固相萃取高效液相色譜法檢測芝麻油中的苯并[a]芘

周宏霞，王 妙，臧汝瑛，王秀麗，周 青

（威海市食品藥品檢驗(yàn)檢測研究院，山東威海264200）

芝麻油是我國傳統(tǒng)特色的食用油品種之一，高溫炒籽過程得到香油獨(dú)特的色香味，同時(shí)也很容易導(dǎo)致強(qiáng)致癌物苯并芘含量超標(biāo)[1]。苯并芘（Benzopyrene）是一種含苯環(huán)的稠環(huán)芳烴。按苯環(huán)的稠合位置不同，苯并芘分為2種，苯并[a]芘（1,2-苯并芘）和苯并[e]芘（4,5-苯并芘），常見的是苯并[a]芘。常溫下狀態(tài)為黃色粉末，熔點(diǎn)為179℃，難溶于水，微溶于甲醇、乙醇，易溶于苯、甲苯、二甲苯、丙酮等有機(jī)溶劑，是一種常見的高活性間接致癌物和突變原，是世界上公認(rèn)的三大強(qiáng)致癌物之一[2-3]。GB 2762—2017《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中污染物限量》規(guī)定了植物油中苯并[a]芘的限量為10 μg/kg[4]。目前，食品中苯并芘檢測的前處理方法有中性氧化鋁柱法、分子印跡法和凝膠色譜法等[5]。芝麻香油生產(chǎn)過中的炒籽溫度通常要達(dá)到160℃以上，甚至局部溫度能到達(dá)200℃[6]，高溫炒制條件為芝麻油中苯并芘含量的升高埋下了隱患[7]。對國內(nèi)外食用油中苯并芘含量進(jìn)行的調(diào)查研究表明，芝麻香油中苯并芘含量較其他油脂要高[8]。高溫炒籽給芝麻香油品質(zhì)帶來的另一個(gè)問題是色澤過深[9]。因此，對芝麻油中的苯并芘進(jìn)行檢測顯得尤為重要。但是，由于芝麻香油中的顏色比較深，含有的干擾雜質(zhì)比一般食用油要多，采用一般植物油的前處理方法，效果不太理想。王廣會(huì)等人[10]采用氧化鋁層析柱對芝麻油進(jìn)行凈化，該方法需用有機(jī)試劑多、操作比較復(fù)雜。試驗(yàn)采用硅膠柱串聯(lián)分子印跡柱的方法對芝麻油進(jìn)行前處理凈化，經(jīng)過高效液相色譜熒光檢測器檢測。該方法具有能去除雜質(zhì)干擾、有機(jī)試劑用量少、穩(wěn)定性好、回收率高等特點(diǎn)。目前，未見有硅膠柱串聯(lián)分子印跡柱應(yīng)用于芝麻油中苯并芘的檢測。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 原料與試劑

芝麻油，市售；正己烷、二氯甲烷、乙腈（色譜純，Thermo），苯并[a]芘標(biāo)準(zhǔn)品（100 mg/L），上海安譜公司提供；試驗(yàn)用水為經(jīng)超純水儀處理的一級(jí)水。

1.1.2 儀器與設(shè)備

Agilent1260型高效液相色譜儀（配熒光檢測器），美國安捷倫公司產(chǎn)品；Cleanert BAP-3（混合分子印跡材料，500 mg/6 mL）；Cleanert Silica柱（500 mg/6 mL）；固相萃取裝置，美國萊伯泰科公司；超純水儀，美國密理博公司產(chǎn)品。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 液相色譜條件

色譜柱為Venusil XBP C18柱（150 mm×4.6 mm×5 μm）；流動(dòng)相為乙腈-水（體積比88∶12），流速1 mL/min；進(jìn)樣量20 μL，柱溫35℃，熒光檢測器，激發(fā)波長384 nm；發(fā)射波長406 nm。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)貯備液及標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確移取1 mL的苯并[a]芘標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度得到10 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用乙腈逐級(jí)稀釋，得到0.2，0.5，1.0，5.0，10.0，20.0 μg/L標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.2.3 樣品前處理

稱取0.5 g芝麻油樣品于玻璃管中，加5 mL正己烷渦旋振蕩溶解，作為凈化液。將Cleanert Silica柱與Cleanert BAP-3串聯(lián)，先用5 mL二氯甲烷，再用5 mL正己烷活化柱子。柱子活化后，加入凈化液過柱，用3 mL正己烷潤洗樣品瓶，上樣到凈化柱上。待樣液流出，先用6 mL正己烷淋洗串聯(lián)柱，后棄去硅膠柱，再用6 mL正己烷淋洗Cleanert BAP-3柱，棄去流出液。用8 mL二氯甲烷洗脫并收集凈化液到試管中。凈化液在40℃下氮?dú)獯蹈?，? mL乙腈溶解定容，渦旋，過0.22 μm有機(jī)濾膜，待上機(jī)。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取液的選擇

苯并[a]芘脂溶性好，溶解在芝麻油中。參照GB 5009.27—2016[11]的方法選擇正己烷作為提取的溶劑。正己烷對于油脂具有很好的溶解性，目標(biāo)物苯并[a]芘也能溶解在里面，有利于后期的純化。

2.2 提取柱的選擇

芝麻油比一般的油脂顏色深、干擾雜質(zhì)多。因此，單用分子印跡柱處理后，樣品的基線比較高，檢測結(jié)果受到干擾。采用硅膠柱和分子印跡柱串聯(lián)處理后，硅膠柱能去除芝麻油中的色素等雜質(zhì)，待測樣品的基線降低，雜質(zhì)干擾消除。

2.3 色譜圖

在1.2.1色譜條件下得到標(biāo)準(zhǔn)溶液的圖譜。苯并[a]芘標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖見圖1。

2.4 校準(zhǔn)曲線和檢出限

校準(zhǔn)曲線見圖2。

圖2 校準(zhǔn)曲線

在1.2.1的儀器條件下，按照1.2.2配制的標(biāo)準(zhǔn)序列上機(jī)檢測。以峰面積為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制回歸曲線，得線性回歸方程Y=4.177 975 2X+0.080 873，相關(guān)系數(shù)（R）為0.999 9，表明苯并芘在0.2~20.0 μg/L質(zhì)量濃度內(nèi)與色譜峰面積線性關(guān)系良好。以信噪比（S/N）的3倍計(jì)算檢出限，在取樣為0.5 g時(shí)，苯并芘的檢出限為0.4 μg/kg。

2.5 精密度和加標(biāo)回收試驗(yàn)

取空白的芝麻油樣品進(jìn)行加標(biāo)試驗(yàn)，加標(biāo)質(zhì)量濃度為0.4，5.0，10 μg/kg 3個(gè)水平，按照1.2.3樣品前處理方法對加標(biāo)樣品進(jìn)行前處理，按照1.2.1色譜條件進(jìn)行測定，每個(gè)加標(biāo)質(zhì)量濃度水平平行測定6次。

加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

建立了硅膠柱串聯(lián)分子印跡柱凈化芝麻油，凈化效果好、操作簡單、回收率高。結(jié)果表明，苯并[a]芘在0.2~20.0 μg/L質(zhì)量濃度內(nèi)線性關(guān)系好。相關(guān)

系數(shù)R2=0.999 9；在0.4~10.0 μg/kg加標(biāo)水平時(shí)，回收率為91.3%~98.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.37%~3.96%（n=6），方法的檢出限為0.4 μg/kg。該方法適用于芝麻油中苯并[a]芘的檢測。