殺菌劑對(duì)王草草莖點(diǎn)霉葉斑病病原菌的室內(nèi)毒力測(cè)定①

陸 英 林培群 粱艷瓊 賀春萍 黃 興 吳偉懷 易克賢

（中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護(hù)研究所/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部熱帶農(nóng)林有害生物入侵檢測(cè)與控制重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室/海南省熱帶農(nóng)業(yè)有害生物檢測(cè)監(jiān)控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 海南海口 571101）

王草（Pennisetum），別稱皇草、皇竹草，是以象草為母本、美洲狼尾草為父本雜交（Pennisetum purpureum×P. americanum） 育 種 而 成［1］。1982 年由中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院從哥倫比亞引進(jìn)，經(jīng)過多年試種選育而成，定名為熱研4 號(hào)王草［2］。王草為多年生牧草，具有產(chǎn)量高、生長(zhǎng)快、抗倒伏、耐干旱、抗病力強(qiáng)等特點(diǎn)，且莖葉柔軟口感好，營(yíng)養(yǎng)豐富，以優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)而著稱，被譽(yù)為“草中之王”，是各種草食性牲畜和魚類的優(yōu)質(zhì)飼料［3］，適宜在我國(guó)熱帶及亞熱帶種植。目前，熱研4號(hào)王草已在我國(guó)海南、廣東、廣西、江西、福建、四川、湖南、云南、貴州等省區(qū)大面積推廣種植［4］。隨著王草種植面積不斷擴(kuò)大，潛在病害日趨嚴(yán)重，影響了王草的產(chǎn)量和品質(zhì)。前期研究在廣西橫縣發(fā)現(xiàn)王草大面積發(fā)生葉斑病，從葉斑病病葉上分離獲得1 株真菌GX8-2，對(duì)其完成致病性測(cè)定，依據(jù)病原形態(tài)學(xué)特征結(jié)合rDNA-ITS序列分析，將其鑒定為草莖點(diǎn)霉（Phoma herbarum）［5］。為明確該病原菌的最佳室內(nèi)抑菌藥劑，開展室內(nèi)藥劑平板篩選，為進(jìn)一步田間防效試驗(yàn)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株和藥劑

供試菌株草莖點(diǎn)霉菌（Phoma herbarum）是從廣西橫縣熱研4號(hào)王草上采集的病樣，經(jīng)過室內(nèi)無菌條件單胞分離純化得到，菌株編號(hào)為GX8-2。供試藥劑、生產(chǎn)廠家和藥劑濃度設(shè)置見表1。

表1 供試藥劑、生產(chǎn)廠家和藥劑濃度

1.2 方法

1.2.1 菌餅制備

將保存于試管斜面的菌株接種到PDA 培養(yǎng)基平板上，28 ℃恒溫培養(yǎng)5 d，用直徑5 mm 的打孔器在菌落邊緣打取菌餅備用。

1.2.2 殺菌劑濃度初篩

將供試殺菌劑用無菌水（原藥用DMF 溶解后加0.1%吐溫80 稀釋）配制成濃度為10 000 mg/L的母液，再將母液稀釋成濃度為10、100、1 000 mg/L的藥液，分別取1 mL 稀釋后的藥液加入99 mL 的PDA培養(yǎng)基中制成終濃度分別為0.1、1、100 mg/L的含藥平板。以不加藥劑的PDA 平板為對(duì)照。將打取的菌餅轉(zhuǎn)接至含藥平板中央，每處理3個(gè)重復(fù)，于28 ℃恒溫培養(yǎng)5 d，觀察供試菌株生長(zhǎng)情況，測(cè)量菌落大小，確定殺菌劑有效濃度范圍。

1.2.3 室內(nèi)毒力測(cè)定

通過殺菌劑濃度初篩實(shí)驗(yàn)確定好每種殺菌劑的有效濃度后，對(duì)不同殺菌劑設(shè)置5~6個(gè)的毒力測(cè)定濃度梯度，分別加入冷卻至50 ℃左右的PDA 培養(yǎng)基中，制成所需要藥劑濃度的含藥平板，各藥劑使用濃度如表1所示。在預(yù)培養(yǎng)的菌株菌落邊緣打取直徑5 mm 大小的菌餅，接種不同濃度的含藥PDA 平板上，以不含藥劑的PDA 平板接種菌餅作為對(duì)照，每處理重復(fù)6 次。接種后置于28 ℃恒溫培養(yǎng)，5 d后采用十字交叉法對(duì)菌落直徑進(jìn)行測(cè)定，并按公式求出各藥劑在不同濃度下對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制百分率（y），然后將藥劑濃度轉(zhuǎn)化成對(duì)數(shù)（x），通過x與y的線性關(guān)系求出毒力回歸曲線方程y＝ax+b，并通過方程計(jì)算出藥劑的有效抑制中濃度值EC50。

2 結(jié)果與分析

由表2可知，菌株對(duì)多種殺菌劑均有較強(qiáng)的敏感性，且不同殺菌劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制效果存在明顯差異，其中苯醚甲環(huán)唑的EC50值最小，僅為0.317 6 mg/L；其次為咪鮮胺、多菌靈、腈菌唑、嘧菌酯和戊唑醇對(duì)菌絲生長(zhǎng)具有較強(qiáng)的抑制作用，其EC50值分別為：2.936 6、3.150 5、4.897 6、5.118 6和5.468 mg/L，均低于10 mg/L；效果較差的為甲基硫菌靈、代森錳鋅、百菌清和異菌脲，其EC50值分別為：33.770 7、48.767 7、160.340 4、258.293 1 mg/L。

表2 殺菌劑對(duì)王草草莖點(diǎn)霉的室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果

3 討論

藥劑防治是植物病害防治的重要途徑，選擇藥劑時(shí)，首先需考慮藥劑對(duì)病原菌殺滅能力，通過測(cè)定殺菌劑的室內(nèi)毒力，可清楚了解殺菌劑對(duì)草莖點(diǎn)霉的毒性。本研究利用分離自王草上的草莖點(diǎn)霉，采用菌絲生長(zhǎng)速率法對(duì)11 種常見殺菌劑進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，毒力最強(qiáng)的是苯醚甲環(huán)唑，EC50值最小，抑菌效果最好；其次是咪鮮胺、多菌靈、腈菌唑、嘧菌酯和戊唑醇，抑菌效果較好；而抑菌效果較差的為甲基硫菌靈、代森錳鋅、百菌清和異菌脲。因此，建議優(yōu)先考慮苯醚甲環(huán)唑、咪鮮胺、多菌靈、腈菌唑、嘧菌酯和戊唑醇等作為防治王草草莖點(diǎn)霉的主要?dú)⒕鷦?，且為了避免長(zhǎng)期使用單一化學(xué)藥劑造成病原菌產(chǎn)生抗性問題，建議在生產(chǎn)上輪換施用這幾種殺菌劑。

草莖點(diǎn)霉能引起地黃［6］、鴨跖草［7］、豌豆［8］、針葉樹［9］、Tedera［10］、白睡蓮［11］、甘草［12］、油棕［13-14］、刺葵［15］、山茶［16］等多種植物發(fā)生病害，是一種分布廣泛的植物病原真菌。而不同藥劑對(duì)王草莖點(diǎn)霉菌菌絲抑制效果存在差異的可能原因在于靶標(biāo)生物作用機(jī)理不一樣，本研究只對(duì)菌絲的毒力效果進(jìn)行評(píng)估，缺乏藥劑對(duì)病原菌孢子萌發(fā)的毒力研究，且只涉及室內(nèi)毒力測(cè)定，尚未涉及田間應(yīng)用效果，因此，篩選出的藥劑有待進(jìn)一步進(jìn)行田間防效評(píng)價(jià)。