聯(lián)合檢測BRD4、CXCR4及TGAb、TPOAb水平評估甲狀腺癌切除術(shù)后患者預(yù)后的價值

王曉明，陳茜，呂金鋒，張攀攀

（1.河南省焦作煤業(yè)（集團）有限責(zé)任公司中央醫(yī)院普外二科；2.河南省焦作煤業(yè)（集團）有限責(zé)任公司中央醫(yī)院手術(shù)室，河南焦作 454000）

甲狀腺癌是常見內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性腫瘤,近年來發(fā)病率逐年升高，病理類型以分化型多見。手術(shù)切除是臨床治療甲狀腺癌的主要方法,大部分患者手術(shù)切除后預(yù)后較良好,但也有部分患者會出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)或遠處轉(zhuǎn)移[1]。腫瘤分子標(biāo)志物對甲狀腺癌患者預(yù)后的評估逐漸成為臨床研究的熱點。研究指出[2]，甲狀腺球蛋白抗體（Thyroglobulin antibody，TGAb）及抗甲狀腺過氧化物酶抗體（Thyroid peroxidase antibody，TPOAb）時甲狀腺自身抗原產(chǎn)生的抗體，是重要甲狀腺免疫性炎癥指標(biāo)，其水平異常與甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。研究證實[3]，溴結(jié)構(gòu)域蛋白4（Bromodomain-containing protein-4，BRD4）及趨化因子受體4（Chemokine receptor-4，CXCR4）參與癌細胞的生長、侵襲、轉(zhuǎn)移等。本研究選取我院行甲狀腺切除術(shù)患者為研究對象，探討B(tài)RD4、CXCR4、TGAb、TPOAb聯(lián)合檢測對其預(yù)后的評估價值。報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，選取我院2016年1 月-2017年1 月收治的接受甲狀腺癌切除術(shù)患者126例為研究對象。診斷標(biāo)準(zhǔn)：參照《甲狀腺癌診療規(guī)范（2018年版）》[4]。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴經(jīng)病理學(xué)確診為甲狀腺癌并成功完成甲狀腺癌切除術(shù)者；⑵年齡≥18 歲；⑶術(shù)前無遠處轉(zhuǎn)移病灶；⑷術(shù)前未接受放療或化療者。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴合并嚴重臟器功能障礙；⑵術(shù)前即存在明顯甲狀腺功能障礙；⑶既往存在頸部手術(shù)史者；⑷合并感染疾病、免疫、血液系統(tǒng)疾病者。126例患者中男51例，女75例；年齡26～67 歲，平均年齡60.23±4.38 歲；病理類型：乳頭狀癌73例，濾泡狀癌33例，混合型癌20例?；颊呔炇鹬橥鈺?。所有患者持續(xù)隨訪3年。

1.2 方法 血清TGAb、TPOAb水平檢測：所有患者術(shù)后1年采集空腹清晨靜脈血5ml，4000r/min 離心5min，取上層血清保存于-70 攝氏度環(huán)境中待檢。通過放射免疫法檢測血清TGAb水平，通過化學(xué)發(fā)光法檢測血清TPOAb水平，試劑盒分別購買于上海紀(jì)寧生物和上海恒雅生物科技，操作均嚴格遵循說明書進行。

腫瘤組織BRD4、CXCR4水平檢測：所有腫瘤組織標(biāo)本以10%甲醛固定，石蠟包埋，制成4μm 切片，蘇木精伊紅染色，采用免疫組化法進行染色，試劑盒購買于上海長島生物科技。BRD4、CXCR4鼠抗人單克隆抗體分別購買于上海艾美捷科技有限公司和上海鈺博生物科技有限公司。以磷酸鹽緩沖液為陰性對照代替一抗，以已知陽性切片為陽性對照。

1.3 評價指標(biāo) 以隨訪過程中核素顯像檢查結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，評估血清TGAb、TPOAb水平聯(lián)合腫瘤組織BRD4、CXCR4水平對甲狀腺癌切除術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的價值。甲狀腺癌復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移判定標(biāo)準(zhǔn)[5]：血清TGAb＞100 IU/ml 為陽性，血清TGAb≤100 IU/ml 為陰性；血清TPOAb＞50 IU/ml 為陽性，血清TPOAb≤50 IU/ml 為陰性；腫瘤組織BRD4、CXCR4水平根據(jù)染色強度分為4 級，0 分無色，1 分淡黃色，2 分棕黃色，3 分棕褐色，并于400 倍鏡下觀察著色細胞比例，著色細胞≤5%為0 分，6%≤著色細胞≤25%為1 分，26%≤著色細胞≤50%為2 分，著色細胞≥51%為3 分。根據(jù)染色強度評分和陽性細胞比例評分乘積判斷性質(zhì)，0～1 分為陰性，2 分以上為陽性。4 者聯(lián)合診斷以其中任何一項陽性則為陽性。診斷準(zhǔn)確度=（真陽性＋真陰性）/總例數(shù)×100%。采用ROC 曲線分析血清TGAb、TPOAb聯(lián)合腫瘤組織BRD4、CXCR4對甲狀腺癌切除術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的價值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0 軟件統(tǒng)計分析，計量資料以()形式表示，采用獨立樣本t 檢驗，計數(shù)資料比較采用卡方檢驗，采用ROC 曲線分析預(yù)測價值。P<0.05 為比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 術(shù)后核素顯像檢查結(jié)果 126例行甲狀腺癌切除術(shù)患者術(shù)后經(jīng)核素顯像檢查確診43例復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，未復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移83例。

2.2 對甲狀腺癌切除術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的診斷準(zhǔn)確率對甲狀腺癌切除術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的診斷準(zhǔn)確率,血清TGAb 為79.37%，血清TPOAb 為78.57%，癌組織BRD4 為75.40%,癌組織CXCR4 為73.81%,血清TGAb、TPOAb聯(lián)合癌組織BRD4、CXCR4為91.27%。見表1。

表1 對甲狀腺癌切除術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的診斷準(zhǔn)確率

2.3 TGAb、TPOAb、BRD4、CXCR4聯(lián)合對 甲狀腺癌切除術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的ROC 分析 經(jīng)ROC 曲線分析四項指標(biāo)對甲狀腺癌切除術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移評估價值,血清TGAb 預(yù)測復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的AUC 為0.754，特異度為62.79%，敏感度為87.95%；血清TPOAb 預(yù)測復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的AUC 為0.753，特異度為65.12%，敏感度為85.54%；BRD4 預(yù)測復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的AUC 為0.701,特異度為53.49%,敏感度為86.75%；CXCR4 預(yù)測復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的AUC 為0.695，特異度為55.81%,敏感度為83.13%。TGAb、TPOAb、BRD4、CXCR4聯(lián)合預(yù) 測復(fù)發(fā) 或轉(zhuǎn)移的AUC 為0.895,特異度為83.72%,敏感度為95.18%。

表2 TGAb、TPOAb、BRD4、CXCR4聯(lián)合對甲狀腺癌切除術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的ROC 分析

3 討論

甲狀腺癌是頭頸部多發(fā)惡性腫瘤疾病,近年來在實體惡性腫瘤中發(fā)病率增長速度最快。甲狀腺癌切除手術(shù)是目前臨床治療甲狀腺癌的主要方法，但患者術(shù)后頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肺部轉(zhuǎn)移的風(fēng)險較高，降低存活率。因此早期準(zhǔn)確的評估甲狀腺癌患者行切除術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移情況風(fēng)險對臨床制定適宜的治療方案、提高患者生存率、提生生存質(zhì)量意義重大。臨床研究證實[6]，腫瘤標(biāo)志物水平可為甲狀腺的治療、療效評價以及預(yù)后評估提供重要參考。TGAb 是甲狀腺濾泡柱狀細胞的糖蛋白之一，主要存在于自身甲狀腺免疫性疾病患者體內(nèi)，是機體免疫功能紊亂的血清標(biāo)志物[7]。TPOAb 則主要在甲狀腺細胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與頂部存在,屬于一類膜結(jié)合糖蛋白分子，以血紅素為輔基，促進甲狀腺激素的合成[8]。TGAb、TPOAb 均是自身免疫性甲狀腺疾病發(fā)生和發(fā)展時產(chǎn)生的重要抗體,可作為其發(fā)生和發(fā)展的標(biāo)志物。有研究證實[9]，自身免疫性甲狀腺病是甲狀腺癌發(fā)生的危險因素,也與甲狀腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。本文以核素顯像檢查結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，隨訪126例行甲狀腺癌根治術(shù)患者術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移情況,并與患者血清TGAb、TPOAb檢查結(jié)果比較，研究結(jié)果顯示，血清TGAb對甲狀腺癌根治術(shù)患者術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的診斷準(zhǔn)確率為79.37%,特異度為62.79%,敏感度為87.95%，血清TPOAb對甲狀腺癌根治術(shù)患者術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的診斷準(zhǔn)確率為78.57%，特異度為65.12%，敏感度為85.54%。并經(jīng)ROC 曲線分析顯示血清TGAb、TPOAb對甲狀腺癌根治術(shù)患者術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的診斷曲線面積分別為0.754、0.753，可知血清TGAb、TPOAb 單個指標(biāo)的診斷效能較低，還需參考其他指標(biāo)。

趨化因子受體主要分為CC受體、XC受體、CX3C受體以及CXC受體4 個亞家族。CXCR4 屬于CXC受體家族，與其特異性配體趨化因子基質(zhì)細胞衍生因子-1(stromal cell derived factor-1,SDF-1)構(gòu)成生物軸[10]。相關(guān)報道指出[11]，CXCR4/SDF-1生物周能激活多條信號通路,將腫瘤細胞肌動蛋白絲聚合，形成偽足進而促進血管局部形成，提高腫瘤細胞遷移、侵襲等生物學(xué)活性，促進腫瘤生長、轉(zhuǎn)移和浸潤。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)[12],CXCR4水平越高，甲狀腺腫瘤分化程度越低,其表達水平高是影響甲狀腺腫瘤預(yù)后獨立危險因素。但本文研究結(jié)果顯示，腫瘤組織中CXCR4對甲狀腺癌切除術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移診斷準(zhǔn)確率為73.81%，ROC 曲線分析顯示AUC 為0.695,特異度為55.81%,敏感度為83.13%，可知CXCR4 單獨評估的效能不佳。BRD4 屬于溴結(jié)構(gòu)域蛋白家族,溴結(jié)構(gòu)域蛋白家族已被證實在多種腫瘤中表達上調(diào)，與腫瘤細胞的生長、增殖、凋亡等生物學(xué)行為密切相關(guān)[13]。BRD4 是一類進化層面高度保守的蛋白，能識別、結(jié)合乙?；嚢彼釟埢?，招募染色質(zhì)調(diào)節(jié)蛋白、染色質(zhì)重塑因子、轉(zhuǎn)錄因子等進而影響下游基因的轉(zhuǎn)錄過程，促進腫瘤細胞生長[14]。報道顯示[15]，抑制甲狀腺癌組織中BRD4表達可使癌細胞周期停滯，抑制腫瘤生長。本文結(jié)果中BRD4對甲狀腺癌切除術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移診斷準(zhǔn)確率為75.40%。本文分析4 項指標(biāo)聯(lián)合診斷甲狀腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的顯示，診斷準(zhǔn)確率為91.27%，經(jīng)ROC 曲線分析，AUC 為0.895，特異度為83.72%，敏感度為95.18%?？芍? 項指標(biāo)聯(lián)合評估甲狀腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的效能較好，用于預(yù)測甲狀腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移價值較高。

綜上所述，血清TGAb、TPOAb水平聯(lián)合癌組織BRD4、CXCR4對甲狀腺癌切除術(shù)患者術(shù)后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移具有較高預(yù)測價值。