浙江地區(qū)12月齡內(nèi)嬰兒的ABO血型抗體檢出變化初探

蔡晟陽 徐軍 陳學軍 尹明偉 周超 馬繼華 李靈

ABO血型是輸血醫(yī)學和器官移植醫(yī)學中重要的血型系統(tǒng)，若輸注ABO不相容的血液可能導(dǎo)致嚴重的臨床后果。因此，正確鑒定ABO血型是確保臨床輸血安全有效的前提和重要措施[1]。一般認為，嬰兒特別是新生兒紅細胞上的抗原未完全形成，大多在出生3～6月才開始規(guī)律產(chǎn)生抗-A、抗-B[2-4]，在進行嬰兒ABO血型鑒定時常出現(xiàn)正反定型不一致的現(xiàn)象。

美國血庫協(xié)會(American Association of Blood Banks，AABB）規(guī)定，≤4個月的嬰兒受血者ABO血型鑒定，只要求做紅細胞血型鑒定（正定型），而不必做反定型[5]。我國目前尚未明確規(guī)定對于幾月齡的嬰兒適宜開展ABO正反定型檢測，少量國內(nèi)輸血研究建議對≤6個月的嬰兒受血者，鑒定ABO血型只作正定型，對＞6個月的嬰兒受血者則同時作正反定型相互印證[2,6-7]。

為探索1周歲內(nèi)嬰兒的ABO血型鑒定、血型抗體產(chǎn)生趨勢，探討適用于本地區(qū)嬰兒開展血型正反定型檢測的合適月齡，我們對本院2020年3月～2020年4月824例12月齡內(nèi)的嬰兒血液標本進行ABO血型微柱凝膠法正反定型檢測和分析，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

材料與方法

1 研究對象 連續(xù)收集本院2020年3月～2020年4月期間，所有常規(guī)送檢ABO血型鑒定的1周歲內(nèi)嬰兒作為研究對象，排除血液系統(tǒng)疾?。?例）、新生兒ABO溶血?。?5例）、早產(chǎn)兒（46例）、抗篩陽性（11例）、血漿量少（5例）后，共計824例，如圖1所示。該項目中涉及血液標本均為患兒自身臨床診治需要而常規(guī)采集的血樣，該研究項目獲浙江大學醫(yī)學院附屬兒童醫(yī)院倫理委員會批準同意，（倫）審編號：2021-JRB-147。

圖1 篩選研究對象流程

2 試劑與儀器

2.1 試劑：ABO血型正/反定型和RhD血型檢測卡（批號：50093.60.14）、低離子抗人球蛋白卡（批號：50531.38.19）、樣本稀釋液（ID-Diluent 2）（批號：05761.00.05），均為美國伯樂公司產(chǎn)品瑞士達亞美公司提供；人ABO血型反定型用紅細胞（批號：2 0 2 0 5 3 0 4）、抗體篩選紅細胞（批號：20207006），均為上海血液生物醫(yī)藥有限責任公司產(chǎn)品。

2.2 儀器：IH 1000全自動血型配血分析儀、孵育器（ID-Incubator 37SI）和卡式離心機（ID-Centrifuge

1 2SII）均為美國伯樂公司產(chǎn)品，醫(yī)用低速離心機（B a s o 2 0 0 5-1）為臺灣貝索公司產(chǎn)品，移液器（Eppendorf）。

3 方法

3.1 全自動血型鑒定：將抗凝全血量≥1 mL的樣本離心處理后，取蓋，裝載放置于IH 1000全自動血型配血分析儀中，使用配套的微柱凝膠血型卡進行檢測，記錄血型卡正反定型的凝集強度及結(jié)果。

3.2 手工微柱凝膠法：將抗凝全血量＜1 mL的樣本離心后，取壓積紅細胞用達亞美2號稀釋液配制成5%的紅細胞懸液，取10 μL分別加入微柱凝膠卡的A-B-Dctl孔，于反定型孔中加入患者血清50 μL，再分別加入0.8%的反定型A1紅細胞和B紅細胞50 μL。將卡放置于卡式離心機上1 000 r/min離心10 min，判讀并記錄血型卡正反定型的凝集強度及結(jié)果。

3.3 結(jié)果判斷：血型卡正反定型的凝集強度及結(jié)果判讀標準參照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》（第四版）[8]；其中正定型凝集強度≥3+，反定型凝集強度≥1+，確定為正反定型相符。

4 統(tǒng)計學分析 數(shù)據(jù)采用IBM SPSS 20軟件處理分析。率的比較采用卡方檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié) 果

1 嬰兒血型分布情況 8 2 4例患兒中，男性4 6 2名（5 6.1%），女 性3 6 2名（4 3.9%）；A型2 4 2例（2 9.4%），B型2 3 8例（2 8.9%），O型2 8 2例（34.2%），AB型62例（7.5%），其中RhD陽性821例（99.6%），RhD陰性3例（0.4%）。

2 各月齡組嬰兒ABO血型抗體檢出情況及其變化趨勢 因AB型患兒無抗-A、抗-B產(chǎn)生，本研究僅對其中的762例A型、B型和O型患兒進行抗體檢出觀察分析。將762例患兒按月齡從小到大分為12個組，依次為：0～1月、1～2月、2～3月、3～4月、4～5月、5～6月、6～7月、7～8月、8～9月、9～10月、10～11月、11～12月。各月齡嬰兒血型抗體（抗-A和抗-B）檢出情況見表1，血型抗體檢出率與月齡之間的變化趨勢見圖2。具體的抗體檢出和變化現(xiàn)象如下：①自出生至3個月，嬰兒ABO血型抗體的檢出率隨月齡的增加逐漸下降；②自3月齡開始至1周歲，血型抗體的檢出率隨月齡的增加呈不斷上升的趨勢；③0～6月嬰兒ABO血型抗體檢出率與6～12月者有顯著性差異（P＜0.01）；6～7月時抗體檢出率從5～6月時的40.9%躍升至72.7%；④至12月齡時，嬰兒的ABO血型抗體已幾乎可以全部檢出。

圖2 762例A、B、O型嬰兒不同月齡時的ABO血型抗體檢出率變化趨勢圖

表1 762例12月齡內(nèi)A、B、O型嬰兒的ABO血型抗體檢出情況

3 不同ABO血型母親的新生兒其血型抗體的檢出率比較 為進一步分析新生兒（定義為出生至28天者）ABO血型抗體的來源，通過病歷查詢本研究中434例新生兒的母親血型，無法查到母親血型的51例。383例新生兒母親中，母親為O型的133例，母親為AB型的38例，母親為A型的98例，母親為B型的114例，383例新生兒的ABO血型抗體檢出率為43.3%（166/383），其中不同ABO血型母親對應(yīng)的新生兒血型抗體檢出情況詳見表2。

表2 不同ABO血型母親的新生兒ABO血型抗體檢出情況比較

4 嬰兒血型抗體（抗-A和抗-B）的產(chǎn)生情況比較在762例血型為A、B、O的12月齡內(nèi)嬰兒中，抗-A和抗-B的產(chǎn)生情況比較詳見表3。

表3 762例12月齡內(nèi)嬰兒血型抗體（抗-A和抗-B）的產(chǎn)生情況比較

討 論

傳統(tǒng)觀點認為，嬰兒出生后尚無或很少產(chǎn)生抗-A和抗-B，這類抗體需隨著生長發(fā)育逐漸生成。本研究中，嬰兒自出生至3個月其ABO血型抗體的檢出率隨月齡的增加逐漸下降，顯然與傳統(tǒng)觀點相矛盾。周金安等[3]利用2-Me破壞正反定型一致的新生兒血樣中所有可能的IgM抗體后，再通過凝膠抗球蛋白卡測定并比較破壞前后抗-A和抗-B效價的變化情況以確定抗體性質(zhì)，發(fā)現(xiàn)破壞前后新生兒血型抗體效價無變化的高達93.9%[3]，認為凝膠血型卡測出的新生兒血型抗體主要為IgG性質(zhì)，最大可能是來自于母親，而非新生兒自身產(chǎn)生。IgG抗體由于分子量較小，在妊娠過程中能夠順利通過胎盤屏障進入胎兒體內(nèi)[9]，其半衰期約為1～3周[10]。前3個月，來自母體的IgG抗體不斷地被消耗代謝，嬰兒自身產(chǎn)生血型抗體的速度慢于來自母體抗體被消耗的速度，王曉衛(wèi)[2]與周金安[11]等報道和我們的研究結(jié)果均證實了嬰兒自出生至3個月其ABO血型抗體的檢出率隨月齡增加而逐漸下降的客觀存在。另外，我們也需更新認知，微柱凝膠血型卡具有分子篩效應(yīng)，低離子溶液也能增加ABO血型抗體的凝集強度[12]，提高檢測敏感性，其反定型試驗?zāi)軠y出IgG類抗-A、抗-B等血型抗體。

本研究中也發(fā)現(xiàn)：自3月齡至1周歲，嬰兒ABO血型抗體的檢出率隨月齡的增加呈不斷上升的趨勢；在6～7月時，抗體檢出率由5～6月時的40.9%躍升至72.7%；至12月齡時，血型抗體已幾乎可以全部檢出。隨著來自母體的IgG抗體逐漸消失，嬰兒受天然血型物質(zhì)刺激的程度與強度逐漸增強，其ABO血型抗體產(chǎn)生率也隨月齡增加逐漸升高；而6月齡后的嬰兒可能因戶外活動增加、添加輔食、食物多樣性增加等，加大了其通過呼吸道、消化道接觸菌群的機會，提高了產(chǎn)生血型抗體的幾率[7]。另外，我們的研究結(jié)果中10～11月嬰兒的血型抗體檢出率有所下降，可能與該月齡組樣本量較少而出現(xiàn)結(jié)果偏倚有關(guān)。

本研究還統(tǒng)計分析了383例新生兒的母親血型，發(fā)現(xiàn)O型母親的新生兒血型抗體檢出率（85.7%）顯著高于AB型母親者（5.3%）（P＜0.01），B型母親的新生兒血型抗體檢出率(33.3%)顯著高于A型母親者（12.2%）（P＜0.01）。一般認為，A型和B型個體主要的同種抗體是IgM型，IgG型抗體占少數(shù)，而O型血清的抗-A和抗-B主要為IgG型抗體[5,13]。O型母親體內(nèi)的高效價IgG抗體通過胎盤屏障進入胎兒體內(nèi)，這也解釋了母親為O型的新生兒血型抗體檢出率高達85.7%的原因；而AB型母親體內(nèi)不存在抗-A和抗-B，其對應(yīng)的新生兒血型抗體檢出率僅為5.3%，進一步從側(cè)面反映出新生兒自身產(chǎn)生血型抗體的比例非常低。

研究表明，無論在自然界或者人體內(nèi)部，A抗原在數(shù)量及抗原性方面均強于B抗原，因而免疫產(chǎn)生的抗-A數(shù)量多于抗-B，且產(chǎn)生時間早于抗-B[14-15]。本研究結(jié)果顯示：B型母親的新生兒其血型抗體檢出率（3 3.3%）顯著高于A型母親者（1 2.2%）（P＜0.01），1周歲內(nèi)嬰兒抗-A檢出率高于抗-B檢出率，進一步驗證了上述研究報道[2,14-15]的結(jié)論與觀點。

盡管美國AABB推薦4月齡內(nèi)嬰兒ABO血型鑒定只需進行正定型，我們綜合本研究及以上相關(guān)文獻分析，推薦本地區(qū)6月齡內(nèi)嬰兒ABO血型鑒定只需進行正定型，＞6月齡嬰兒進行ABO正反定型檢測，更符合國內(nèi)臨床工作實際。對于6月齡以上嬰兒正反定型不一致者，可結(jié)合增強鹽水試管法等多種免疫血液學方法增加血型抗體的檢出率，更有利于準確判定血型[13,16-17]。對于尚未產(chǎn)生相應(yīng)血型抗體的嬰兒，若在ABO正定型中尚存不確定時，可以考慮采用分子生物學方法[18]。

本研究也存在一些局限性：系單中心研究，3月齡及以上組嬰兒納入例數(shù)偏少，受條件限制未能對收集到的嬰兒標本進行用于區(qū)分血型抗體IgM或IgG來源的直接實驗。將來擴大標本量進行更深入的分析研究仍有必要。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突