一線化療聯(lián)合分子靶向治療乳腺癌患者的效果及對束蛋白結(jié)合蛋白1、17 β-羥基類固醇脫氫酶表達(dá)水平的影響

陳曉亮，王紅旗，楊留勤

1新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第四臨床學(xué)院放射治療科，河南 新鄉(xiāng) 453000

2平煤神馬醫(yī)療集團(tuán)總醫(yī)院放射治療科，河南 平頂山 467000

乳腺癌是一種常見于女性人群的惡性腫瘤，在中國隨著人們生活習(xí)慣的改變，乳腺癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢。乳腺癌的病死率在女性惡性腫瘤中極高，給女性患者的生存質(zhì)量造成嚴(yán)重的影響。隨著醫(yī)療技術(shù)水平不斷的進(jìn)步，乳腺癌的治療方法也在不斷的改善，目前主要的治療方法多為手術(shù)治療，但會(huì)嚴(yán)重降低患者的生活質(zhì)量，且手術(shù)會(huì)使患者乳房缺失，導(dǎo)致患者不良情緒的發(fā)生。目前治療乳腺癌的主要方法為分子靶向治療，可以有效延長腫瘤患者的生存期，有效降低復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，治療效果顯著。但分子靶向治療不良反應(yīng)明顯，尤其在內(nèi)分泌系統(tǒng)方面，常見的不良反應(yīng)如胰島素抵抗、糖代謝紊亂。束蛋白結(jié)合蛋白1（fascin actin-bundling protein 1，F(xiàn)SCN1）基因與細(xì)胞遷移和腫瘤細(xì)胞侵襲的流動(dòng)性和轉(zhuǎn)移有著重要的聯(lián)系，目前，F(xiàn)SCN1基因已被認(rèn)為在腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移過程中有著執(zhí)行者的重要作用。相關(guān)研究表明，17β-羥基類固醇脫氫酶（17β-hydroxysteroid dehydrogenase，17β-HSD）表達(dá)水平對維持細(xì)胞生長有著關(guān)鍵作用，可以促進(jìn)乳腺癌組織中的雌激素受體陽性細(xì)胞的生長。本研究旨在探究一線化療聯(lián)合分子靶向治療乳腺癌患者的效果及對FSCN1、17β-HSD表達(dá)水平的影響，以期為臨床研究提供參考依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年4月至2021年2月于新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第四臨床學(xué)院就診的乳腺癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)病理組織學(xué)檢查，符合中國抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌專業(yè)委員會(huì)對乳腺癌相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；溝通無障礙；無嚴(yán)重的重要器官疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤；伴有認(rèn)知功能及精神障礙；心臟功能不全；對本研究干預(yù)發(fā)生抵抗。根據(jù)納入與排除標(biāo)準(zhǔn)，共納入152例患者，根據(jù)治療方法的不同分為一線化療組與聯(lián)合干預(yù)組，每組76例，一線化療組采用一線化療方法，聯(lián)合干預(yù)組在一線化療組基礎(chǔ)上聯(lián)合分子靶向治療。一線化療組患者中，年齡30～65歲，平均（46.5±5.2）歲；臨床分期：Ⅰ期36例，Ⅱ期40例；病程：2年以下36例，2年及以上40例。聯(lián)合干預(yù)組患者中，年齡32～64歲，平均（47.5±5.4）歲；臨床分期：Ⅰ期37例，Ⅱ期39例，病程：2年以下35例，2年及以上41例。兩組患者年齡、臨床分期、病程比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 治療方法

一線化療組使用常規(guī)藥物進(jìn)行治療，常規(guī)藥物包括環(huán)磷酰胺、氟尿嘧啶及表柔比星，靜脈輸注環(huán)磷酰胺，用量為50 mg/m，第1、8天；靜脈輸注表柔比星，用量為50 mg/m，第1天；靜脈輸注5-氟尿嘧啶，用量為500 mg/m，第1～3天，采用常規(guī)化療方法，3周為1個(gè)周期。聯(lián)合干預(yù)組在一線化療組基礎(chǔ)上聯(lián)合分子靶向治療，針對靶點(diǎn)人類表皮生長因子受體（human epidermal growth factor receptor，HER），靜脈滴注曲妥珠單抗，用量8 mg/kg，3周后降低用量為6 mg/kg，以3周為1個(gè)周期。兩組患者均連續(xù)治療4個(gè)周期。

1.3 觀察指標(biāo)及檢測方法

1.3.1 應(yīng)激反應(yīng) 記錄兩組患者一氧化氮（nitric oxide，NO）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）及血清皮質(zhì)醇（cortisol，Cor）水平變化。治療前后抽取肘靜脈血，常規(guī)抗凝、離心，分離血清后擱置于-80℃的環(huán)境下保存待檢，使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）測定NO水平，羥胺法檢測SOD水平，放射免疫法檢測Cor，試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作，由經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)師操作并進(jìn)行比較。

1.3.2 血管新生指標(biāo) 使用ELISA檢測血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）A、B水平，試劑盒購自深圳晶美生物工程有限公司，操作均按照說明書嚴(yán)格進(jìn)行，由經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)師操作并進(jìn)行比較。。

1.3.3 生活質(zhì)量評(píng)分 使用生活質(zhì)量量表評(píng)估患者的生活質(zhì)量情況，從生理領(lǐng)域、心理領(lǐng)域、環(huán)境領(lǐng)域及獨(dú)立性領(lǐng)域進(jìn)行評(píng)估，總分共105分，分?jǐn)?shù)越高則生活質(zhì)量越高。

1.3.4 FSCN 1、17 β-HSDFSCN1：將標(biāo)本以磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）沖洗后，進(jìn)行微波抗原修復(fù)，室溫冷卻，且使用過氧化氫阻斷，加入FSCN1單克隆抗體4℃過夜，抗體濃度為1∶500，采用EnVision法并加入辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）二抗，二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，使用蘇木素復(fù)染，封片。以FSCN1在組織標(biāo)本血管內(nèi)皮表達(dá)為陽性對照，PBS取代一抗作為陰性對照。17β-HSD：將標(biāo)本以PBS沖洗后，加入7型17β-HSD抗體，抗體濃度為1∶500，并放置在溫度為4℃環(huán)境下過夜，之后加入EnVision HRP二抗，濃度為1∶200，室溫下孵育4 h，使用DAB過氧化氫溶液浸泡5 min顯色，蘇木精復(fù)染30 s，自來水沖洗5 min，酸性乙醇溶液沖洗，乙醇及甲苯浸泡，封片。本研究所使用試劑均購自上海聯(lián)邁生物工程公司。參照文獻(xiàn)[10-11]對顯微鏡下的細(xì)胞質(zhì)染色情況進(jìn)行陰陽性結(jié)果判斷。

1.3.5 不良反應(yīng) 不良反應(yīng)包括脫發(fā)、肝腎損傷、惡心嘔吐及其他，由經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)師進(jìn)行記錄、比較。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 應(yīng)激反應(yīng)的比較

治療前，兩組患者NO、SOD及Cor水平比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療后，兩組患者NO、Cor水平均明顯低于治療前，SOD水平均明顯高于治療前，且聯(lián)合干預(yù)組患者NO、Cor水平明顯低于一線化療組患者，SOD水平明顯高于一線化療組患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

表1 治療前后兩組患者NO、SOD及Cor水平的比較

2.2 血管新生指標(biāo)的比較

治療前，兩組患者VEGFA、VEGFB水平比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；治療后，兩組患者VEGFA、VEGFB水平均明顯低于本組治療前，且聯(lián)合干預(yù)組VEGFA、VEGFB水平均明顯低于一線化療組患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（表2）

表2 治療前后兩組患者VEGFA、VEGFB水平的比較

2.3 生活質(zhì)量評(píng)分的比較

治療前，兩組患者生活質(zhì)量各維度評(píng)分比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療后，兩組患者生活質(zhì)量各維度評(píng)分均明顯高于本組干預(yù)前，且聯(lián)合干預(yù)組患者生活質(zhì)量各維度評(píng)分均明顯高于一線化療組患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表3）

表3 治療前后兩組患者生活質(zhì)量評(píng)分的比較

2.4 FSCN 1、17 β-HSD陽性情況的比較

治療前，兩組患者FSCN1、17β-HSD陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療后，兩組患者FSCN1、17β-HSD陽性率均低于本組治療前，且聯(lián)合干預(yù)組患者FSCN1、17β-HSD陽性率均低于一線化療組患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表4）

表4 兩組患者FSCN 1、17 β-HSD陽性表達(dá)情況的比較

2.5 不良反應(yīng)發(fā)生情況的比較

聯(lián)合干預(yù)組患者不良反應(yīng)總發(fā)生率為7.89%（6/76），明顯低于一線化療組的28.95%（22/76），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ=11.207，P＜0.01）。（表5）

表5 兩組患者不良反應(yīng)發(fā)生情況[n（%）]

3 討論

乳腺癌是危害女性身心健康的惡性腫瘤，居世界排名第一位。隨著中國工業(yè)化的飛速發(fā)展及人口城市化的不斷推進(jìn)，乳腺癌發(fā)病率有著明顯的上升趨勢。目前，化療是治療乳腺癌患者的重要方法之一。近年來，在乳腺癌患者治療中應(yīng)用化療，其病死率明顯下降，但化療過程中出現(xiàn)的不良反應(yīng)較多。近年來，隨著對乳腺癌分子機(jī)制深入的研究，發(fā)現(xiàn)其發(fā)展與體內(nèi)信號(hào)通路的異常及癌基因的表達(dá)產(chǎn)物有密切的關(guān)系，目前，隨著一系列有針對性的分子靶向治療不斷出現(xiàn)，乳腺癌患者的治療效果有了明顯的提高，這已經(jīng)成為中國醫(yī)學(xué)人員研究的重點(diǎn)。

血清NO是血管上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及部分神經(jīng)細(xì)胞所釋放的血管活性物質(zhì)，濃度較低的NO能使肺血管、支氣管平滑肌擴(kuò)張。Cor由腎上腺皮質(zhì)醇分泌，屬于甾體糖皮質(zhì)激素類，其表達(dá)受限于垂體，能夠反映腎上腺皮質(zhì)的分泌功能。血清Cor在健康人體中表達(dá)較低，但不間斷的應(yīng)激反應(yīng)能夠使Cor升高，當(dāng)Cor升高會(huì)加劇患者心理波動(dòng)。SOD為抗氧化酶系中的重要成員之一，在植物、動(dòng)物及微生物體內(nèi)廣泛存在，其表達(dá)水平能夠顯示機(jī)體的應(yīng)激情況。本研究結(jié)果顯示，治療后，兩組患者NO、Cor水平均明顯低于治療前，SOD水平均明顯高于治療前，且聯(lián)合干預(yù)組NO、Cor水平明顯低于一線化療組患者，SOD水平明顯高于一線化療組患者，說明一線化療聯(lián)合分子靶向治療乳腺癌，可以降低血管活性物質(zhì)的釋放及腎上腺皮質(zhì)激素的分泌，改善機(jī)體的應(yīng)激情況。

VEGFA為一種促進(jìn)腫瘤血管生長的重要生長因子，主要表現(xiàn)為誘導(dǎo)腫瘤血管生長。目前，研究表明VEGFA不僅在腫瘤血管新生中有重要的作用，還能夠間接調(diào)控腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲、炎癥反應(yīng)等。研究顯示，VEGFA在調(diào)控腫瘤細(xì)胞化療藥物敏感性方面有重要的作用，通過抑制VEGFA的表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞死亡從而增加化療的敏感性。VEGFB是腫瘤生長及轉(zhuǎn)移能力方面非常重要的指標(biāo)，其主要表現(xiàn)為促進(jìn)血管通透性增強(qiáng)，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)變性和血管內(nèi)皮生長及轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果顯示，治療后，兩組患者VEGFA、VEGFB水平均明顯低于本組治療前，且聯(lián)合干預(yù)組VEGFA、VEGFB水平均明顯低于一線化療組患者，說明一線化療聯(lián)合分子靶向治療乳腺癌可有效抑制腫瘤血管的新生，從而降低了腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移能力。

乳腺癌患者常伴有疼痛，且術(shù)后對患者的日常生活及自理能力均造成了嚴(yán)重的影響，如梳頭、穿衣等?；颊叱Ｒ蜃约夯加腥橄侔┒鄲?，增加了心理壓力，出現(xiàn)明顯的不良情緒，使睡眠質(zhì)量下降，導(dǎo)致患者的軀體功能、情感功能及認(rèn)知功能等均明顯下降。乳腺癌患者不能及時(shí)回歸正常生活，康復(fù)時(shí)間較長，導(dǎo)致患者喪失信心，從而遠(yuǎn)離人群，嚴(yán)重影響了其社會(huì)功能，導(dǎo)致患者的生活質(zhì)量明顯下降。本研究結(jié)果顯示，治療后，兩組患者生活質(zhì)量各維度評(píng)分均明顯高于本組干預(yù)前，且聯(lián)合干預(yù)組生活質(zhì)量各維度評(píng)分均明顯高于一線化療組，說明一線化療聯(lián)合分子靶向治療乳腺癌可有效提高患者的生活質(zhì)量，從而增強(qiáng)患者的信心。

FSCN1蛋白常分布在乳腺癌及良性病變組織中，在乳腺癌組織中呈彌漫性分布，同時(shí)在卵巢周邊部的腫瘤細(xì)胞染色較強(qiáng)。FSCN1調(diào)節(jié)多種腫瘤的相關(guān)基因，如基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）2、MMP9，且可通過其他途徑調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的侵襲性，如WNT通路及類胰島素生長因子受體Ⅰ等。17β-HSD是一種依賴性氧化還原酶，可氧化類固醇的第17位碳而得名。在煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide，NAD）P的幫助下，可氧化17-羥基類，還原17-酮，使18碳及19碳的類固醇失活。本研究結(jié)果顯示，治療后，兩組患者FSCN1、17β-HSD陽性率均低于本組治療前，且聯(lián)合干預(yù)組患者FSCN1、17β-HSD陽性率均低于一線化療組患者，說明一線化療聯(lián)合分子靶向治療乳腺癌有良好的療效，可有效抑制腫瘤的病變。

綜上所述，在乳腺癌患者中運(yùn)用一線化療聯(lián)合分子靶向治療，可以改善機(jī)體的應(yīng)激情況，有效抑制腫瘤血管的新生及腫瘤細(xì)胞的生長、轉(zhuǎn)移能力，提高患者的生活質(zhì)量，增強(qiáng)患者的信心，對乳腺癌患者有良好的治療效果。