VEGF、TGF-1在大腸癌組織中的表達及與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系

陳玲云，汪艷麗，鄭玉英，趙寶生

（新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院手術(shù)室，河南 新鄉(xiāng) 453100）

大腸癌病因與遺傳、大腸腺瘤以及生活方式有關(guān)，發(fā)病人群以老年人群為主，男女比例約為1.65:1[1]?；颊叱跗诎Y狀不顯，隨之腫瘤進展，患者將出現(xiàn)腹痛，便血，腹部可觸腫塊以及消瘦等癥狀，腫瘤轉(zhuǎn)移后可引發(fā)受累器官病理改變[2]。手術(shù)是本病的主要治療方式，其在病灶清除，延長患者生存期，提升患者生活質(zhì)量等方面具有顯著價值。血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是一種具有極高特異性的促血管內(nèi)皮細胞生長因子，轉(zhuǎn)化生長因子1（Transforming growth factor-β1，TGF-β1）是多肽細胞因子之一，是細胞增殖、分化以及牽引的重要參與因子[3]。為分析VEGF、TGF-β1在大腸癌組織中的表達及與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系，本文選取我院保存的82例大腸癌組織標(biāo)本進行研究，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1 月-2015年12 月我院保存的大腸癌組織標(biāo)本82例，其中男性51例，女性31例；年齡34～69 歲，中位年齡59.00 歲；結(jié)腸癌47例，直腸癌35例。同時選取癌旁組織（距癌邊緣＞5cm）作為對照，納入標(biāo)準：⑴在我院接受大腸癌根治術(shù)；⑵術(shù)前未行放化療等抗腫瘤治療；⑶臨床隨訪資料保存完整。排除標(biāo)準：⑴伴有其他惡性腫瘤；⑵有遠處轉(zhuǎn)移。

1.2 實驗方法對兩組樣本進行5μm 切片，將切片置于載玻片上，將烤片機設(shè)置為60℃，烤片2h，選用乙醇脫蠟水化，PBS 緩沖液浸泡10min，枸櫞酸鹽緩沖液進行抗原修復(fù)，PBS 洗滌2 次，3% H2O2滅活30 min，PBS 洗滌2 次，山羊血清封閉2h，選用VEGF、TGF-β1 抗體一抗（試劑盒由上海生工提供），4 ℃溫箱冷藏過夜，PBS 洗滌2 次，選用通用型抗體IgG 抗體進行二抗，置于溫箱內(nèi)于室溫環(huán)境下孵化30 min，PBS 洗滌2 次，DAB 顯色2 次，蘇木素復(fù)染，乙醇脫水，待樣本自然晾干后，封片，上海無陌光學(xué)儀器廠WMS-1030 雙目生物顯微鏡鏡檢。

1.3 結(jié)果判斷 VEGF、TGF-β1 主要表達于細胞胞漿中，呈棕黃色；采用半定量積分法，隨機選取5個高倍鏡視野，計數(shù)500 個細胞，對陽性細胞比例和染色強度進行評分，其中陽性細胞比例＜5%為0分，5%～10%為1 分，11%～50%為2 分，＞50%為3分，染色強度：無著色為0 分，淡黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分。兩者得分之和≥3 分為陽性表達。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 統(tǒng)計分析采用SPSS19.0 軟件，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，相關(guān)性采用Spearman 秩相關(guān)分析。檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 大腸癌和癌旁組織VEGF、TGF-β1表達比較大腸癌組織VEGF、TGF-β1表達陽性率明顯高于癌旁組織（P＜0.05），見表1和圖1。

圖1 免疫組化染色圖

表1 大腸癌和癌旁組織VEGF、TGF-β1表達比較n（%）

2.2 VEGF、TGF-β1表達與臨床病理特征關(guān)系 腫瘤大?。?cm、TNM 分期Ⅲ期、中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者VEGF、TGF-β1表達陽性率明顯高于腫瘤大小≤3cm、TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期、高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P＜0.05）。見表2。

表2 VEGF、TGF-β1表達與臨床病理特征關(guān)系n（%）

2.3 相關(guān)性分析 大腸癌組織VEGF與TGF-β1表達呈正相關(guān)（rs=0.783，P＜0.05），見表3。

表3 相關(guān)性分析

2.4 是否復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者VEGF、TGF-β1表達比較所有患者隨訪3年，其中復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者29例，未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者53例，復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移與未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者一般臨床資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表4。復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者VEGF、TGF-β1表達陽性率明顯高于未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者（P＜0.05），見表5。

表4 復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移與未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者一般臨床資料比較n（%）

表5 復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移與未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者VEGF、TGF-β1表達比較n（%）

3 討論

新生血管是腫瘤發(fā)生、浸潤、轉(zhuǎn)移的重要基礎(chǔ)，而腫瘤血管生成是由多因子共同作用的結(jié)果，包括降解血管細胞外基質(zhì)，促進血管內(nèi)皮細胞遷移、分裂，并增強毛細血管分化能力等,而VEGF 是這些生理過程的重要促進因子[4,5]。既往研究顯示，如腫瘤無新生血管,其瘤體將因無法獲得足夠的血供及營養(yǎng)而停滯于2mm 大小，并進入休眠狀態(tài)，臨床表現(xiàn)為原位癌[6]。隨著腫瘤進展，瘤體直徑超過2mm，此時瘤體組織將合成VEGF，并增強血管通透性，促進血管新生，為腫瘤細胞生長提供豐富營養(yǎng)，并轉(zhuǎn)運代謝物，同時還可促使瘤體細胞借助體液循環(huán)系統(tǒng)轉(zhuǎn)移至其他區(qū)域[7]。本組研究中，大腸癌組織VEGF表達陽性率明顯高于癌旁組織，表明VEGF 是大腸癌的重要參與因子。大量研究顯示，VEGF 可通過刺激血管新生，增強毛細血管通透性，誘使基質(zhì)降解等方式來增強腫瘤增殖、浸潤以及轉(zhuǎn)移[8,9]。本組研究中，腫瘤大?。?cm、TNM 分期Ⅲ期、中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者VEGF表達陽性率明顯高于腫瘤大小≤3cm、TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期、高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，表明VEGF 高表達可增強腫瘤血管通透性，并增強腫瘤細胞轉(zhuǎn)移能力，增強疾病浸潤及轉(zhuǎn)移。

TGF-β1 是TGF-β 家族成員之一，與受體TGF-βP 相互結(jié)合才能發(fā)揮相關(guān)細胞學(xué)功能[10]。TGF-β1 是TGF-β 信號通路的重要節(jié)點，并因此影響細胞增殖、分化、遷移以及凋亡。Smads蛋白是TGF-β 家族的特異性下游靶向因子，是TGF-β 生物學(xué)信號的重要轉(zhuǎn)導(dǎo)因子[11]。TGF-β 信號通路起始于TGF-β與其受體的相互結(jié)合并激活，并誘導(dǎo)TGF-β1蛋白激酶活化,與下游的Smad2、Smad3 轉(zhuǎn)錄因子作用并生成復(fù)合物進入細胞核內(nèi)DNA 結(jié)合區(qū)，調(diào)節(jié)靶基因表達[12]。TGF-β/Smads 信號系統(tǒng)的任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)異常均可能導(dǎo)致腫瘤發(fā)生[13]。本組研究中，大腸癌組織TGF-β1表達陽性率明顯高于癌旁組織，表明異常表達的TGF-β1與大腸癌密切相關(guān)。在腫瘤早期，TGF-β1 可通過調(diào)控細胞周期來促其凋亡[14]。但隨著TGF-β1表達水平的增強，其對腫瘤的發(fā)展將起到促進作用，方式主要為：腫瘤細胞合成的TGF-β1 可誘導(dǎo)阻斷免疫細胞增殖分化；TGF-β1 還可激活不依賴Smad的Rsa/MAPK通路，JNK通路等，并促進腫瘤發(fā)展[15]；TGFβ1 還可通過誘導(dǎo)細胞黏附，促進細胞外基質(zhì)合成，刺激血管生長因子表達等方式來促進腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移[16]。本組研究中，腫瘤大?。?cm、TNM 分期Ⅲ期、中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者TGF-β1表達陽性率明顯高于腫瘤大小≤3cm、TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期、高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，表明TGF-β1 或可用于判斷大腸癌患者分期、分化以及淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移。

相關(guān)性研究顯示，大腸癌組織VEGF與TGFβ1表達呈正相關(guān)，表明VEGF與TGF-β1 間可能存在協(xié)同效應(yīng)，共同參與并促進了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。本研究還發(fā)現(xiàn)，復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者VEGF、TGF-β1表達陽性率分別為96.51%和93.10%，明顯高于未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者，這也表明VEGF與TGF-β1 是大腸癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的重要參與因子，對大腸癌術(shù)后臨床預(yù)后判斷具有重要參考價值。

綜上所述，VEGF、TGF-β1 是大腸癌的重要參與因子，其在大腸癌組織表達上調(diào)，且與腫瘤臨床病理特征及術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，對大腸癌病情發(fā)展、預(yù)后評價及指導(dǎo)臨床基因治療均具有重要價值。