高效液相色譜法測定牡丹皮中芍藥苷含量的研究

程玉柱 夏運(yùn)喜 徐友利 符俊峰 劉曉燕

摘要：采用高效液相色譜法測定牡丹皮中芍藥苷的含量。方法：采用高效液相色譜法，C18柱（5μm，150mm×4.6mm），流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（15：85），流速1.0ml/min，柱溫：30℃，檢測波長230nm。結(jié)果：芍藥苷在0.04197-0.2099mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9996，n=5）;平均回收率為99.2%（n=6），RSD為1.04%。結(jié)論：本方法快速靈敏、準(zhǔn)確可靠，可用于牡丹皮的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：牡丹皮;芍藥苷;高效液相色譜法

牡丹皮為毛莨科植物牡丹Paeonia suffruticosa?Andr.的根皮。具有清熱涼血，活血化瘀之功效。用于熱入營血，溫毒發(fā)斑，吐血衄血，夜熱早涼，無汗骨蒸，經(jīng)閉痛經(jīng)，跌撲傷痛，癰腫瘡毒[1]。牡丹皮主要含丹皮酚類和芍藥苷類成分[2]。芍藥苷具有多種生物活性，對心血管、中樞神經(jīng)系統(tǒng)免疫、以及平滑肌等方面均有肯定的藥理作用[3]。在《中華人民共和國藥典》2010版中對牡丹皮的含量測定只控制了丹皮酚指標(biāo)，未對芍藥苷進(jìn)行控制。本研究采用高效液相色譜法測定牡丹皮中芍藥苷的含量，為更加全面的控制牡丹皮質(zhì)量提供了參考依據(jù)。

1儀器與試劑

高效液相色譜儀（日本島津，SPD-20A），超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司 ），電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司），電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。牡丹皮飲片（盛海堂中藥飲片有限公司），芍藥苷對照品（中國食品藥品檢定研究，批號110736-201337）、甲醇（天津賽孚瑞科技有限公司），乙腈（Tedia Company， Inc.）、磷酸（上海蘇懿化學(xué)試劑有限公司）。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：C18柱（5μm，150mm×4.6mm），流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（15：85），流速1.0ml/min，柱溫：30℃，檢測波長230nm，進(jìn)樣量20μl。在此色譜條件下，樣品中芍藥苷峰與其他非被檢測成分峰能夠達(dá)到分離。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取芍藥苷對照品11.24mg，置于100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，對照品溶液的濃度為0.1079mg/ml。

2.3供試品溶液的制備

取牡丹皮粗粉（過60目篩）約0.5g，精密稱定，置于50ml量瓶中，加甲醇約45ml，超聲處理（功率500W，頻率40Hz）30分鐘，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4系統(tǒng)適用性試驗

精密吸取芍藥苷對照品溶液20μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定芍藥苷峰面積，RSD=0.87%。表明儀器精密度良好。

2.5線性關(guān)系考察

精密稱取芍藥苷對照品10.96mg，置于25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液的濃度為0.4197mg/ml，作為儲備液。分別精密量取儲備液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分別置于10ml量瓶中，加甲醇并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度分別為0.04197mg/ml、0.08394mg/ml、0.1259mg/ml、0.1679mg/ml、0.2099mg/ml的溶液。分別進(jìn)樣20μl。以峰面積為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸（r=0.9996，n=5）。表明芍藥苷在0.04197-0.2099mg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6重復(fù)性試驗

取同一牡丹皮粗粉（過60目篩），分別制得供試品溶液6份，進(jìn)樣，計算含量，結(jié)果其RSD為1.32%，表明該方法具有良好的重復(fù)性。

2.7中間精密度試驗

由另一檢驗員，在相同檢驗條件下，取同一牡丹皮粗粉（過60目篩），分別制得供試品溶液6份，進(jìn)樣，計算含量，結(jié)果其RSD為1.16%，表明該方法具有良好的中間精密度。

2.8穩(wěn)定性試驗

精密吸取同一供試品溶液，分別在0、4、8、12、18、24h進(jìn)樣，測定芍藥苷峰面積，RSD=1.14%。表明供試品溶液在24內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.9準(zhǔn)確度試驗

取已測定含量的牡丹皮粗粉（過60目篩）約0.25g，共6份，精密稱定，分別置于50ml量瓶中，各精密加入芍藥苷對照品儲備液（0.4197mg/ml）4ml，加甲醇適量，超聲處理（功率500W，頻率40Hz）30分鐘，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，分別進(jìn)樣20μl，測定芍藥苷含量，記錄圖譜，計算得平均回收率為99.2%，RSD為1.04%，結(jié)果見表1。

3討論

在《中華人民共和國藥典》2010版中對牡丹皮的含量測定只控制了丹皮酚指標(biāo)，未對芍藥苷進(jìn)行控制，筆者認(rèn)為未能全面客觀地平均牡丹皮的質(zhì)量。本研究采用高效液相色譜法測定牡丹皮中芍藥苷的含量，進(jìn)行了系統(tǒng)適用性、線性關(guān)系、重復(fù)性、中間精密度、穩(wěn)定性、精密度試驗，為更加全面的控制牡丹皮質(zhì)量提供了參考依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]中國藥典委員會.中華人民共和國藥典一部[S]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010;160-161.

[2]吳少華，馬云保，羅曉東，等.丹皮的化學(xué)成分研究 [J]. 中藥草，2002，33（8）：679-680.

[3]鄭世存，李曉宇，歐陽兵，等.芍藥苷藥理研究新進(jìn)展 [J]. 中國藥物警戒，2012，09（2）：100-103.