柴胡應(yīng)用與指紋圖譜研究進(jìn)展

陳良勝　殷雙興

【摘要】文章對(duì)三峽庫區(qū)道地藥材柴胡所面臨的現(xiàn)狀進(jìn)行綜述性探討，并對(duì)柴胡的應(yīng)用及指紋圖譜進(jìn)行綜述性研究。柴胡作為常用的藥材，歷史悠久，臨床應(yīng)用廣泛。運(yùn)用系統(tǒng)的HPLC-MS等方法對(duì)道地柴胡藥材的有效成分進(jìn)行指紋圖譜研究，并進(jìn)行鑒別、檢查、含量測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】柴胡;指紋圖譜;道地藥材;研究進(jìn)展

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2021）23-0060-05

Research Progress on Application and Fingerprint of Bupleurum

CHEN Liangsheng YIN Shuangxing^*

The People's Hospital of Xin County of Henan Province，? Xinxian 465550， China

Abstract：In this paper， the problems faced by the genuine medicinal material Bupleurum in the Three Gorges Reservoir area were explained， and the index fingerprints of Bupleurum were reviewed. Bupleurum， as a commonly used medicinal material， has a long history and is widely used in clinic. The effective components of genuine Bupleurum medicinal materials were studied by HPLC-MS and other methods， and the identification， examination， content determination， heavy metal examination and pesticide residue examination were summarized， therefore， it is significant to control the quality of Bupleurum.

Key words：Bupleurum; Fingerprint Spectrum; Genuine Medicinal Materials; Research Progress

柴胡歷史悠久，為傘形科植物柴胡（Bupleurum chinense DC.）或狹葉柴胡（Bupleurum scorzonerifolium Willd.）的根。柴胡皂苷類為其主要活性成分，其中，以柴胡皂苷a、d的藥理作用最強(qiáng)。因此，本文主要對(duì)道地柴胡藥材有效成分指紋圖譜的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，并進(jìn)行鑒別、檢查、含量測(cè)定、重金屬檢查和農(nóng)藥殘留檢測(cè)，旨在為全面控制柴胡藥材的質(zhì)量提供重要依據(jù)。

1 柴胡臨床使用的現(xiàn)狀

柴胡屬藥用植物在我國分布廣泛，品種較多，在不同區(qū)域都被當(dāng)?shù)卦谂R床上當(dāng)作柴胡使用，藥用的有效性和安全性較差。本文對(duì)長(zhǎng)江上游和大別山柴胡屬藥用植物進(jìn)行實(shí)地考查和大量歷史文獻(xiàn)匯總和分析。認(rèn)定原植物為同屬植物4種民間藥用柴胡，在本地都有使用，都曾經(jīng)有被當(dāng)作藥用的歷史。我國野生柴胡屬中藥資源藏量巨大。由于我國藥典并未收錄有關(guān)區(qū)域性柴胡的內(nèi)容，缺乏相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，造成長(zhǎng)江上游和大別山區(qū)域性柴胡質(zhì)量難以得到有效控制。而民間又有大量的實(shí)際應(yīng)用，給當(dāng)?shù)乩习傩沼盟帋韲?yán)重的安全隱患。因此，采用科學(xué)的方法建立區(qū)域性柴胡的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分析長(zhǎng)江上游和大別山區(qū)四種柴胡屬植物的化學(xué)成分，測(cè)定其有效成分的含量，為當(dāng)?shù)夭窈耐茝V應(yīng)用提供理論依據(jù)，發(fā)展庫區(qū)中藥材具有現(xiàn)實(shí)的經(jīng)濟(jì)意義，也是現(xiàn)實(shí)的客觀需要。

正品柴胡為常用中草藥，野生資源正在枯竭，在推廣人工種植的同時(shí)，適時(shí)研發(fā)新的柴胡屬植物替用品，擴(kuò)大野生資源的來源，也是目前比較現(xiàn)實(shí)的選擇。隨著柴胡資源日漸緊張，市場(chǎng)價(jià)格不斷攀升，各地都在積極探索，開發(fā)當(dāng)?shù)夭窈鷮俚囊吧Y源，試圖緩解供量的緊張。長(zhǎng)江上游和大別山區(qū)是柴胡產(chǎn)量較大，是全國的主產(chǎn)區(qū)之一，品種混用極其混亂嚴(yán)重。質(zhì)量無法控制，用藥隱患大。

2 柴胡的分類

柴胡（Bupleuri）是傘形科植物中的大屬之一，全世界有200種左右。我國有柴胡屬植物40種、17變種、7變型，主要分布于西南、西北和東北地區(qū)^[1]。本屬入藥種類約20種，主要的有柴胡（Bupleuri.chinense DC.）、狹葉柴胡（Bupleuri. scorzonerifolium Willd.）、銀州柴胡（Bupleuri. yinchowense Shan et Y. Li）和黑柴胡（Bupleuri.smithii H. Wolff）等?！吨腥A人民國和國藥典》2020版規(guī)定柴胡（Bupleuri.chinense DC.）和狹葉柴胡（Bupleuri. scorzonerifolium Willd.）的干燥根為藥用柴胡，按性狀不同，分別習(xí)稱“北柴胡”和“南柴胡”。

3 柴胡的化學(xué)成分與藥理作用

柴胡的化學(xué)成分復(fù)雜，主要含皂苷和揮發(fā)油，同時(shí)也含黃酮、脂肪酸、多元醇、植物甾醇、木脂素、香豆素、多糖、微量元素等類型成分^[2-3]。柴胡性味辛、苦，微寒，歸肝、膽、肺經(jīng)，具有疏散退熱，疏肝解郁，升舉陽氣的功效，用于感冒發(fā)熱，寒熱往來，胸脅脹痛，月經(jīng)不調(diào)，子宮脫垂，脫肛^[4]。藥理實(shí)驗(yàn)^[5-6]表明，柴胡具有解熱鎮(zhèn)痛、保肝、抗病毒、抗抑郁、抗癌、抗?jié)兊榷喾N活性。

4 柴胡的指紋圖譜研究和安全性檢查領(lǐng)域綜述

近年來，很多學(xué)者對(duì)柴胡藥用成分和臨床應(yīng)用研究較多，在本草考證、生境分布、原藥用植物鑒定以及質(zhì)量評(píng)價(jià)等方面作出了大量的貢獻(xiàn)。在柴胡分布較多的甘肅、河北、河南、湖北等地區(qū)，對(duì)野生和家種的柴胡的指紋圖譜研究較多，主要采用HPLC、GC-MS以及薄層色譜等方法來研究柴胡中柴胡皂苷和揮發(fā)油等有效成分?，F(xiàn)將近十年來各地在柴胡品質(zhì)，主要在指紋圖譜研究和安全性檢查領(lǐng)域取得的重要進(jìn)展綜述如下。

將北柴胡柴胡皂苷建立高效薄層熒光色譜指紋圖譜（如圖1所示），與南柴胡、錐葉柴胡、多枝柴胡、三島柴胡、西藏柴胡等不同產(chǎn)地柴胡的指紋圖譜進(jìn)行比較。以60目硅膠為原料制備高效薄層板，以CH₂Cl₂∶EtOAC∶CH₃OH∶H₂O（30∶40∶15∶3）為流動(dòng)相，2%對(duì)二甲氨基苯甲醛：10%硫酸乙醇液顯色后獲得薄層熒光色譜指紋圖譜，經(jīng)軟件（ChromafingerTM）生成共有模式，發(fā)現(xiàn)北柴胡指紋圖譜由19個(gè)特征熒光條斑組成^[7]。

有關(guān)專家采用山西產(chǎn)地的柴胡和小葉黑柴胡中皂苷類成分HPLC指紋圖譜分析方法，采用RP-HPLC測(cè)定10個(gè)不同來源柴胡樣品。建立了HPLC指紋圖譜共有模式，并對(duì)其進(jìn)行了相似度比較，為控制柴胡藥材的質(zhì)量提供了理論依據(jù)^[8-11]。

肖蓉等^[12]分別建立了野生北柴胡、栽培北柴胡、狹葉柴胡、錐葉柴胡及線葉柴胡的HPLC指紋圖譜（如圖2所示），采用氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)北柴胡揮發(fā)油的有效成分進(jìn)行了測(cè)定和分析。發(fā)現(xiàn)培育出來的北柴胡與野生北柴胡相比，其提取物、皂苷類成分和 HPLC 指紋圖譜均無顯著差異，但揮發(fā)油的含量和成分有一定差異。因此培育柴胡具有一定的應(yīng)用前景和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，北柴胡提取物的含量為15.6%，柴胡皂苷 c、a、d 含量分別為0.50%、1.90%和1.73%。南柴胡浸出物含量為25.9%，皂苷c、d含量分別為0.15%、0.29%。市場(chǎng)上的柴胡飲片品種主要為北柴胡，浸出物含量為13.6%，皂苷c、a、d的含量分別為0.41%、1.17%、1.30%。

湯芳玲等^[13]采用Waters BEHTM C_l8色譜柱，以CH₃CN∶H₂O進(jìn)行梯度洗脫，0.61 mL· min^-1的流速，200 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)，30℃柱溫。通過檢測(cè)20批小葉黑柴胡藥材，建立其UPLC指紋圖譜（如圖3所示），共發(fā)現(xiàn)了28個(gè)共有指紋峰，根據(jù)聚類分析結(jié)果，可將藥材質(zhì)量分為2大類，8個(gè)相似度較高的藥材分為一類。

李艷榮等^[14]建立同時(shí)測(cè)定承德產(chǎn)及其他主產(chǎn)區(qū)柴胡中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量及其HPLC指紋圖譜（如圖4所示）。方法：色譜柱為ZorbaxSB-C₁₈，乙腈溶液系統(tǒng)梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，流速1.0 mL· min^-1，分析時(shí)間90 min。得到柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的線性范圍分別為33.2～531 μg· mL^-1（r=0.9999）、31.8～508 μg·mL^-1（r=0.9999）;平均回收率分別為98.6%（RSD=0.9%）、98.9%（RSD=1.2%）。15批藥材的HPLC指紋圖譜共確立6個(gè)共有峰。

王建科等^[15]建立了竹葉柴胡藥材的HPLC指紋圖譜。方法：色譜柱為Agilent C_l8， CH₃CN：0.2% H₃PO₄水溶液為流動(dòng)相，流速為1.0 mL·min^-l，柱溫為30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm。得到了竹葉柴胡藥材的指紋圖譜，確定了共有峰22個(gè)，各峰的相似度均>0.800。

王一飛等^[16]建立了柴胡藥材的高效液相指紋圖譜方法（如圖5所示）。方法：采用Zorbax SB-C₁₈柱，柱溫25℃，以流動(dòng)相CH₃CN：0.2% H₃PO₄水溶液洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm，流速為1.0 mL·min^-l。采用國家藥典委員會(huì)出版的《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)》軟件，對(duì)9批不同批次的柴胡藥材指紋圖譜進(jìn)行相似度計(jì)算。得到各批柴胡藥材中有11個(gè)共有峰，各峰分離度良好，各批次柴胡藥材間共有峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD<1.0%，藥材間相似度均>90%。

孫國祥等^[17]用RP-HPLC建立了柴胡HPLC數(shù)字化指紋圖譜（如圖6所示）。方法采用CenturySIL C₁₈色譜柱，流動(dòng)相為水和乙腈（均含l%醋酸）梯度洗脫;流速1.0 mL·min^-1，265 nm檢測(cè)，柱溫（30～0.15）℃。確定了27個(gè)共有峰。通過對(duì)指紋峰多種參數(shù)評(píng)價(jià)，建立了柴胡HPLC數(shù)字化指紋圖譜。各產(chǎn)地藥材的化學(xué)成分分布比例和含量2個(gè)方面與對(duì)照指紋圖譜間都具有良好相似性。

王啟帥等^[18]采用HPLC-ELSD析方法，對(duì)柴胡樣品進(jìn)行HPLC指紋圖譜研究。分析采用相似性分析、數(shù)據(jù)聚類分析和主成分分析分析。結(jié)果建立了柴胡藥材的HPLC指紋圖譜分析方法，共有12個(gè)共有峰。

綜上所述，隨著指紋圖譜技術(shù)的飛速發(fā)展，已廣泛應(yīng)用于對(duì)中藥質(zhì)量的研究，逐步取代傳統(tǒng)的以單一化學(xué)成分的含量來控制藥材質(zhì)量的模糊做法，各地對(duì)正品柴胡和道地柴胡品種的質(zhì)量研究很多，多采用最新的指紋圖譜技術(shù)，研究發(fā)現(xiàn)各地柴胡品種的指紋圖譜有所不同，其指紋圖譜顯示有效成分含量皂苷和揮發(fā)油成分多有不同，結(jié)合長(zhǎng)江上游和大別山區(qū)域柴胡的考察，借鑒和運(yùn)用其他柴胡指紋研究經(jīng)驗(yàn)，建立地域性柴胡指紋圖譜，指導(dǎo)柴胡資源開發(fā)意義重大。

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（收稿日期：2021-04-08 編輯：陶希睿）