東莞地區(qū)B群鏈球菌的血清型與多位點序列型的分析

王佳敏

（肇慶醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校 廣東 肇慶 526000）

B群鏈球菌（group b streptococci, GBS），寄生于人下消化道及泌尿生殖道，新生兒GBS感染與母親生殖道GBS定植關(guān)系密切[1]，可引起新生兒肺炎、腦膜炎、敗血癥，甚至死亡[2]。按照GBS莢膜多糖抗原成分特異性不同，可分為Ⅰa、Ⅰb、Ⅱ～Ⅸ等10種血清型[3]。本研究對臨床分離的GBS進(jìn)行血清學(xué)分型和多位點序列分型（multilocus sequence typing, MLST），研究東莞地區(qū)GBS的流行病學(xué)資料，為實施GBS產(chǎn)前篩查和抗生素預(yù)防提供依據(jù)。

1.資料與方法

1.1 一般資料

收集2019年1月—2020年1月東莞東華醫(yī)院門診及病房孕產(chǎn)婦細(xì)菌培養(yǎng)分離的GBS共91株。分離菌株參照文獻(xiàn)[4]進(jìn)行標(biāo)本的采集、接種和培養(yǎng)，并用VITEK-2全自動微生物分析系統(tǒng)鑒定為GBS。

1.2 血清學(xué)分型

使用GBS莢膜抗體進(jìn)行血清學(xué)分型，操作步驟及判讀方法參考文獻(xiàn)[5]。若菌株與10種分型血清均不發(fā)生凝集，定義為不可分型（non-typeable, NT）。

1.3 MLST分型及溯源分析

使用試劑盒提取DNA，參照J(rèn)ones等[6]建立的MLST分型方案，將7個管家基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物委托廣州生物工程公司進(jìn)行測序，將測序結(jié)果提交到MLST分型數(shù)據(jù)庫確定序列型（sequence type, ST）。用eBURSTv 3.0程序確定克隆群（clonal complexes,CCs）。若7個管家基因中至少有6個是相同的，就認(rèn)為是同一個CCs[7]。

2.結(jié)果

2.1 GBS的血清型

91株GBS分離得到6種血清型，分別為Ⅰa型16株、Ⅰb型12株、Ⅲ型49株、Ⅴ型8株，血清型Ⅵ和Ⅶ各1株，另外有4株GBS為不可分型（NT），見表1。

2.2 MLST分型及溯源分析

經(jīng)MLST分型和eBURSTv 3.0程序分析91株GBS的分子型，共得到5個克隆群和5個單獨序列型（singletons,S），見表1。

表1 91株GBS菌株的序列型與血清型的關(guān)系

2.3 多位點序列型與血清型關(guān)系

本研究有6種血清型，5種克隆群。66.7%的CC19克隆群菌株和54.5%的CC17克隆群菌株為學(xué)清型Ⅲ型，55.6%的CC12克隆群菌株為Ib型；CC19，CC17與血清Ⅲ型比較，CC12和血清Ib型比較，有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。見表1。

3.討論

本研究測出6個血清型，其中Ⅲ、Ⅰa、Ⅰb、Ⅴ是主要血清型，與北京地區(qū)[8]結(jié)果相似；在深圳，主要的血清型為Ⅲ、Ⅰa、Ⅰb和Ⅴ型[9]；Lu等[10]研究中，中國流行的血清型主要為Ⅲ、Ⅰa、Ⅰb和Ⅴ，提示國內(nèi)不同地區(qū)GBS流行的血清型基本一致。另外本研究中VI型、VⅢ型各1株和4株不可分型，可能是國內(nèi)感染流行的新血清型，有待研究。意大利GBS流行血清型為Ⅰa、Ⅲ、Ⅱ、Ⅶ、Ⅴ[11]；提示不同國家、地區(qū)GBS流行血清型分布有所區(qū)別，但類型基本相似，制備疫苗時應(yīng)包括Ia、Ib、Ⅲ、Ⅴ型，為進(jìn)一步開展GBS研究奠定基礎(chǔ)。

有研究表明，新生兒GBS感染主要由Ⅰa和Ⅲ血清型引起[12]。嬰幼兒早發(fā)感染主要為Ⅲ、Ⅰa、Ⅱ和Ⅴ型，遲發(fā)感染主要為Ⅲ、Ⅰa、Ⅰb、Ⅴ和Ⅵ型[12]。與本研究中Ⅰa、Ⅰb、Ⅲ和Ⅴ型基本一致，提示東莞地區(qū)新生兒GBS疾病的發(fā)生率高，需要嚴(yán)格產(chǎn)前檢查和抗生素預(yù)防。

本研究中，孕婦攜帶的GBS主要序列型為ST19、ST23和ST17，與北京地區(qū)[9]相似；歐洲、亞洲、北美均檢測到ST19、ST23和ST17[13]，不同國家、地區(qū)收集的GBS序列型相似，表明GBS全球播散。本研究中主要克隆群是CC19、CC17，其中CC19、CC17與Ⅲ型的菌株之間，CC12和Ib型之間以及CC23和Ia型之間有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），與Charlotte等[14]的報道相似，提示克隆群和血清型間密切相關(guān)，可能與不同克隆群基因水平轉(zhuǎn)移的能力不同有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，CC17血清Ⅲ型的GBS常引起新生兒腦膜炎[15]；CC12血清型Ⅰb型的GBS則與新生兒呼吸衰竭有關(guān)[16]，表明不同的GBS疾病是由特定的克隆群引起，可能與其黏附力、侵襲力強(qiáng)有關(guān)。

綜上所述，GBS的血清型和多位點序列型是不斷變化的，及時監(jiān)測我國各地區(qū)GBS的血清型和分子型變遷，對防治GBS感染和指導(dǎo)臨床治療具有重要意義。