ACS患者IL-22的變化及與SYNTAX評分相關性研究

童金鳳，萬臘根 ,王萍

（1.九江市第一人民醫(yī)院檢驗科，江西 九江 332000；2.南昌大學第一附屬醫(yī)院，江西 南昌 330000；3.九江市中醫(yī)院檢驗科，江西 九江 332000）

一直以來，我國心血管病防治工作已取得了令人矚目的成績，但仍面臨許多問題，總的來看，中國患病率及死亡率還處于上升階段。心血管病死亡占居民疾病死亡構成40%以上，處于前列，高于許多常見疾病[1]。

目前來看，冠狀動脈綜合征幾乎總是由冠狀動脈粥樣硬化引起，炎癥學說、脂質浸潤學說、內皮損傷學說、血栓形成學說等是目前動脈硬化綜合征的主要學說，其中Peter Libby 開創(chuàng)了動脈粥樣硬化炎癥學說。IL-22 初始被人們稱為IL-TIF，意思為IL-10 相關的T細胞誘導因子。IL-22 同IL-10、IL-19、IL-20、IL-24、IL-26、IL-28A、IL-28B和IL-29 一樣歸屬于IL-10 家族，其主要由Th1、Th17、Th22細胞分泌，是唯一已知的由免疫細胞分泌但不靶向作用免疫細胞的細胞因子[2]。

歐洲心臟病學會年會ESC2008 公布的SYNTAX 積分是首個針對左主干病變和（或）3 支病變的冠狀動脈病變解剖特點進行危險分層的積分系統(tǒng)，主要的依據病變位置、嚴重程度、分叉、鈣化等解剖特點，這是一個定量評價冠脈病變復雜程度的工具。

在心臟性疾病方面，有研究表明IL-22與冠心病、病毒性心肌炎、心衰等疾病均有相關[3]。目前關于ACS患者IL-22與SYNTAX 積分相關性鮮有研究，本文運用熒光定量PCR和ELISA 法檢測IL-2，并根據SYNTAX 積分分為低、中、高危組，以便找出它們之間的相關性，報告如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 ⑴選取九江市第一人民醫(yī)院心內科2018年3 月至2020年4 月的患者，將所有入選病例按照疾病類型分為ACS 組20例（包括AMI 12例和UAP 8例），年齡68.35±8.44 歲，其中男性11例，女性9例，和SAP 組20例，年齡66.00±9.51歲，其中男性12例，女性8例。同時選取同期經心電圖、心肌標記物及冠狀動脈造影證實沒有冠脈病變的健康體檢者（health control,HC）20例作為對照組，年齡65.75±7.06 歲，其中男性10例，女性10例。⑵另選取60例ACS患者根據SYNTAX 積分將其分為低危組(評分≤22 分)、中危組(22 分<評分<32 分)、高危組(評分≥32 分)。低危組年齡67.57±11.23 歲，其中男性12例，女性8例，中危組年齡67.11±10.23 歲，其中男性11例，女性9例，高危組年齡66.54±10.12 歲，其中男性13例，女性7例。

1.2 納入和排除標準 納入標準：⑴年齡要求小于80 歲,入院后行常規(guī)檢查,依據患者臨床癥狀，心肌酶譜、心電圖和冠狀動脈造影和PCI 手術治療確診為ACS的患者；⑵AMI的判定標準為休息狀態(tài)下持續(xù)性胸痛30 分鐘以上,結合心肌酶譜升高2倍以上，并且心電圖發(fā)生典型ST段抬高或壓低改變；⑶UAP的判定標準為近一月內發(fā)生的嚴重心絞痛,并且心絞痛程度加重，或休息時發(fā)生心絞痛，心電圖的表現(xiàn)有缺血性改變,心肌酶譜升高在2 倍以內；⑷SAP的判定標準為心絞痛發(fā)生頻率，持續(xù)時間和程度在近一月內沒有改變,而且心肌酶譜正常；⑸本研究已經院倫理委員會審核批準。

排除標準：⑴患者有感染性疾病或其他嚴重肝腎疾病、系統(tǒng)性疾?。虎苹加行募》蚀蟮绕渌羌毙怨跔顒用}綜合征的心臟?。虎怯袨E用藥物或酗酒；⑷吸煙患者。

1.3 方法

1.3.1 試劑及儀器 Human IL-22 ELISA KIT（上海翼飛公司）；淋巴細胞分離液（拜爾迪公司）；RTPCR 試劑盒（寶生物公司）；核酸蛋白測定儀（嘉鵬科技公司）；ADVIA2400 全自動生化分析儀；科華ST-360型酶標儀；達安DA7600 PCR 擴增儀。

1.3.2 標本采集及處理 所有研究對象空腹8 小時，由護士無菌操作采集空腹靜脈血。采用EDTA-抗凝管采血2ml 用于制備PBMC；采用2 個干燥管分別采血5ml，一管離心用于測血清生化功能，一管離心收集血清-20℃保存用于IL-22 檢測。

1.3.3 RT-PCR 檢測不同組IL-22mRNA表達水平通過Ficoll-Hypaque 法制備外周血單個核細胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,利用Trizol 試劑提取總RNA。采用cDNA 逆轉錄試劑盒進行cDNA 合成,應用primer 5.0 設計引物與探針（IL-22 F 5'-CAACTTCCAGCAGCCATACA-3' R 5'-GTTGACACCTGCTTCATCA-3' β-actin F 5'-ACCCACACTGTGCCCATCTAC-3' R 5'-AGCCAA GTCCAGACGCAGG-3'）交由上海英駿生物技術有限公司合成。以制備的cDNA 為模板，根據SYBR Green RT-PCR 一步法試劑盒說明書分別擴增IL-22基因序列,并得出熒光曲線和相應的△Ct 值。以正常對照組各值為參照，采用2－△△Ct法分析目標基因的相對表達量(倍)。反應體系按說明書配置好后，將準備好的樣品依次加入96 孔板中，每個樣品設3 孔，RT-PCR 反應DN7600 系統(tǒng)上進行，反應條件：95℃預變性10s，95℃變性5s，60℃退火及延伸30s，進行30～40 個循環(huán)，重復3 次。

1.3.4 酶聯(lián)免疫法檢測血清IL-22 將收取到的患者和對照組冰凍血清室溫解凍，使用ELISA kit 測定IL-22 濃度，所有操作嚴格參照說明書。

1.4 統(tǒng)計學處理 使用SPSS 19.0 軟件對所得數據進行統(tǒng)計分析，計量資料用()表示，組間比較采用非參數Kruskal-Wallis 秩和檢驗。P<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 ACS患者基礎資料比較 ACS 組、SAP 組和HC 組在年齡、總膽固醇、總甘油三脂、高密度脂蛋白方面比較無顯著性差異（P>0.05），ACS 組低密度脂蛋白高于HC 組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1；SYNTAX 評分低、中高危組三組間在年齡、總膽固醇、總甘油三脂、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白方面比較無顯著性差異（P>0.05），數據略。

表1 各組基線資料比較

2.2 ACS患者IL-22水平分析 ACS 組和SAP 組同HC 組比較，患者血清IL-22水平升高，分別為：31.41±7.06、17.10±4.81、9.38±2.45，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；ACS 組較SAP 組IL-22水平升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），見圖1。ACS 組和SAP 組外周血PBMC 中IL-22mRNA水平高于HC組，分別為：4.39±1.79、2.39±1.10、0.89±0.12，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；ACS 組IL-22mRNA水平高于SAP 組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見圖2。相關性分析發(fā)現(xiàn)，血清IL-22 同外周血PBMC 中IL-22mRNA 呈顯著正相關（r=0.70，P<0.0001），見圖3。

圖1 三組間血清IL-22水平比較

圖2 三組PBMC 中IL-22mRNA水平比較

圖3 IL-22與IL-22mRNA 相關性分析

2.3 不同SYNTAX 評分患者IL-22水平分析SYNTAX 評分高危組患者血清IL-22和外周血PBMC 中IL-22mRNA水平分別為：41.33±6.57、6.58±1.01，均高于低危組患者，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；SYNTAX 評分高危組患者血清IL-22和外周血PBMC 中IL-22mRNA水平均高于中危組患者，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；SYNTAX 評分中危組患者血清IL-22和外周血PBMC 中IL-22mRNA水平分別為：31.27±5.48、4.64±1.12，均高于低危組患者，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），低危組分別為：23.10±6.25、3.09±0.85，見圖4,5。相關性分析發(fā)現(xiàn),血清IL-22 同外周血PBMC 中IL-22mRNA 呈顯著正相關（r=0.65，P<0.0001）,見圖6。

圖4 不同SYNTAX 評分患者血清IL-22水平比較

圖5 不同SYNTAX 評分患者IL-22mRNA水平比較

圖6 不同SYNTAX 評分患者IL-22與IL-22mRNA 相關性分析

2.4 SYNTAX 評分與IL-22 相關性分析 將SYNTAX 評分分組的低、中、高?；颊哐錓L-22和外周血PBMC 中IL-22mRNA 作相關性分析發(fā)現(xiàn)，SYNTAX 評分同血清IL-22 呈顯著正相關（r=0.74，P<0.0001），SYNTAX 評分也同外周血PBMC中IL-22mRNA 呈顯著正相關（r=0.75，P<0.0001），見圖7。

圖7 SYNTAX 評分與IL-22 相關性分析

3 討論

本研究選取20例ACS患者作基線分析，從結果可以看出，ACS患者低密度脂蛋白膽固醇水平高于健康對照組。這符合我們對ACS 一致的觀點，即血脂異常，如低密度脂蛋白膽固醇升高、甘油三酯升高和脂蛋白a 升高在動脈粥樣硬化中起著核心作用。體內和體外已有許多研究表明，低密度脂蛋白膽固醇可以侵入血管內皮下，誘導內皮功能障礙，并通過一些不同的機制引發(fā)斑塊形成。侵入到內皮下的低密度脂蛋白膽固醇也可以被氧化修飾，巨噬細胞暴露于氧化低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein,oxLDL）表達清道夫受體，如CD36，它能結合并促進氧化低密度脂蛋白形成[4]。

IL-22 主要由淋巴樣譜系細胞分泌，包括αβT細胞、γδT、NKT細胞、CD4+T細胞等分泌,不過在人類T細胞中還主要是Th22細胞分泌IL-22。IL-22 被認為具有病菌防御，再生和損傷保護作用?，F(xiàn)在IL-22和心血管疾病的研究也不斷地引起科研工作者的興趣，越來越多的證據表明IL-22 或許可以作為心血管疾病治療靶點。如在柯薩奇病毒B3誘導的急性病毒性心肌炎中，脾T H22細胞的百分比、血漿IL-22和心臟IL-22受體表達明顯升高[27]。小鼠模型中，急性心肌梗死后第一周補充IL-22可有效預防左心室功能障礙和心力衰竭[5]。

動脈粥樣硬化是冠心病、腦梗阻和外周血管病變的主要因素。在小鼠動脈粥樣硬化模型中，IL-23及其下游靶點IL-22 可通過抑制致動脈粥樣硬化微生物的生長抑制動脈粥樣硬化，當表達炎性細胞因子IL-23 消失，病情加重[6]。在另一項動脈粥樣硬化的研究中，Th22細胞及其分泌的IL-22 都參與了動脈粥樣硬化的發(fā)展，急性心肌梗死患者血清IL-22 高于不穩(wěn)定性心絞痛，穩(wěn)定性心絞痛及健康對照組[7]。本研究發(fā)現(xiàn)，ACS 組IL-22水平高于SAP 組和HC 組，這說明IL-22 參與了動脈硬化的發(fā)展。

SYNTAX 評分范圍從0 到83，更高的分數表明冠狀動脈疾病更復雜。本研究發(fā)現(xiàn)，隨著SYNTAX 評分從低危到高危,血清IL-22水平是逐漸上升的，外周血IL-22mRNA水平也是逐漸上升,并且SYNTAX 評分和IL-22 存在一定的相關性。這給我們的啟示是,更復雜的冠狀動脈病變可以導致更高的IL-22 變化。

總之,本研究我們發(fā)現(xiàn)急性冠狀動脈綜合征IL-22的變化，并且這一變化隨著評分的增高而增高，推測IL-22在此疾病種有重要作用。