痛、止瀉、促進消化液的分泌、調(diào)節(jié)腸道微生物菌群等作用[10-12]。人參具有大補元氣，復(fù)脈固脫，補脾益肺，生津止渴，安神益智的功效[13]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證明人參具有提高機體免疫力、抗腫瘤、抗炎、殺菌等[14]。黃精為百合科植物滇黃精、黃精或多花黃精的干燥根莖，具有滋腎潤肺，補脾益氣的功效[15-16]。砂仁復(fù)方對5-FU導(dǎo)致的胃腸菌群失調(diào)可能具有調(diào)節(jié)作用，但尚無確切的研究證明。本文利用5-FU建立大鼠腸道菌群失調(diào)模型，不同劑量砂仁復(fù)方灌胃，研究砂仁復(fù)方保護化療藥物5-FU所致大鼠腸道菌群失調(diào)作用，為臨床腫瘤治療中5-FU應(yīng)用提供支撐，為砂仁復(fù)方的開發(fā)利用提供一定科學(xué)依據(jù)，同時為云南砂仁產(chǎn)業(yè)化發(fā)展作出貢獻。

1 材料與方法

1.1 實驗動物、藥品、樣本 雄性清潔級SD大鼠，體質(zhì)量180～200 g，購于昆明醫(yī)科大學(xué)實驗動物學(xué)部，許可證號：SCXK（滇）k2015-002；砂仁（姜科植物砂仁Amomun villosum Lour的干燥成熟果實）；人參（五加科植物人參Panax ginseng C.A.Mey）和黃精（百合科植物滇黃精Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl）均購于昆明市螺螄灣中藥材市場，3種藥材經(jīng)云南中醫(yī)藥大學(xué)趙榮華教授鑒定為正品；雙歧桿菌四聯(lián)活菌片（思連康）產(chǎn)于杭州遠大生物制藥有限公司，批號：201703101；五氟尿嘧啶（5-FU）產(chǎn)于北京華邁科生物技術(shù)有限責(zé)任公司，批號：BJ160513212A；大鼠糞便（實驗結(jié)束當(dāng)天收集鼠便，液氮速凍過夜，后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱貯存，備用）。

1.2 實驗方法

1.2.1 砂仁復(fù)方溶液的制備、動物分組及給藥 砂仁復(fù)方為砂仁、滇黃精、人參按1∶1∶1比例配伍而成，滇黃精用其提取液制成1 mL相當(dāng)于1 g生藥流浸膏備用。砂仁、人參分別粉碎過100目篩備用。根據(jù)復(fù)方砂仁人服用每日劑量，折算大鼠的等效劑量約為生藥1.6 g/kg，為本實驗的中劑量，同時分別以生藥0.8、3.2 g/kg作為低劑量和高劑量。再配制0.32 g/mL砂仁復(fù)方高劑量藥液、0.16 g/mL砂仁復(fù)方中劑量藥液、0.08 g/mL砂仁復(fù)方低劑量藥液。

SD大鼠，隨機分成6組，每組9只：正常組（CON）、模型組（MOD）、陽性藥思連康組（BQVT）、砂仁復(fù)方低劑量組（AVCP-L）、砂仁復(fù)方中劑量組（AVCP-M）、砂仁復(fù)方高劑量組（AVCP-H）。

動物模型及各組給藥依據(jù)課題組前期實驗研究及杜靜等的方法，CON組每天1次生理鹽水灌胃（1 mL/100 g）至第19天，MOD組每天灌胃生理鹽水至第19天，并于第8、14天灌胃生理鹽水4 h后腹腔注射5-FU（35 mg/kg）。BQVT組每天灌胃生理鹽水至第7天，并于第8天開始灌胃思連康（0.45 g/kg），每天1次至第19天，且于第8、14天給藥4 h后，各腹腔注射 5-FU（35 mg/kg）1次。AVCP-L 組、AVCP-M組、AVCP-H組每天1次灌胃相應(yīng)劑量的砂仁復(fù)方藥液，并在第8、14天給藥4 h后各腹腔注射5-FU（35 mg/kg）1次。于第19天收集每組3只大鼠糞便作為處理樣品，液氮速凍過夜，后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱貯存，備用。

1.2.2 SD大鼠糞便細菌16S rRNA測序 大鼠糞便樣品進行DNA提取，將細菌的16S rRNA（核糖體小RNA）基因V3可變區(qū)序列作為通用引物進行擴增，以引物 338F_806R （338F：5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3'，806R：5'-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3'）進行PCR擴增。由美吉生物進行16S rRNA V3區(qū)測序得到有效數(shù)據(jù)（Effective Tags）上傳至i-Sanger生物信息云平臺。

1.2.3 運用i-Singer云平臺分析16S rRNA測序數(shù)據(jù)根據(jù)i-Singer云平臺分析軟件對各處理組腸道糞便菌群物種進行分析、注釋，對腸道菌群物種多樣性、不同分類學(xué)水平下菌群豐度分析進行分析比較，評價砂仁復(fù)方對化療藥5-FU所致大鼠腸道菌群變化的影響。

2 結(jié)果

2.1 腸道菌群豐度及Alpha多樣性分析 經(jīng)測序分析，18份糞便樣品共獲得675 236條優(yōu)化序列，序列平均堿基長度為440 bp，按照有效序列數(shù)以97%的序列一致性，將序列共聚類成3 933個操作分類單元（operational taxonomic units，OTU）。各組樣品的 OUT數(shù)量及多樣性指數(shù)見表1。各組OUT數(shù)量存在差異，AVCP-M>MOD>AVCP-H>AVCP-L>BQVT>CON。其中MOD的OTU數(shù)量顯著高于CON（P<0.05），AVCP-M、AVCP-H的OTU數(shù)量顯著高于CON（P<0.05）。豐度指數(shù)（Chao1）能估計菌群物種數(shù)，各組Chao1指數(shù)：MOD>AVCP-M>AVCP-H>AVCP-L>BQVT>CON，MOD及AVCL.M的Chao1指數(shù)均顯著高于正常組（P<0.05）。辛普森指數(shù)（Simpson）用來估算樣品中微生物多樣性的指數(shù)，指數(shù)越大，物種多樣性則越小，各組Simpson指數(shù)：MOD>CON>AVCP-H>BQVT>AVCP-L>AVCP-M，其中MOD的Simpson指數(shù)顯著高于 AVCP-L、AVCP-M（P<0.05）。

表1 樣品的OUT數(shù)量及多樣性指數(shù)表（±s，n=3）

表1 樣品的OUT數(shù)量及多樣性指數(shù)表（±s，n=3）

注：與正常組相比，▲P<0.05；與模型組相比，*P<0.05。

A l p h a多樣性指數(shù)組數(shù) O T U數(shù)量豐度指數(shù)C h a o 1 辛普森指數(shù)S i m p s o n正常組 C O N 4 3 7.6 7±6 7.0 0 5 0 9.6 2±7 9.0 4 0.0 7 9±0.0 3 1模型組M O D 5 1 6.0 0±3.6 1▲ 6 1 6.4 3±3 7.2 0▲ 0.1 0 0±0.0 6 8思連康陽性組 B Q V T 4 6 3.0 0±1 3.5 0 5 4 0.7 7±4 0.4 7 0.0 5 0±0.0 2 2砂仁復(fù)方低劑量 A V C P-L 5 0 6.6 7±1 1.5 0 5 9 2.5 0±2 6.9 3 0.0 3 6±0.0 1 4*砂仁復(fù)方中劑量A V C P-M 5 1 9.0 0±5 3.0 0▲ 6 1 2.7 8±5 8.6 8▲ 0.0 3 2±0.0 0 5*砂仁復(fù)方高劑量 A V C P-H 5 1 5.6 7±4 0.0 0▲ 5 9 3.1 2±6 2.8 5 0.0 7 4±0.0 2 2

2.2 稀釋曲線 以抽到的序列數(shù)同其所代表的OUT數(shù)構(gòu)建稀釋曲線，如圖1所示，曲線未進入平臺期，說明隨著測序條數(shù)的增加，仍會產(chǎn)生新的OUT。以各樣品的測序量在不同測序深度時的微生物多樣性指數(shù)構(gòu)建維納指數(shù)（Shannon）曲線，如圖2所示，曲線已趨于平坦，表明盡管隨著測序量的增加，新的物種可能會出現(xiàn)，但微生物的多樣性已經(jīng)不再隨之發(fā)生變化。說明本次測序數(shù)據(jù)量合理，可以反映樣本中絕大多數(shù)的微生物多樣性信息。

圖1 稀釋曲線SD大鼠糞便樣品Sobs稀釋曲線圖

圖2 多樣性曲線大鼠糞便樣品Shannon稀釋曲線圖

2.3 各分類學(xué)水平下相對豐度分析

2.3.1 門水平上各個處理組腸道菌群分析 表2所示，各處理組大鼠糞便微生物的16S rRNA進行測序，在被檢測出的10個菌門中，絕大多數(shù)（>95%）屬于擬桿菌門（Bacteroidetes）和厚壁菌門（Firmicutes）。

表2 主要菌門在各組的相對豐度表（±s，n=3，%）

表2 主要菌門在各組的相對豐度表（±s，n=3，%）

注：與正常組相比，▲P<0.05；與模型組相比，*P<0.05。

組別 擬桿菌門 厚壁菌門 厚壁菌門/擬桿菌門正常組 C O N 5 4.0 2 0 0±7.1 0 5 4 4 4.3 7 0 0±7.3 3 5 5 0.8 4 4 7±0.2 6 6 1 1模型組 M O D 6 2.9 0 3 3±8.2 3 4 0▲ 3 2.6 0 6 7±8.3 1 8 7▲ 0.5 3 5 6±0.1 9 7 5 3▲思連康陽性組 B Q V T 6 1.7 9 6 7±1 1.2 8 4 0 3 5.5 8 6 7±1 0.8 9 2 1 0.6 1 3 8±0.3 1 2 4 7砂仁復(fù)方低劑量 A V C P-L 5 6.8 1 3 3±7.8 4 3 1* 4 0.9 3 6 7±6.2 5 7 6* 0.7 4 1 4±0.2 2 6 3 5*砂仁復(fù)方中劑量 A V C P-M 5 8.5 2 0 0±7.6 7 2 5* 3 9.2 8 6 7±7.3 2 5 2* 0.6 9 1 3±0.2 3 0 2 2*砂仁復(fù)方高劑量 A V C P-H 6 2.4 0 6 7±9.2 2 2 0 3 3.8 1 3 3±7.7 2 6 0 0.5 6 3 5±0.2 2 0 9 6

厚壁菌門（Firmicutes）的構(gòu)成比例：CON>AVCPL>AVCP-M>BQVT>AVCP-H>MOD，和擬桿菌門（Bacteroidetes）的構(gòu)成比例剛好相反。厚壁菌門/擬桿菌門之比[Firmicutes（%）/Bacteroidetes（%）]：CON>AVCP-L>AVCP-M>BQVT>AVCP-H>MOD。

2.3.2 科水平上各個處理組腸道菌群分析 如表3所示，在被檢測出的42個菌科中，對各樣品中豐度大于95%的科進行了統(tǒng)計，小于5%的計入其它。所有糞便樣品的處理組中，相對豐度較高的科共檢測到7個。厚壁菌門芽孢桿菌綱：乳桿菌科（Lactobacillaceae）；厚壁菌門梭菌綱：消化鏈球菌科（Peptostreptococcaceae）、瘤胃菌科（Ruminococcaceae）、毛螺菌科（Lachnospiraceae）；擬桿菌門擬桿菌綱：擬桿菌科（Bacteroidaceae）、擬桿菌科（Bacteroidales-S24-7-group）、普雷沃氏菌科（Prevotellaceae）。

表3 各組主要菌科相對豐度表（±s，n=3）

表3 各組主要菌科相對豐度表（±s，n=3）

注：與空白組相比，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與模型組相比，*P<0.05，**P<0.01。

組別 乳桿菌科 消化鏈球菌科 瘤胃菌科 毛螺菌科 擬桿菌科 擬桿菌科_S 2 4-7_g r o u p 普雷沃氏菌科C O N 0.2 8 2 9±0.0 9 0 6 0.0 0 9 3±0.0 0 2 6 0.0 5 9 3±0.0 0 0 4 0.0 8 3 2±0.0 3 8 1 0.0 5 4 0±0.0 3 8 2 0.2 1 7 1±0.0 3 3 6 0.2 5 5 8±0.0 5 4 2 M O D 0.0 8 6 1±0.0 8 1 9▲0.0 0 2 4±0.0 0 1 8 0.1 1 0 3±0.0 3 2 3 0.1 1 0 7±0.0 7 4 5 0.0 3 5 8±0.0 0 6 9 0.1 4 7 5±0.0 3 8 9 0.4 2 7 7±0.1 2 7 4▲B Q V T 0.1 7 6 5±0.1 3 6 8 0.0 0 5 4±0.0 0 3 0 0.0 9 5 8±0.0 1 9 5 0.0 6 5 7±0.0 1 6 1 0.0 6 1 8±0.0 2 2 6 0.2 2 6 6±0.1 5 2 1 0.3 1 3 6±0.0 9 5 3 A V C P-L 0.1 5 3 7±0.1 0 5 8 0.0 0 9 4±0.0 0 6 9 0.0 7 4 1±0.0 1 2 8 0.1 6 2 6±0.1 0 3 5 0.0 4 9 2±0.0 2 7 6 0.2 7 8 5±0.1 2 8 3 0.2 2 7 0±0.0 4 9 1*A V C P-M 0.0 7 1 6±0.0 2 6 4▲0.0 3 8 6±0.0 2 5 8▲▲**0.1 0 7 8±0.0 2 7 9 0.1 6 2 6±0.0 5 8 3 0.0 6 3 1±0.0 2 2 4 0.2 3 1 8±0.0 4 8 3 0.2 7 5 6±0.0 5 7 8 A V C P-H 0.0 6 6 5±0.0 4 8 0▲0.0 0 5 0±0.0 0 3 2 0.1 4 5 0±0.0 7 0 0▲ 0.0 9 2 7±0.0 5 1 9 0.0 4 3 9±0.0 2 0 9 0.1 4 4 0±0.0 0 6 7 0.4 2 2 3±0.1 0 3 0▲

乳桿菌科（Lactobacillaceae，屬厚壁菌門）比例：CON>BQVT>AVCP-L>MOD>AVCP-M>AVCP-H；MOD、AVCP-M、AVCP-H 3組乳桿菌科（Lactobacil laceae）的比例顯著低于 CON（P<0.05）；BQVT、AVCPL和CON 3組乳桿菌科（Lactobacillaceae）構(gòu)成比例沒有差異性（P>0.05）。

消化鏈球菌科（Peptostreptococcaceae，屬厚壁菌門）比例：AVCP-M>AVCP-L>CON>BQVT>AVCP-H>MOD；AVCP-M 中消化鏈球菌科（Peptostreptococcaceae）的相對豐度均顯著大于 CON、MOD（P<0.01）。

瘤胃菌科（Ruminococcaceae，屬厚壁菌門）比例：AVCP-H>MOD>AVCPM>BQVT>AVCP-L>CON；AVCP-H瘤胃菌科（Ruminococcaceae）的相對豐度顯著大于CON（P<0.05）；且AVCP-H的瘤胃菌科（Ruminococcaceae）相對豐度也顯著大于AVCP-L（P<0.05）。

普雷沃氏菌科（Prevotellaceae，屬擬桿菌門）比例：MOD>AVCP-H>BQVT>AVCP-M>CON>AVCP-L。同CON相比，MOD、AVCP-H兩組普雷沃氏菌科（Prevotellaceae）相對豐度顯著大于 CON（P<0.05）；和MOD相比，AVCP-L普雷沃氏菌科（Prevotellaceae）相對豐度顯著小于MOD（P<0.05）。

毛螺菌科（Lachnospiraceae）、擬桿菌科（Bacteroidaceae）、擬桿菌科 _S24-7_group（Bacteroidales_S24-7_group）3個菌科構(gòu)成比例各組之間并沒有顯著性差異（P>0.05）。

2.3.3 屬水平上各個處理組腸道菌群分析 在被檢測出的121個菌屬中，對各樣品中豐度大于95%的科進行了統(tǒng)計，小于5%的計入其它。所有糞便樣品的處理組中，相對豐度較高的屬共檢測到13個，如圖3所示。

圖3 各處理組在屬水平上的豐度

CON組的優(yōu)勢菌屬：乳桿菌屬（Lactobacillus 28.29%）、norank_f_Bacteroidales_S24-7_group（21.71%）；MOD組的優(yōu)勢菌屬：Prevotella_9（22.2%）、norank_f_Bacteroidales_S24-7_group（14.75%）；BQVT組的優(yōu)勢菌屬：norank_f_Bacteroidales_S24-7_group（22.66%）、Lactobacillus（17.65%）；AVCP-L 組主要優(yōu)勢菌屬：norank_f_Bacteroidales_S24-7_group（27.85%）、Lactobacillus（15.37%）；AVCP-M 組主要優(yōu)勢菌屬：norank_f_Bacteroidales_S24-7_group（23.18%）；AVCP-H組主要優(yōu)勢菌屬：Prevotella_9（16.50%）、norank_f_Bacteroidales_S24-7_group（14.40%）；與CON組相比，化療藥5-FU組所致大鼠普雷沃菌屬Prevotella_9相對豐度增加明顯，乳桿菌屬Lactobacillus明顯降低，一個未知門類的菌屬norank_f_Bacteroidales_S24-7_group降低。與CON組相比，BQVT、AVCP-M普雷沃菌屬Prevotella_9相對豐度降低，AVCP-L普雷沃菌屬Prevotella_9比例增加。與CON組相比，其它各組乳桿菌Lactobacillus比例均降低，BQVT和AVCP-L的下降幅度低于其它各組。乳桿菌屬Lactobacillus的相對豐度：CON>BQVT>AVCP-L>AVCP-H>MOD>AVCP-M；和CON組相比，MOD（P<0.05）、AVCP-H（P<0.05）、AVCP-M（P<0.01）3組Lactobacillus屬的比例顯著低于空白組，BQVT及AVCP-L和空白組乳桿菌屬Lactobacillus的比例和CON沒有差異性（P>0.05）；對比CON，BQVT、AVCP-L及AVCP-M中1個未知門類的菌屬norank_f_Bacteroidales_S24-7_group的相對豐度增加，且AVCP-L組的增幅最大。

2.3.4 樣本層級聚類分析 如圖4可知：CON（A5、A2、A8）聚為一簇，模型組 MOD（B3、B1、B2）聚為一簇，且CON和MOD距離最遠；其它各組呈分散型介于二者之間，其中砂仁復(fù)方低劑量組AVCP-L（F8、F10、F1）、陽性藥思連康組 BQVT（C6、C4、C1）距離相對空白組CON的距離最近。

圖4 各組糞便菌群OTU水平上的樣本層級聚類分析

3 討論

健康腸道中微生物組成穩(wěn)定、多樣性較高，飲食結(jié)構(gòu)、藥物誘導(dǎo)等因素會對腸道微生物造成不同程度的影響，引起腸道菌群、多樣性改變等，可能引發(fā)不同疾病，潰瘍性結(jié)腸炎患者的腸道菌群物種數(shù)及多樣性都顯著低于健康人體[17]。本研究顯示，化療藥5-FU所致大鼠SD大鼠OTU數(shù)顯著大于正常SD大鼠；但化療藥5-FU所致大鼠的Simpson指數(shù)大于空白組，提示化療藥5-FU所致大鼠物種數(shù)增加，但物種多樣性低于空白組。

OUT數(shù)和Alpha多樣性指數(shù)能反應(yīng)腸道菌群的數(shù)量及菌群的多樣性[18-19]，Huang Y[20]等采集白血病兒童腸內(nèi)容物進行16S rRNA測序，發(fā)現(xiàn)白血病患兒OTU數(shù)等指數(shù)均顯著低于健康人群；本研究中OUT數(shù)和Alpha多樣性指數(shù)中Chao1指數(shù)分析結(jié)果幾乎吻合，由OUT數(shù)、Chao1指數(shù)分析表明MOD、AVCPM的物種數(shù)明顯高于CON；由Simpson指數(shù)，得出AVCPM、AVCP-L腸道菌群物種多樣性顯著高于MOD。提示化療藥5-FU所致大鼠腸道物種數(shù)明顯增加，但腸道菌群多樣性低于其它所有實驗組，且明顯低于砂仁復(fù)方低劑量組及砂仁復(fù)方中劑量組。

5-FU所致大鼠腸道糞便菌群擬桿菌門（Bacteroidetes）比例增加、厚壁菌門（Firmicutes）的比例減少、厚壁菌門/擬桿菌門[Firmicutes（%）/Bacteroidetes（%）]之比降低；這與陳曉慧[21]等的研究化療后，伴隨著腸道黏膜炎的發(fā)生，腸道菌群的種類和比例發(fā)生了顯著的變化，擬桿菌、腸桿菌等厭氧菌數(shù)量增加具有一定統(tǒng)一性。AVCP-L擬桿菌門（Bacteroidetes）比例、厚壁菌門（Firmicutes）的比例、厚壁菌門/擬桿菌門之比[Firmicutes（%）/Bacteroidetes（%）]之比都更接近CON，表明砂仁復(fù)方低劑量可能具有一定調(diào)節(jié)化療后擬桿菌門、厚壁菌門作用，并使之接近空白組。

砂仁復(fù)方中劑量可以顯著性調(diào)高化療藥5-FU所致Peptostreptococcaceae相對豐度的降低，并顯著高于MOD及CON；陽性藥思連康、砂仁復(fù)方低、高劑量對化療藥5-FU所致Peptostreptococcaceae相對豐度的降低也具有一定調(diào)節(jié)作用。孫志高[22]等認(rèn)為，化療后腸道益生菌數(shù)量（豐度）減少。這與本實驗結(jié)果化療藥5-FU所致大鼠乳桿菌科相對豐度明顯低于CON具有一致性；陽性藥思連康和砂仁復(fù)方低劑量可能具有一定調(diào)高化療藥5-FU所致大鼠乳桿菌科（Lactobacillaceae）比例，使之接近正常水平。化療藥5-FU所致大鼠普雷沃氏菌科（Prevotellaceae）相對豐度明顯增加，且砂仁復(fù)方低劑量可以顯著性降低5-FU腹腔注射后普雷沃氏菌科（Prevotellaceae）比例的升高。砂仁復(fù)方低劑量可能主要通過調(diào)高乳桿菌科（Lactobacillaceae）、消化鏈球菌科比例以及降低瘤胃菌科（Ruminococcaceae）的比例來調(diào)節(jié)厚壁菌門的平衡；普雷沃菌屬普雷沃菌屬與抗生素相關(guān)性腹瀉（AAD）的發(fā)生和治療密切相關(guān)[23]。乳酸桿菌一直被認(rèn)為是維持腸道健康的典型有益菌，可以促進乳糖不耐受人群消化乳糖、減少便秘和腹瀉、抑制腸道感染、減輕炎癥反應(yīng)等[24]。相對于健康人群，克羅恩病患者糞便中瘤胃球菌數(shù)量增多[25]，本研究中，和空白組相比，其它實驗組瘤胃球菌數(shù)量均有不同程度的增加。同時，砂仁復(fù)方低劑量還能顯著性降低普雷沃氏菌科厭氧致病菌的比例，維持腸道微生態(tài)的平衡。另外，砂仁復(fù)方中劑量對消化鏈球菌科化療后比例降低有顯著的調(diào)高作用，并高于空白組。陽性藥思連康對益生菌乳桿菌科（屬厚壁菌門Lactobacillaceae）化療后比例降低的調(diào)高作用優(yōu)于砂仁復(fù)方低劑量。

吳英韜[26]等的研究益生菌混合液對5-FU腹腔注射SD大鼠腸道菌群的調(diào)節(jié)作用，顯示聚類分析5-FU腹腔注射模型組單獨歸為一類，空白組及益生菌低劑量、益生菌高劑量歸為一類；與本研究聚類分析發(fā)現(xiàn)化療藥5-FU所致大鼠單獨歸為一類、空白組也單獨歸為一類、其它組介于二者之間；化療藥5-FU所致大鼠腸道菌群物種多樣性降低具有一致性。本研究樣本層級聚類分析可以看出，砂仁復(fù)方復(fù)方低、中劑量、陽性藥思連康對化療藥5-FU所致大鼠普雷沃菌 屬 Prevotella_9、 乳 桿 菌 屬 Lactobacillus、norank_f_Bacteroidales_S24-7_group相對豐度的變化，具有一定調(diào)節(jié)作用。陽性藥思連康和砂仁復(fù)方低劑量對化療藥5-FU所致大鼠Lactobacillus屬相對豐度顯著降低，具有明顯抑制作用。

Fang W[27]等研究葡聚糖硫酸鈉（DSS）誘導(dǎo)的BALB/c小鼠結(jié)腸炎模型中腸道菌群多樣性降低、革蘭氏陰性菌增多。與本研究中5-FU所致大鼠norank_f_Bacteroida-les_S24-7_group比例降低32.06%，腸道菌群多樣性降低等具有一致性。故砂仁復(fù)方對化療藥5-FU所致大鼠腸道菌群多樣性降低等均具有明顯調(diào)節(jié)作用。