茶葉中啶蟲脒殘留分析方法的開發(fā)

張 艷 安寶東 閻鉬琳 丁明海

（1.山東省科建檢測服務有限公司，山東 日照 276800；2.山東省日照高新區(qū)河山鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)綜合服務中心，山東 日照 276800）

1.引言

啶蟲脒，氯化煙堿類化合物，英文通用名為Acetamiprid，其化學名稱為N-(N-氰基-乙亞胺基)-N-甲基-2-氯吡啶-5-甲胺，化學式為C10H11ClN4。啶蟲脒是一種新型廣譜的具有殺螨活性的殺蟲劑，其作用方式為觸殺和胃毒，同時具有較強的滲透作用。啶蟲脒廣泛用于水稻、蔬菜、果樹、茶葉的蚜蟲、飛虱、薊馬、部分鱗翅目害蟲等的防治。目前我國檢測茶葉中啶蟲脒的方法主要是采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，使用固相萃取柱進行凈化，但此種凈化步驟較為復雜，適合于多種組分的化合物分析。因此本研究通過建立茶葉中啶蟲脒的快速測定法，簡化凈化步驟，提高分析效率，回收率和精密度高，適用于茶葉中啶蟲脒的殘留檢測。

2.材料與設備

Agilent 1290-Ultivo超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀；KQ-500B超聲波清洗器；SL-2000A多功能粉碎機；XW-80A微型旋渦混合儀；Scout電子天平（百分之一）；移液槍及各種玻璃儀器。

乙腈，默克股份兩合公司，HPLC級；水，上海麥克林生化科技有限公司，HPLC級；甲酸，上海麥克林生化科技有限公司，HPLC級；氯化鈉，國藥集團化學試劑有限公司，分析純；Florisil選擇性吸附劑（60～100目），上海阿拉丁生化科技股份有限公司；石墨化碳黑，上海麥克林生化科技有限公司；啶蟲脒標準品（1000±20μg/mL），北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司。

3.試驗方法

3.1 前處理步驟

提取和凈化：取待測樣品（基質(zhì)），放入多功能粉碎機中制成粉末，稱取勻漿試樣5.00 g±0.10 g（基質(zhì)量記作M）于具塞試管中，添加標準物質(zhì)混勻靜置30 min后（樣品空白不需要添加標準物質(zhì)），加入50.0 mL乙腈提取劑（提取劑加入體積記作V），超聲提取15 min，然后加入2.00g氯化鈉，渦旋混合30s，靜置后吸取5.0mL上清液，加入0.20gFlorisil選擇性吸附劑和0.10g石墨化碳黑，渦旋混合30s，靜置后取1.0mL上清液，根據(jù)實際情況稀釋（提取液稀釋倍數(shù)記作f），取適量稀釋液過0.22 μm有機微膜，測試。

3.2 儀器測定

儀器：Agilent 1290-Ultivo超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀；

色譜柱：Eclipse Plus C18, 1.8 μm, 2.1×50 mm；

柱溫：40.0。C；進樣量：3.00μl；流動相A：0.1%甲酸緩沖液；流動相B：乙腈；

離子源：AJS-ESI；掃描方式：MRM模式；氣體溫度：300。C；氣體流速：7.0 L/min；

鞘氣溫度：250。C；鞘氣流速：11.0 L/min；MS2 Heater：65。C；MS1 Heater：65。C；

噴霧：15.0 psi；

梯度洗脫條件見表1

表1 流動相梯度洗脫（見下表）

1.00 90.00 10.00 3.00 50.00 50.00 3.30 0.00 100.00 3.50 90.00 10.00 5.00 90.00 10.00

MRM質(zhì)譜條件見表2

表2 MRM監(jiān)測條件參數(shù)

3.3 結果計算

使 用Agilent MassHunter Workstation Data Acquisition軟件采集并用Agilent MassHunter Quantitative Analysis（for QQQ）處理圖譜數(shù)據(jù)。

使用Microsoft Office Excel軟件對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計處理，計算樣品殘留量及平均值。

樣品實際殘留量按式（1）進行計算：

式中：Ci為樣品實際含量，mg/kg；

Ci*為經(jīng)標準曲線定量得到的濃度，mg/L；

V為提取劑加入體積，mL；

f為提取液稀釋倍數(shù)；

M為基質(zhì)量，g；

回收率按式（2）進行計算：

式中：W為回收率，%；

Ci為樣品實際含量，mg/kg；

C0為理論添加濃度，mg/kg。

相對標準偏差按照式（3）進行計算：

式中：RSD為相對標準偏差，%；

C平均為樣品實際含量的平均值，mg/kg；

Ci為樣品實際含量，mg/kg；

n為平行樣品個數(shù)。

式中：ME為基質(zhì)效應，%；

bA為以純?nèi)軇槎ㄈ萁橘|(zhì)配制的標準曲線斜率；

bB為以空白基質(zhì)溶液為定容介質(zhì)配制的標準曲線斜率；

4.檢測方法確證

4.1 標準曲線和線性

分別以乙腈和空白基質(zhì)溶液為定容介質(zhì)配制一系列質(zhì)量濃度為0.005 mg/L、0.010 mg/L、0.020 mg/L、0.050 mg/L、0.100 mg/L的標準溶液，在3.2確定的方法條件下對標準溶液進行測定，每個濃度采集3個平行，以5個濃度的標準溶液繪制1條標準曲線。

4.2 基質(zhì)效應考察

分別以乙腈和空白基質(zhì)溶液為定容介質(zhì)配制一系列質(zhì)量濃度為0.005 mg/L、0.010 mg/L、0.020 mg/L、0.050 mg/L、0.100 mg/L的標準溶液，分析時以乙腈、空白基質(zhì)溶液的順序進行檢測，以考察基質(zhì)的影響?；|(zhì)效應(Matrix Effect)評價標準：對純?nèi)軇┡c空白基質(zhì)溶液配制標準曲線的斜率進行比較，若基質(zhì)效應ME %的絕對值≥20%，說明基質(zhì)效應明顯。若基質(zhì)效應ME %絕對值＜20%，說明基質(zhì)效應不明顯。

4.3 準確度和精密度試驗

設計1個溶劑空白對照組、1個樣品空白對照組和4個添加水平（0.05 mg/kg、0.20 mg/kg、0.50 mg/kg、10 mg/kg（MRL值））,每個添加水平5個重復。對空白對照組與4個添加水平組共21個前處理后得到的樣品各采集1針（溶劑空白對照不進行前處理）。

4.4 定量限

以最小添加濃度作為方法的定量限，啶蟲脒在茶葉中的定量限為0.05 mg/kg。

4.5 專屬性

所測空白樣品在被試物出峰區(qū)間的信號應小于LOQ添加水平響應的30%。

5.結果與討論

5.1 標準曲線和線性

在本試驗條件下進行測定，以標準溶液的濃度對響應值（峰面積）進行線性回歸，以乙腈為定容介質(zhì)配制的標準曲線：y=472517.4025314*x+968.657281，R2 = 0.999；以空白茶葉基質(zhì)溶液為定容介質(zhì)配制的標準曲線：y=546684.351593*x+367.997302，R2=0.999

5.2 基質(zhì)效應

標準曲線由5個校準點組成（不包括原點），濃度范圍為0.005 mg/L、0.010 mg/L、0.020 mg/L、0.050 mg/L、0.100 mg/L。按照乙腈標準溶液、空白基質(zhì)溶液的順序進行檢測，以標準溶液的濃度對響應值（峰面積）進行線性回歸。

結果表明啶蟲脒在茶葉中檢測基質(zhì)效應不明顯，基質(zhì)效應ME的絕對值為15.7%。

5.3 準確度與精密度

空白茶葉基質(zhì)中四個添加水平0.05 mg/kg、0.20 mg/kg、0.50 mg/kg、10 mg/kg的平均回收率為88%、102%、94%、106%，相對標準偏差為1.9%、4.4%、0.95%、5.2%。結果詳見表3。

表3 準確度與精密度試驗數(shù)據(jù)表

5.4 定量限

以最小添加濃度作為方法的定量限，啶蟲脒在茶葉中的定量限為0.05 mg/kg。

5.5 專屬性

所測乙腈、空白基質(zhì)樣品在啶蟲脒出峰區(qū)間的信號均小于LOQ水平響應的30%。

5.6 檢測方法有效性評價

本驗證試驗建立了茶葉啶蟲脒殘留分析方法，茶葉樣品用乙腈提取，F(xiàn)lorisil選擇性吸附劑和石墨化碳黑吸附劑凈化，采用Agilent 1290-Ultivo超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定，采用保留時間（3.008 min）及定性離子對（223.0/90.0）定性，采用標準曲線-外標法定量（定量離子對223.0/125.9）。試驗結果滿足《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗準則》（NY/T 788-2018）對殘留檢測方法的要求，適合番茄中異菌脲殘留的檢測。