兩種儀器與試劑測定糖化血紅蛋白的對比研究及偏倚評估

李宗祥，彭琳（通信作者），羅繼全，李鳳葉

1 三諾生物傳感股份有限公司 （湖南長沙 410013）；2 湖南省醫(yī)療器械檢驗檢測所（湖南長沙 410014）

糖化血紅蛋白是葡萄糖與紅細(xì)胞中的血紅蛋白持續(xù)且不可逆地進(jìn)行酶促蛋白糖基化反應(yīng)的產(chǎn)物。由于紅細(xì)胞的壽命為120 d 左右，因此，糖化血紅蛋白可反映120 d 內(nèi)的平均血糖水平[1]。研究發(fā)現(xiàn)，糖化血紅蛋白水平與糖尿病微血管病變[2-5]、周圍神經(jīng)病變[6-7]等多種糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生密切相關(guān)。因此，糖化血紅蛋白成了評價血糖控制效果的金標(biāo)準(zhǔn)，而美國糖尿病學(xué)會（The American Diabetes Association，ADA）更是將其作為診斷糖尿病的金標(biāo)準(zhǔn)。

糖化血紅蛋白不僅是評價血糖控制效果的有效指標(biāo)，還可作為糖尿病用藥方案調(diào)整的依據(jù)，因此，其測定結(jié)果的一致性和可比性極為重要。目前，測定糖化血紅蛋白的方法有很多，如色譜法、比濁法、酶法等[8]。近年來，用于糖化血紅蛋白檢測的床旁檢測（point of care testing，POCT）儀器層出不窮，但檢測質(zhì)量參差不齊[9-11]。為滿足臨床需求，不同檢測方法的測定結(jié)果應(yīng)保持一致性，且臨床在引入新的糖化血紅蛋白測試方法時，應(yīng)對新引進(jìn)方法進(jìn)行驗證研究。本研究擬參考EP9-A3《用患者樣本進(jìn)行方法學(xué)比對及偏倚評估——批準(zhǔn)指南；第三版》文件，對三諾Icare 2000（酶法）與東曹HLC-723 G8（色譜法）測定糖化血紅蛋白的結(jié)果進(jìn)行對比研究，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 樣本

收集40份經(jīng)乙二胺四乙酸二鉀（dipotassium dihydrogen ethylenediaminetetraacetate，EDTA-K2）抗凝的新鮮全血樣本，排除溶血、凝血、脂血、嚴(yán)重貧血或血紅蛋白異?；颊邩颖?，其中，在糖化血紅蛋白參考區(qū)間內(nèi)（<6.5%）的樣本數(shù)為20份，參考區(qū)間外（≥6.5%）的樣本數(shù)為20份，將以上樣本儲存于2～8 ℃冰箱中。

1.2 儀器與試劑

東曹HLC-723 G8全自動糖化血紅蛋白分析儀，配套質(zhì)控品（批號：AB1735）；三諾Icare 2000便攜式全自動多功能檢測儀，配套糖化血紅蛋白檢測試劑盒（批號：382A0916）。

1.3 方法

以東曹HLC-723 G8作為對照系統(tǒng)，以三諾Icare 2000作為試驗系統(tǒng)，分別利用兩者隨機(jī)測定收集的40份樣本，每份樣本利用每種儀器僅進(jìn)行1次測定，記錄測試結(jié)果，以及試驗系統(tǒng)三諾Icare 2000的測試值（yi）和對照系統(tǒng)東曹HLC-723 G8的測試值（xi）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

利用SPSS 19.0和Excel 2010等軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計處理，具體如下。（1）離群值判斷：采用廣義極端學(xué)生化偏差（extreme studentized deviate，ESD）方法判斷離群值，即通過公式ESD=（|dj-d|）/SD 計算每份樣本的ESD，其中dj=（yi-xi）/xi，d 為所有dj的均值，SD 為所有dj的標(biāo)準(zhǔn)差，得到最大的ESDi；根據(jù)試驗統(tǒng)計的樣本量n=40，設(shè)定α=0.05的情況下，查詢ESD 臨界值表，λ=3.05，若ESDi>λ，則該檢測結(jié)果可判斷為離群值，予以剔除，再重新進(jìn)行第二大離群值的判斷，最終所剔除份數(shù)不超過數(shù)據(jù)總數(shù)的5%。（2）結(jié)果比對與偏差分析：利用偏差圖評估偏倚，即繪制偏差圖、散點圖，根據(jù)分析方法間散點圖和偏差圖，觀察兩種方法測定結(jié)果的差異分布，并根據(jù)其所呈現(xiàn)的潛在特征，選擇最佳回歸模型對兩個比對系統(tǒng)的結(jié)果進(jìn)行擬合分析，并計算各參數(shù)95%的偏倚；分析醫(yī)學(xué)決定水平處的預(yù)期偏倚，即參考《國家衛(wèi)計生委臨床檢驗中心室間質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)（2017版）》，糖化血紅蛋白可接受范圍取靶值±8%，糖化血紅蛋白的醫(yī)學(xué)決定水平是6.5%，參考1/2室間質(zhì)評，可接受的偏倚范圍為[-0.26，0.26]，結(jié)合回歸方程，計算醫(yī)學(xué)決定水平處預(yù)期偏倚的95%置信區(qū)間，若預(yù)期偏倚的95%置信區(qū)間未超出可接受偏倚限制，則說明試驗系統(tǒng)與對照系統(tǒng)的檢測結(jié)果無顯著偏倚，兩者等效。

2 結(jié)果

2.1 離群值檢驗

對納入定量分析的40份樣本進(jìn)行離群值檢驗，由于總樣本量為40，因此，最多可接受離群值的數(shù)量為2；經(jīng)兩次ESD 離群值判斷，兩種檢測方法的相關(guān)性好，無離群值，見表1。

表1 ESD 離群值檢驗結(jié)果

2.2 偏差圖與回歸分析

繪制對照系統(tǒng)與試驗系統(tǒng)測定結(jié)果的濃度差值偏差圖（圖1）、百分比差值偏差圖（圖2）、濃度差值排序偏差圖（圖3）和百分比差值排序偏差圖（圖4），根據(jù)上述偏差圖分析，差值呈現(xiàn)恒定SD，因此，選擇普通線性回歸（ordinary linear regression，OLR）進(jìn)行回歸分析，見圖5；對回歸模型進(jìn)行假設(shè)檢驗，結(jié)果見表2。

表2 三諾Icare 2000與東曹HLC-723 G8測試結(jié)果的OLR 回歸分析

圖1 濃度差值偏差圖

圖2 百分比差值偏差圖

圖3 濃度差值排序偏差圖

圖4 百分比差值排序偏差圖

圖5 三諾Icare 2000 與東曹HLC-723 G8 測試結(jié)果的OLR 回歸圖

2.3 醫(yī)學(xué)決定水平處的偏倚分析

計算醫(yī)學(xué)決定水平處的預(yù)期偏倚及置信區(qū)間，結(jié)果顯示，醫(yī)學(xué)決定水平處的預(yù)期偏倚95%置信區(qū)間未超出可接受偏倚的限值，兩種檢測系統(tǒng)的檢測結(jié)果無顯著偏倚，兩者等效，見表3。

表3 醫(yī)學(xué)決定水平處的預(yù)期偏倚及置信區(qū)間

3 討論

目前，在國內(nèi)，糖化血紅蛋白已被廣泛用于對糖尿病患者的血糖控制水平評估中。隨著糖化血紅蛋白的應(yīng)用越來越廣，對其檢測結(jié)果的質(zhì)量要求也越來越高。因此，臨床在引入糖化血紅蛋白檢測系統(tǒng)時，應(yīng)做好對其的充分驗證工作。

近年來，市場上涌現(xiàn)了多款POCT 類儀器，這些儀器具有快速、簡便和易于操作的特點，但同時也帶來了質(zhì)量控制問題。以三諾Icare 2000為例，這款系統(tǒng)僅需采集樣本即可完成指尖血與靜脈全血的檢測，省去了復(fù)雜的樣本前處理操作，給臨床帶來了便利，但檢測結(jié)果質(zhì)量仍是首要考察的內(nèi)容，本研究參考EP9-A3，以東曹HLC-723 G8全自動糖化血紅蛋白分析儀為對照，建立了簡單、有效的產(chǎn)品評價方法，結(jié)果表明，兩種檢測方法的檢測結(jié)果經(jīng)ESD方法確認(rèn)無離群值，進(jìn)一步分析方法間的各類偏差圖，總體呈現(xiàn)恒定SD 變化，選擇OLR 分析模型擬合，兩種方法間的相關(guān)系數(shù)平方達(dá)到0.99以上，不存在比例偏差和系統(tǒng)偏差，且在醫(yī)學(xué)決定水平處，兩種方法的預(yù)期偏倚小于可接受標(biāo)準(zhǔn)，兩種方法的檢測結(jié)果具有可比性，可滿足臨床需求。