多次輸血產(chǎn)生抗-E、抗-c聯(lián)合抗-Wra抗體致疑難配血一例

郝蕭 刁雪芹 魯雯雯 張紅 夏小葉

臨床患者在輸血前進行不規(guī)則抗體篩查試驗，不規(guī)則抗體是引起臨床配血不合的主要原因。對于不規(guī)則抗體篩查陽性患者，需進行進一步的抗體鑒定，確定抗體特異性，然后選擇相應抗原陰性的獻血者紅細胞進行輸注，保障臨床輸血安全。本實驗室發(fā)現(xiàn)一例抗-E、抗-c聯(lián)合抗-Wra抗體導致配血不合，現(xiàn)報道如下。

材料與方法

1 標本來源 患者何某，女，71歲，臨床診斷T-細胞大顆粒淋巴細胞白血病，上呼吸道感染，重度貧血入院，Hb 24 g/L，既往有多次輸血史，抗體篩查陽性，送我室進行配血。

2 儀器與試劑 抗-A、抗-B 血清（上海血液生物，批號：201809019）；ABO標準紅細胞（上海血液生物，批號：20205313）；（IgG+IgM） 抗D（上海血液生物，批號：20191807）抗-C 、抗-c、抗-E、抗-e（上海血液生物，批號：20193001，20183102，20203201，20183302）；抗-Wra（Sanquin 批號：8000233510）；抗體篩選細胞（Sanquin 批號：8000450705）；抗體鑒定譜細胞（Sanquin 批號：8000450012）；抗人球蛋白試劑多抗（Sanquin 批號為8000226471）；Anti-IgG單抗（Sanquin批號為8000229804）；MC450全自動洗滌離心機（日本日立）；KUBOTA KA-2200離心機（日本久保田）；毛血管超速離心機（KUBOTA-322）；水浴箱JULAB-20B；BioVUE 孵育器和離心機。

3 試驗方法 血型鑒定方法：用試管法；抗體篩查、抗體鑒定及抗體效價鑒定：用室溫鹽水試管立即離心 （NS法）及微柱凝膠卡式法（Gel）；木瓜酶法：抗體鑒定譜細胞與等體積配制好的木瓜酶37 ℃孵育15 min，生理鹽水洗滌3次，離心取壓積紅細胞備用。處理完的細胞用直接抗人球?qū)嶒炞鰧φ镇炞C是否處理成功，如果直抗結果陽性，說明紅細胞被致敏，需要重新配制。

毛細管離心法：取患者400 μL紅細胞洗滌3次，取壓積紅細胞轉(zhuǎn)入2支毛細管，底部用橡皮泥封堵后進行毛細管超速離心15 min（封閉端置于遠心端），轉(zhuǎn)速為10 000 r/min。分別取近心端、遠心端紅細胞配制成2%～5%紅細胞懸液備用[1]。

結 果

1 患者血型 為A型，RhD（+），Wra抗原表型呈雙群現(xiàn)象，Rh系統(tǒng)分型CcEe，其中c、E為混合視野2+mf。采用毛細管離心法后鑒定患者Wra（-），Rh系統(tǒng)分型為CCee。

2 直接抗人球蛋白試驗 抗IgG+C 3d（多抗）：2+；抗-IgG：2+；抗-C3d：0。

3 抗體篩查 患者血清與2號篩選細胞鹽水不反應，卡式與2號篩選細胞反應強度達2+，酶法與2號篩選細胞反應增強呈3+，與3號篩選細胞出現(xiàn)1+，抗體篩查結果見表1。結果顯示，患者血清中存IgG類不規(guī)則抗體，酶法能增強反應強度。

表1 不規(guī)則抗體篩查結果

4 抗體鑒定 聯(lián)合應用兩個批次的譜細胞進行抗體鑒定，根據(jù)抗體鑒定結果，見表2，對照譜細胞格局分析，患者體內(nèi)含有：抗-E、抗-c聯(lián)合抗-Wra。

表2 譜細胞（8000450012）抗體鑒定結果

5 抗體效價測定 患者血清用譜細胞（8000450501）11號（E+，c-）卡式法測抗-E抗體的效價為3 2；譜細胞4號（E-，c+）卡式法測抗-c抗體的效價為2；用譜細胞（8000450012）5號（E-，c-，Wra+）卡式法測抗-Wra抗體的效價為16。

6 配血 連續(xù)兩次從血庫中篩選出E抗原、c抗原及Wra抗原陰性的獻血者的紅細胞共8 U，鹽水和卡式配血主側相合，無凝集無溶血。一周后再次挑選6 U 相應抗原陰性的紅細胞。

7 隨訪 跟蹤該患者，醫(yī)院拿回8 U紅細胞后分四次，每次間隔一天輸注，第一次輸注2 U后升至32 g/L，至第四次輸注完隔天查血常規(guī)血紅蛋白升至67 g/L。一周后再次輸血6 U后血紅蛋白升由67 g/L至99 g/L，輸血效果良好，無溶血性輸血反應。

討 論

Rh血型系統(tǒng)是所有血型系統(tǒng)中最復雜的，最常見的五個抗原有C、c、D、E、e。Rh血型系統(tǒng)的抗體多由輸血或妊娠免疫生成[2]，其臨床意義僅次于ABO 血型系統(tǒng)，可能會造成嚴重的溶血性輸血反應和新生兒溶血病。雖然輸血技術在不斷提高，但是不規(guī)則抗體漏檢的情況還經(jīng)常發(fā)生[3-5]，為提高臨床輸血的安全性，減少因抗體漏檢導致的溶血性輸血反應，該現(xiàn)象應該引起足夠的重視。本患者采用常規(guī)方法檢測發(fā)現(xiàn)抗-c抗體的格局沒有完全顯示出來，推測抗-c抗體較弱，進而我們采用經(jīng)木瓜酶處理后的不規(guī)則篩查細胞與譜細胞加強試驗進而鑒定抗-c抗體格局完全出來。提示我們當抗原抗體反應弱時可以通過酶處理細胞提高Rh系統(tǒng)抗體的檢測[2]。

該患者Rh抗原分型c與E存在混合視野，患者存在輸血史，考慮為之前輸入了抗原c（+）、E（+） 的紅細胞造成的混合視野，進而產(chǎn)生抗-E、抗-c抗體。經(jīng)毛細管離心法對自身紅細胞及輸入的獻血者的紅細胞進行分離后鑒定患者Rh抗原分型為CCDee。對于近期輸血的患者應采用毛細管超速離心法對患者紅細胞及獻血者的紅細胞進行分離后鑒定患者的血型。Wra抗原的鑒定采用間接抗人球方法，由于患者直抗陽性，無法正確定型，經(jīng)毛細管離心后，取患者紅細胞做熱放散致直抗陰性后，鑒定患者Wra抗原為陰性。

Wra是Diego血型系統(tǒng)的低頻抗原，在中國人群中頻率＜0.01%[6-7]。一些作者報道了在輸過血的患者和孕婦的血清中抗-Wra的發(fā)生率較高，抗-Wra的發(fā)病率可能在免疫系統(tǒng)變得活躍時增加[8，9]。該患者為IgG型抗-Wra。鑒于該抗體在溶血性貧血患者體內(nèi)的高發(fā)頻率，為了保障輸血安全，建議增加抗-Wra鑒定。本實驗用了兩套譜細胞進行鑒定，16個譜細胞（8000450501）凝集強度有格局，除了16號鑒定細胞反應強度外其他的均符合抗-E和抗-c的格局，抗-c反應強度弱陽性，但是16號細胞（E-，c+）反應強度達2+，顯示還存在除了抗-c抗體以外其他的抗體，符合該特征的只有抗-Wra抗體。進一步用批號為8000450012的16個譜細胞進行鑒定，該批次的細胞中5號譜細胞抗原表型為E（-），c（-），Wra（+），該細胞的凝集強度達2+，說明患者確實存在抗-Wra抗體。鑒于該抗體在多次輸血的溶血性貧血患者體內(nèi)高發(fā)，為了保障輸血安全，建議臨床輸血檢驗人員在不規(guī)則抗體鑒定時增加抗-Wra鑒定。避免抗體漏檢要做到檢測時，使用多種試驗方法與試劑相結合，不同試劑與試驗方法的靈敏度各異，是減少抗體漏檢的有效途徑。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突