高濃度免疫球蛋白G對無機(jī)磷檢測干擾及消除

劉肖瑛，林佩娜，歐陽偉慶，隋洪，黃慧瑾，朱雪云

（東莞康華醫(yī)院檢驗科，廣東 東莞 523000）

磷在人體中具有重要生理功能，其大部分以磷酸鈣的形式沉積于骨骼中，是構(gòu)成骨骼和牙齒的重要組成部分，只有少部分的磷存在于體液中。通常在血清中測定的是無機(jī)磷（P）。P的檢測可用于腎臟疾病、甲狀旁腺功能紊亂和維生素D 失衡的輔助診斷和治療監(jiān)測。因此其結(jié)果的準(zhǔn)確與否具有重要的臨床價值。眾所周知，溶血、脂血、黃疸是影響生化反應(yīng)的重要因素，但高球蛋白血癥導(dǎo)致無機(jī)磷檢測異常升高的關(guān)注度不高。特別是在多發(fā)性骨髓瘤患者中，血清中常出現(xiàn)異常高濃度的免疫球蛋白干擾生化免疫分析，而導(dǎo)致不正確的結(jié)果。工作中遇到1例無機(jī)磷結(jié)果異常升高的案例，初步推測是高濃度IgG 干擾了生化反應(yīng)，通過稀釋法來消除干擾，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本院住院患者1例（異常樣本），男性，52 歲，診斷為多發(fā)性骨髓瘤(IgG-k型，DS III期A型，R-ISS II 期)，IgG：77.5g/L。

1.2 儀器與試劑 西門子ADVIA 2400 全自動生化分析儀及原廠配套試劑,R1 成分(硫酸)，R2(硫酸，鉬酸銨)。強(qiáng)生VITROS5600 生化免疫分析儀及原廠配套測試劑，干片成分（對甲氨基苯芬硫酸鹽，鉬酸銨）。

1.3 方法 西門子ADVIA2400 生化分析儀上P 檢測使用磷鉬酸鹽法，P在硫磺酸存在的情況下與鉬酸銨發(fā)生反應(yīng)形成非還原性的鉬磷酸鹽復(fù)合物，在340/658nm 下采用終點反應(yīng)對其進(jìn)行檢測。ADVIA2400 機(jī)上檢測原倍，生理鹽水稀釋2 倍、4倍、6 倍、10 倍、14 倍樣本，強(qiáng)生VITROS5600 使用干化學(xué)法檢測原倍樣本[1,2]。

2 結(jié)果

2.1 P 反應(yīng)曲線 采用西門子ADVIA2400及磷鉬酸鹽法試劑檢測患者血清，獲得樣本反應(yīng)曲線，樣本在加入試劑1和樣本后出現(xiàn)吸光度逐漸升高，正常對照無升高情況。見圖1、圖2。

圖1 骨髓瘤患者樣本反應(yīng)曲線（原倍）

圖2 正?；颊叻磻?yīng)曲線（原倍）

2.2 不同稀釋梯度檢測結(jié)果比較 樣本原液和2倍稀釋在ADVIA2400 上結(jié)果均受到干擾，反應(yīng)曲線異常，結(jié)果偏高,與強(qiáng)生VITROS5600 結(jié)果比較稀釋回收率分別為255.0%，和150.4%，ADVIA2400 稀釋4 倍后結(jié)果良好，反應(yīng)曲線正常，稀釋回收率96.1%,結(jié)果可接受。

表1 不同稀釋倍數(shù)樣本檢測結(jié)果

3 討論

多發(fā)性骨髓瘤的異常漿細(xì)胞惡性增殖引起廣泛浸潤，漿細(xì)胞分泌的大量異常單克隆免疫球蛋白的沉積，可引起腎功能損害、骨質(zhì)破壞、感染、貧血、出血、高鈣血癥、高黏滯綜合征等各種不同的臨床表現(xiàn)[3]。2017年王寧等報道，多發(fā)性骨髓瘤患者血清IgG 升高占34.88%，平均水平38.43g/L[4]，可見IgG水平升高不少見。血清中高濃度的IgG 可對多種指標(biāo)干擾，包括無機(jī)磷、鈣、總膽紅素、淀粉酶、激素類等[5]。

磷鉬酸紫外終點比色法使用簡單、快速和穩(wěn)定，為國內(nèi)大多數(shù)實驗室所采用。據(jù)報道[6]，高濃度的IgG對無機(jī)磷檢測的影響原因是高濃度的IgG加入到R1 試劑后，試劑中的主要成分酸使反應(yīng)體系達(dá)到了IgG的等電點，球蛋白出現(xiàn)沉淀，吸光度升高。與本室現(xiàn)象一致，從原倍反應(yīng)曲線可見，在加入R1和樣本后，反應(yīng)曲線異常升高。高單克隆免疫球蛋白對測定結(jié)果的干擾，通常可以用稀釋、沉淀、超濾對樣本進(jìn)行處理，或干化學(xué)檢測等方法[7-9]。但沉淀和超濾需要購買特殊的試劑及設(shè)備，操作要求較高并且繁瑣，且只能去除部分干擾，對于一般實驗室操作比較困難。干化學(xué)試劑采用了多層膜技術(shù)，最上層包含有BaSO4,這一層除了產(chǎn)生白色的背景反射率，還可以保留高分子物質(zhì)（超濾）、染料和造影劑等，很好的過濾掉高濃度IgG，去除干擾。干化學(xué)抗干擾較好，但對于沒有干化學(xué)檢測設(shè)備的實驗室，使用連續(xù)稀釋來對可疑的分析物進(jìn)行分析，可能是較好的解決辦法。在本案例中，通過不同梯度稀釋，在4 倍稀釋反應(yīng)曲線正常，與干化學(xué)法對比稀釋回收率達(dá)96.1%，結(jié)果可接受，證明該方法有效。但稀釋法同樣有缺點，比如稀釋的基質(zhì)效應(yīng)，較大稀釋倍數(shù)操作的準(zhǔn)確性難以保證等。

綜上所述，在工作中應(yīng)多關(guān)注儀器報警信息，及時查看反應(yīng)曲線，出現(xiàn)異常及時與臨床溝通，結(jié)合患者的相關(guān)結(jié)果及臨床信息進(jìn)行綜合分析，減低報告的錯誤率。但臨床工作繁忙，從大量的報告中去識別儀器報警信息，對審核人員的要求極高，所以智能化識別尤其重要。本實驗應(yīng)用自動審核規(guī)則對儀器報警信息進(jìn)行攔截，篩選出異常報告，有針對性查看反應(yīng)曲線，提高工作效力，提升報告質(zhì)量，同時減輕工作壓力。