血紅蛋白電泳在地中海貧血篩查中的應(yīng)用價(jià)值

張湘，梁莊嚴(yán)（通信作者）

1 潮州市湘橋區(qū)婦幼保健院檢驗(yàn)科 （廣東潮州 521000）；2 廣東醫(yī)科大學(xué)順德婦女兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科 （廣東佛山 528000）

地中海貧血的發(fā)病機(jī)制為遺傳基因缺陷，屬于常見(jiàn)的遺傳性疾病[1]。對(duì)于該病患者，目前臨床缺乏有效的治療方法，患者需依靠輸血改善貧血癥狀，導(dǎo)致其家庭負(fù)擔(dān)較大，因此，盡早篩查地中海貧血對(duì)減少地中海貧血患兒的出生具有重要意義[2]?；驒z測(cè)為地中海貧血的診斷金標(biāo)準(zhǔn)，但檢測(cè)費(fèi)用相對(duì)較高，檢測(cè)耗時(shí)相對(duì)較長(zhǎng)，導(dǎo)致其推廣存在一定局限性。既往研究報(bào)道，血紅蛋白（hemoglobin，Hb）電泳診斷地中海貧血的靈敏度和特異度較高，具有重要的臨床診斷價(jià)值[3]。本研究隨機(jī)選擇1 000 例行地中海貧血篩查的患者作為研究對(duì)象，均予以Hb 電泳檢測(cè)，對(duì)結(jié)果異常的患者行地中海貧血基因檢測(cè)，并以基因檢測(cè)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，分析Hb 電泳的診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選擇2017年12月至2019年12月于潮州市湘橋區(qū)婦幼保健院檢驗(yàn)科進(jìn)行地中海貧血篩查的1 000例患者作為研究對(duì)象，其中男533例，女467例；年齡19～50歲，平均（29.15±4.51）歲；已婚440例，未婚528例，離異32例；受教育年限2～15年，平均（8.15±1.37）年。

納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡>18歲；語(yǔ)言及自主行為正常；簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：凝血功能障礙；合并白血病及多發(fā)性骨髓瘤等血液系統(tǒng)疾病；拒絕參與研究。

1.2 方法

患者均被抽取兩管2 ml 靜脈血，分別用于Hb 電泳檢測(cè)和地中海貧血基因檢測(cè)。

采用全自動(dòng)Hb 電泳儀（伯樂(lè)生物科技有限公司，型號(hào)Bio-Rad）、掃描儀（北京錄典世紀(jì)科技有限公司，型號(hào)LD-FI10MZ）、分析系統(tǒng)（北京君意華鑫科技有限公司）及相關(guān)配套試劑（濟(jì)南森藍(lán)科貿(mào)有限公司）進(jìn)行Hb 電泳檢測(cè)，點(diǎn)樣電泳（22.50±2.50）min 后，由儀器自動(dòng)完成分離區(qū)帶、染色、脫色、透明及烘干等操作。

Hb正常參考范圍為：HbA≥95.0%， HbF<2.0%，HbA2為2.5%～3.5%。異常Hb條帶判定標(biāo)準(zhǔn)為：在堿性條件下[pH為（8.5±0.1）]，蛋白移動(dòng)速度為HbH、HbBart's、HbJ/K、HbA、HbF、HbS/D、HbA2/C/E；無(wú)上述條帶的特殊Hb條帶，可通過(guò)掃描比對(duì)發(fā)現(xiàn)異常條帶。將HbA2<2.5%及（或）出現(xiàn)異常條帶HbH、HbBart's的患者劃分為疑似α-地中海貧血組，將HbA2>3.5%及（或）HbF≥2.0%的患者劃分為疑似β-地中海貧血組。以上均進(jìn)行地中海貧血基因檢測(cè)，采用醫(yī)院現(xiàn)有的地中海貧血基因檢測(cè)試劑盒（深圳亞能生物科技有限公司）及相關(guān)配套儀器（東莞市龍晟生物科技有限公司）以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）+導(dǎo)流雜交法進(jìn)行檢測(cè)[4]。

1.3 觀察指標(biāo)

以基因檢測(cè)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，分析Hb 電泳的診斷價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 Hb 電泳檢測(cè)結(jié)果

1 0 0 0 例患者中，H b 電泳檢測(cè)異常4 4 2 例，占比44.20%；其中HbA2<2.5%共計(jì)187例，HbA2>3.5%及（或）HbF≥2.0%共計(jì)251例，HbH、HbBart's異常條帶分別有1例和3例。

異常條帶和正常成人Hb 電泳條帶的對(duì)比見(jiàn)圖1，其中a 為HbF ≥2.0%和HbA2>3.5%；b 為檢出異常條帶HbH，同時(shí)HbA2減低；c 為HbA2>3.5%；d 為HbA2含量異常增高及含有異常血紅蛋白HbC/E （可疑）；e 為存在大量HbF 的新生兒Hb 電泳條帶；f 為含有少量HbF 的孕婦條帶；g 為檢測(cè)出異常條帶HbBart's；h 為檢測(cè)出異常血紅蛋白HbJ/K；i 為HbA2<2.5%；j 為正常成人Hb 電泳條帶。

圖1 異常條帶和正常成人Hb 電泳條帶

2.2 Hb 電泳檢測(cè)及基因檢測(cè)結(jié)果

以基因檢測(cè)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，Hb電泳診斷地中海貧血的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值及準(zhǔn)確度分別為94.94%（300/316）、11.11%（14/126）、72.82%（300/412）、46.67%（14/30）、71.04%（314/442），見(jiàn)表1。

表1 Hb 電泳診斷地中海貧血及基因檢測(cè)結(jié)果（例）

2.3 地中海貧血確診患者的Hb 電泳結(jié)果比較

α-地中海貧血患者的HbA2及HbA 值均低于陰性者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；β-地中海貧血患者的HbA2值高于陰性者，HbA 值低于陰性者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表2。

表2 地中海貧血確診患者的Hb 電泳結(jié)果比較（%，±s）

表2 地中海貧血確診患者的Hb 電泳結(jié)果比較（%，±s）

注：與未檢出患者比較，aP<0.05；Hb 為血紅蛋白

項(xiàng)目 例數(shù) HbA2 HbA α-地中海貧血 121 2.61±0.77a 94.05±5.83a β-地中海貧血 195 5.97±3.48a 93.22±7.91a未檢出 134 3.34±1.28 97.66±7.84

3 討論

地中海貧血是臨床上常見(jiàn)的遺傳性疾病，我國(guó)南方地區(qū)的發(fā)病率明顯高于北方地區(qū)[5]。該病是由于基因遺傳缺陷致使Hb 中一種或多種珠蛋白鏈合成缺如或不足所導(dǎo)致的貧血或病理狀態(tài)[6]，臨床多根據(jù)癥狀和實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果并結(jié)合家族史進(jìn)行診斷，但地中海貧血患者表現(xiàn)各異，常規(guī)診斷難度較大[7-8]；而且由于基因調(diào)控水平的差異，相同基因突變類(lèi)型的地中海貧血患者的臨床表現(xiàn)并不相同，因此多需要基因檢測(cè)進(jìn)行確診，但基因檢測(cè)耗時(shí)較長(zhǎng)且檢測(cè)費(fèi)用高，導(dǎo)致其臨床推廣具有一定的局限性[9]。

地中海貧血主要包括α-地中海貧血和β-地中海貧血，前者的HbA2水平顯著下降，而后者的HbA2和HbF 水平顯著上升[10]。Hb 電泳是根據(jù)Hb 的等電點(diǎn)不同，將不同的Hb 成分分離出來(lái)后進(jìn)行定量，該技術(shù)不僅能有效提示異常Hb，還可相對(duì)準(zhǔn)確地提示地中海貧血的類(lèi)型，且檢測(cè)速度較快，價(jià)格較實(shí)惠，易被患者所接受[11]。有研究指出，Hb 電泳在地中海貧血篩查中具有良好的診斷價(jià)值，可以有效鑒別診斷地中海貧血及其他血紅蛋白病[12]；但是對(duì)于α-地中海貧血，其診斷特異度欠佳，可能是由于α-地中海貧血的HbA2也存在減低[8]。施雄飛等[13]報(bào)道，Hb 電泳能夠測(cè)定Hb 中HbA 及HbA2的構(gòu)成比例，并可據(jù)此判斷患者的地中海貧血分型。唐寶佳等[14]也指出，Hb 電泳技術(shù)診斷地中海貧血的準(zhǔn)確率高達(dá)90.13%。

本研究結(jié)果顯示，以基因檢測(cè)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，Hb 電泳診斷地中海貧血的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值及準(zhǔn)確度分別為94.94%、11.11%、72.82%、46.67%、71.04%；α-地中海貧血患者的HbA 及HbA2值均低于陰性者；β-地中海貧血者的HbA 值低于陰性者，HbA2值高于陰性者。

綜上所述，在地中海貧血的篩查中，Hb 電泳具有良好的應(yīng)用價(jià)值，可以作為常規(guī)篩查手段之一，但鑒于其還存在一定的假陽(yáng)性及假陰性，因此需通過(guò)基因檢測(cè)作進(jìn)一步確診。