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    宮頸癌組織中自噬相關(guān)蛋白Beclin1的表達及臨床意義

    2021-10-09 02:40:36鄭子雯楊小榮楊心鳳
    實用癌癥雜志 2021年8期
    關(guān)鍵詞:宮頸癌淋巴結(jié)病理

    易 韻 鄭子雯 楊小榮 婁 俊 楊心鳳

    宮頸癌是女性最常見婦科惡性腫瘤,發(fā)病率排女性惡性腫瘤的第二位,僅次于乳腺癌。目前已明確持續(xù)高危型HPV感染是其發(fā)病原因,但HPV致宮頸癌的具體發(fā)病機制及過程仍不清楚[1]。近年來自噬與腫瘤的關(guān)系引起了廣泛關(guān)注。自噬是細胞內(nèi)物質(zhì)代謝的重要途徑之一,它參與真核細胞的基礎(chǔ)代謝,具有高度保守性,在細胞穩(wěn)態(tài)及能量再利用方面發(fā)揮重要的作用。然而近些年研究表明,自噬調(diào)控機制的失活與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[2]。自噬相關(guān)基因1(Beclin1)是編碼自噬相關(guān)蛋白的重要基因[3]。本研究通過檢測Beclin1蛋白在宮頸癌中的表達情況,探討其在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

    1 材料與方法

    1.1 一般資料

    選用2018年至2019年在江西省腫瘤醫(yī)院婦瘤科行手術(shù)治療的首診宮頸癌患者40例,術(shù)中取宮頸癌組織及癌旁組織(距離癌組織>3 cm、經(jīng)HE染色證實無癌細胞浸潤的正常宮頸組織)。患者年齡36~66歲,平均年齡48歲。按照FIGO2018子宮頸癌分期標準:Ⅰ期32例,Ⅱa期8例。鱗癌30例,腺癌8例,特殊類型2例;中、高分化25例,低分化15例。5例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,35例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。所有標本的采集均取得患者或家屬的知情同意并經(jīng)我院倫理委員會批準。

    1.2 入組標準

    ①術(shù)前宮頸活檢病理確診為宮頸癌;②術(shù)前未行放化療、免疫等腫瘤綜合治療;③沒有合并其他組織器官原發(fā)惡性腫瘤。

    1.3 試劑

    Beclin1小鼠抗人單克隆抗體,購自Abcam公司;通用型二抗及DAB顯色液,購自北京中杉金橋公司。

    1.4 方法

    采用免疫組化EnVision法染色,將切片脫蠟、水化,3%H2O2封閉:室溫孵育30 min,高壓熱修復抗原,一抗Beclinl 4 ℃過夜,二抗37 ℃孵育30 min,DAB顯色,蘇木精復染,1%鹽酸乙醇分化,脫水,透明,封固。實驗用陽性乳腺癌標本作陽性對照,PBS代替一抗作陰性對照。

    1.5 結(jié)果判斷

    Beclin1蛋白主要在細胞質(zhì)中表達,陽性表達為淡黃色至棕褐色顆粒。按細胞染色強度評分,共分4級:不顯色(0分)、淺黃色(1分)、棕黃色(2分)、棕褐色(3分)。每例隨機觀察5個高倍視野陽性區(qū),計算陽性細胞所占百分比進行評分:陽性細胞率≤10%為1分,>10%~50%為2分,>50%為3分。最終將兩者相乘,結(jié)果判定:0分為陰性(-);1~3分為弱陽性(+);4~6分為陽性(++);9分為強陽性(+++)。(-)為陰性表達,(+)~(+++)均為陽性表達。

    1.6 統(tǒng)計學方法

    采用SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析,計數(shù)資料組間比較采用卡方檢驗,相關(guān)性分析采用 Bivariate(Spearman)等級相關(guān)性分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結(jié)果

    2.1 Beclin1免疫組化結(jié)果

    本研究結(jié)果顯示Beclin1蛋白主要在細胞質(zhì)中表達,在宮頸癌組織中大多數(shù)表達呈陰性,少部分呈弱陽及中等陽性表達,極少部分(2例)強陽性表達,而在癌旁組織中大多數(shù)呈強陽性表達。Beclin1蛋白在宮頸癌及癌旁組織中陽性表達率分別為 42.5%(17/40)、95.0%(38/40),差異有明顯統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表1。

    表1 Beclin1蛋白在宮頸癌及癌旁組織中的表達/例

    2.2 宮頸癌組織中Beclin1蛋白表達及臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系

    Beclin1蛋白表達陽性率與腫瘤形態(tài)及病理類型無明顯相關(guān)性(P>0.05),而與腫瘤的分化程度、浸潤深度及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P<0.05)(表2)。

    表2 宮頸癌組織中Beclin1蛋白表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系/例

    3 討論

    自噬是真核細胞中獨有的生命現(xiàn)象,它能使細胞利用溶酶體降解自身受損的細胞器和大分子物質(zhì)[4]。自噬在生理和病理生理方面均能調(diào)節(jié)細胞穩(wěn)態(tài),但該過程的功能障礙可導致細胞死亡。自噬可以作為一種替代性的細胞死亡機制,類似于某些條件下的細胞凋亡,這被描述為Ⅱ型程序性細胞死亡[5]。研究表明,自噬可通過清除受損細胞器、啟動細胞程序性死亡來控制腫瘤細胞增殖,所以自噬可以保護我們生物體免受不同的疾病如感染、神經(jīng)退行性病及癌癥[6]。

    隨著惡性腫瘤的發(fā)展,它們與其微環(huán)境相互作用,并可激活自噬,這是一種分解代謝過程[7]。近年來,腫瘤與凋亡、壞死的研究層出不窮,腫瘤與自噬的相關(guān)性研究成了近些年研究的熱點,相關(guān)研究甚多,目前自噬與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展成為大家研究的焦點。一方面,研究表明自噬可以通過調(diào)節(jié)細胞內(nèi)過氧化物的濃度、氧化應激水平、致瘤性突變積累等抑制腫瘤發(fā)生[8],當然也有研究顯示自噬在某些腫瘤中表現(xiàn)較高的活性。自噬如何影響腫瘤生長尚有爭議。所以自噬研究在腫瘤的治療上具有廣闊的前景。研究表明[9],自噬有望成為腫瘤治療的潛在干預靶點,為廣大惡性腫瘤患者治療開拓新的治療途徑,真正提高惡性腫瘤患者的臨床治愈率。

    Beclin1作為重要的自噬相關(guān)蛋白,參與自噬和細胞凋亡,是胚胎發(fā)生和正常組織動態(tài)平衡所必需的。近年來,Beclin1的抗腫瘤作用受到越來越多的關(guān)注,它被鑒定為在自噬的溶酶體降解途徑中起關(guān)鍵作用的腫瘤抑制蛋白。實驗證據(jù)表明,Beclin-1單獨抑制腫瘤形成、血管生成和轉(zhuǎn)移,并與腫瘤抑制分子UVRAG,Bif-1,Ambra1和MDA-7/IL-24相互作用[10]。臨床上在大約40%的前列腺癌,50%的乳腺癌和75%的卵巢癌中都觀察到Beclin-1缺失[11-13]。為了深入研究Beclin1在宮頸癌患者病情進展中所起作用,本次研究通過檢測宮頸癌組織、癌旁組織中Beclin1蛋白的表達情況發(fā)現(xiàn):與癌旁組織相比,宮頸癌組織中Beclin1蛋白陽性表達率顯著降低,說明Beclin1是抑癌相關(guān)基因,它的表達降低導致了宮頸癌的發(fā)生。同時對宮頸癌與臨床病理進行相關(guān)分析,結(jié)果顯示:Beclin1蛋白表達與宮頸癌腫瘤的浸潤深度、組織學分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均密切相關(guān),表現(xiàn)為腫瘤浸潤深肌層、低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中Beclin1陽性表達率下降更明顯,與腫瘤的形態(tài)、病理類型無明顯相關(guān)性。統(tǒng)計結(jié)果表明:癌組織及癌旁組織中Beclin1表達差異提示其與宮頸癌的發(fā)生有關(guān),而在不同分化程度、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的差異表達提示其在宮頸癌的病情進展過程中扮演著重要角色,提示其與腫瘤的不良預后顯著相關(guān)。Beclin1可作為宮頸癌惡性程度、復發(fā)轉(zhuǎn)移的預測因子,臨床上可作為評估患者預后的一項指標。

    目前臨床上幾乎所有惡性腫瘤的治療仍然是手術(shù)、放化療、免疫靶向等綜合治療,早期患者預后相對良好,然而中晚期患者治療效果差,生存期短。因此,在治療惡性腫瘤的研究道路上,迫切需要我們不斷地探索,尋求新的治療方法。從目前對自噬的研究來看,誘導腫瘤細胞自噬性死亡有望為腫瘤治療開拓新的治療策略。宮頸癌晚期患者放化療效果欠佳,一旦發(fā)生復發(fā)轉(zhuǎn)移,化療的效果非常有限,臨床上對宮頸癌復發(fā)轉(zhuǎn)移的治療非常棘手,所以迫切需要研究新的治療手段來改善晚期、復發(fā)性宮頸癌的治療效果,所以目前對自噬與宮頸癌的研究及對自噬調(diào)控機制的進一步研究將為開發(fā)宮頸癌新的治療策略提供理論依據(jù)。

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