HPSE2通過抑制NF-κB、Wnt/β-catenin信號通路調(diào)控胃癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的機(jī)制

陳冰冰,何 璠,鄭偉偉

陳冰冰,何璠,鄭偉偉,浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬溫州中醫(yī)院消化科 浙江省溫州市 325000

0 引言

胃癌是臨床上常見的惡性腫瘤之一,在世界范圍內(nèi),其死亡率占所有惡性腫瘤死亡率的第二位,僅次于肺癌.隨著我國經(jīng)濟(jì)及醫(yī)療水平的不斷提高,胃癌的早期診斷水平不斷提高,對胃癌的防控治療取得了重大進(jìn)步,但患者的死亡率仍居高不下,預(yù)后較差,嚴(yán)重影響患者生命[1].目前,治療胃癌的主要手段為手術(shù)切除聯(lián)合術(shù)后放化療,但由于胃癌早期發(fā)病隱匿,不能得到患者重視,易造成誤診漏診,從而錯失最佳治療時機(jī),加大治療難度.因此,探究胃癌的發(fā)病機(jī)制,分析其關(guān)鍵調(diào)控分子,早期診斷,及時治療對降低患者的死亡率,改善患者預(yù)后具有重要作用.乙酰肝素酶(heparanase,HPSE)是一種內(nèi)源性糖苷內(nèi)切酶,是人體中唯一能夠特異性剪切硫酸乙酰肝素蛋白多糖的酶.乙酰肝素酶2(heparanase,HPSE2)屬于HPSE的同源物,其不具有肝素酶的活性,但其能夠競爭性結(jié)合硫酸乙酰肝素,從而對肝素酶活性起到一定的抑制作用[2].有學(xué)者在乳腺癌的研究中發(fā)現(xiàn),HPSE2能夠抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲遷移,促進(jìn)新生血管生成[3].但關(guān)于其在胃癌中的相關(guān)作用及其作用機(jī)制尚不明確.本研究旨在探討HPSE2調(diào)控胃癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的作用機(jī)制.

1 材料和方法

1.1 材料 實(shí)驗(yàn)材料:收集2019-09/2021-04期間在本院進(jìn)行手術(shù)切除治療的74例胃癌患者的胃癌組織及癌旁正常組織.

人胃癌細(xì)胞系MKN-28[賽百慷(上海)生物技術(shù)股份有限公司].

主要儀器及試劑:實(shí)時定量熒光PCR儀(濟(jì)南光耀醫(yī)療設(shè)備有限公司,型號:TL-988-IV);低溫高速離心機(jī)(華威科創(chuàng)(武漢)科技有限公司,型號:SIGMA 3-18K);超低溫冰箱(浙江捷盛低溫設(shè)備有限公司,型號:DW-86W300);DMEM培養(yǎng)基(黑龍江久豐生物工程有限公司);胎牛血清(上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司);PBS緩沖液(重慶賽諾生物藥業(yè)股份有限公司);流式細(xì)胞儀(美國貝克曼庫爾特有限公司,型號:CytoFLEX);生物顯微鏡(上海精密儀器儀表公司,型號:XSP-8C);兔抗人HPSE2多克隆抗體(武漢淼靈生物科技有限公司).

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)方法:采用免疫組化法測定胃癌組織及癌旁正常組織HPSE2表達(dá)水平.取胃癌組織及癌旁正常組織,常規(guī)制作石蠟切片,烘烤、脫蠟水化、抗原修復(fù)、封閉內(nèi)源性過氧化酶、破膜,配制HPSE2一抗稀釋液,每片組織切片依次添加相應(yīng)的一抗稀釋液,4 ℃孵育過夜.取出組織切片,加入PBS溶液清洗,每片組織依次添加辣根過氧化物酶二抗,37 ℃孵育60 min,加入PBS溶液清洗,DAB顯色、蘇木素復(fù)染、脫水透明、樹脂封片,顯微鏡下觀察.

細(xì)胞培養(yǎng):將人胃癌細(xì)胞系MKN-28細(xì)胞放入DMEM培養(yǎng)基中,加入10%胎牛血清、100 U/mL青霉素及100 μg/mL鏈霉素雙抗溶液,在37 ℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng).取生長狀態(tài)良好的細(xì)胞

1.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染:在Zheng細(xì)胞中加入0.25%胰蛋白酶制成細(xì)胞懸液,將對數(shù)生長期的 MKN-28細(xì)胞懸液分別以10000個/孔接種于6孔板中,每組設(shè)置6個復(fù)孔.在MKN-28細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染HPSE2過表達(dá)質(zhì)粒及空白質(zhì)粒,獲得HPSE2過表達(dá)組及對照組.

采用實(shí)時熒光定量PCR法及蛋白質(zhì)印跡法測定對照組及HPSE2過表達(dá)組細(xì)胞中HPSE2表達(dá)水平.實(shí)時熒光定量PCR法:將MKN-28細(xì)胞接種至6孔板加入裂解液充分裂解,在室溫下靜置,取細(xì)胞懸液至1.5 mL EP管中.加入適量氯仿,顛倒混勻,靜置,離心,取上清液,加入500 μL異丙醇,靜置,離心,取下層沉淀,即為RNA.用75%乙醇洗滌沉淀,離心,去除上清液,加入15 μL DEPC水溶解RNA,測定RNA濃度與純度,對RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)反轉(zhuǎn)錄cDNA,并進(jìn)行PCR擴(kuò)增,以2-△△Ct計算目的基因相對表達(dá)量.

1.2.3 蛋白質(zhì)印跡法:收集各組對數(shù)生長的MKN-28細(xì)胞,采用加入含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑PMSF的RIPA裂解液,充分裂解細(xì)胞,根據(jù)BCA試劑盒配制工作液進(jìn)行蛋白質(zhì)定量.將30 μg蛋白與4×上樣緩沖液混合離心取上清液,經(jīng)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后轉(zhuǎn)移至PVDF膜,10 mL 5%的脫脂奶粉室溫封閉2 h或4 ℃孵育過夜,加入HPSE2一抗,4 ℃冰箱孵育過夜,TBST洗膜,加入相應(yīng)的二抗室溫孵育1-2 h,TBST洗膜,ECL化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行顯色.

1.2.4 細(xì)胞增殖能力:采用MTT法測定各組細(xì)胞增殖能力變化.將生長良好且處于生長對數(shù)期的MKN-28細(xì)胞制成細(xì)胞懸液,以10000個/孔接種于96孔板中,每孔中加入濃度為5 mg/mL的MTT溶液20 μL,繼續(xù)培養(yǎng)4 h,采用酶聯(lián)免疫檢測儀測定各組細(xì)胞在520 nm處的吸光度值.

1.2.5 細(xì)胞凋亡:收集各組細(xì)胞約1×105個,離心、清洗,去除上清液,避光孵育15 min左右,加入0.5 mL Annexin V,采用流式細(xì)胞儀測定各組細(xì)胞凋亡情況.采用蛋白質(zhì)印跡法測定各組細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax、Suivivin表達(dá)情況.

1.2.6 細(xì)胞侵襲能力:采用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)測定各組細(xì)胞侵襲能力.將提前預(yù)冷的無胎牛血清的Matrigel膠按照合適比例進(jìn)行稀釋,取基質(zhì)膠200 μL加入小室上室,下室中加入400 μL含10%胎牛血清的完全培養(yǎng)基,取轉(zhuǎn)染組及對照組細(xì)胞以10000個/孔接種至小室上室中,放于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,使用結(jié)晶紫染液染色,使用顯微鏡進(jìn)行觀察.

1.2.7 遷移能力:采用Transwell遷移實(shí)驗(yàn)比較各組細(xì)胞遷移能力的變化.取無血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞以適當(dāng)密度接種至小室上室,下室中加入含10% 400 μL含10%胎牛血清的完全培養(yǎng)基,放于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,使用結(jié)晶紫染液染色,使用顯微鏡進(jìn)行觀察.

采用蛋白質(zhì)印跡法測定上皮型鈣黏蛋白(epithelial cadherin,E-cadherin)、神經(jīng)型鈣黏蛋白(neural cadherin,N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、磷酸化核轉(zhuǎn)錄因子-κB p65(nuclear transcription factor κB p65,p-NF-κB p65)、β-catenin表達(dá)水平.

1.2.8 觀察指標(biāo):采用免疫組化法測定胃癌組織及癌旁正常組織HPSE2表達(dá)水平.

采用實(shí)時熒光定量PCR法及蛋白質(zhì)印跡法測定對照組及HPSE2過表達(dá)組細(xì)胞中HPSE2表達(dá)水平.

采用MTT法測定各組細(xì)胞增殖能力變化.

采用流式細(xì)胞儀測定各組細(xì)胞凋亡情況.采用蛋白質(zhì)印跡法測定各組細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax、Suivivin表達(dá)情況.

采用Transwell遷移實(shí)驗(yàn)比較各組細(xì)胞遷移能力的變化.

采用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)測定各組細(xì)胞侵襲能力變化.

采用蛋白質(zhì)印跡法測定E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、TGF-β1、p-NF-κB p65、β-catenin表達(dá)水平.

統(tǒng)計學(xué)處理本組研究中計量資料比較均符合正態(tài)分布,均采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),以(mean±SD)表示.本組研究中采用SPSS 24.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)分析,以統(tǒng)計學(xué)結(jié)果P<0.05視為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義.

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織及癌旁正常組織中HPSE2表達(dá)水平 與癌旁正常組織對比,胃癌組織中HPSE2表達(dá)水平明顯降低(P<0.01).見表1.

表1 胃癌組織及癌旁正常組織中乙酰肝素酶2表達(dá)水平(mean±SD)

2.2 各組細(xì)胞中HPSE2表達(dá)水平 與對照組比較,HPSE2過表達(dá)組HPSE2表達(dá)水平明顯升高(P<0.01).見圖1,表2.

圖1 各組細(xì)胞中乙酰肝素酶表達(dá)水平.HPSE:乙酰肝素酶.

表2 各組細(xì)胞乙酰肝素酶2蛋白表達(dá)水平(mean±SD)

2.3 各組細(xì)胞增殖能力比較 兩組1 d時細(xì)胞增殖能力無明顯差異(P>0.05);與2 d與對照組比較,HPSE2過表達(dá)組細(xì)胞增殖能力明顯降低(P<0.05或P<0.01).見表3,圖2.

圖2 各組細(xì)胞增殖能力比較.

表3 各組細(xì)胞增殖能力比較(mean±SD)

2.4 各組細(xì)胞凋亡能力比較 與對照組比較,HPSE2過表達(dá)組細(xì)胞凋亡率及Bax表達(dá)水平均明顯升高,Bax、Suivivin表達(dá)水平均明顯降低(P<0.01).見表4,表5,圖3.

圖3 各組細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平.

表4 各組細(xì)胞凋亡能力比較(mean±SD)

表5 各組細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白比較(mean±SD)

2.5 各組細(xì)胞遷移能力比較 與對照組比較,HPSE2過表達(dá)組細(xì)胞遷移能力明顯降低(P<0.01).見圖4,表6.

圖4 各組細(xì)胞遷移能力比較.A:對照組;B:HPSE2過表達(dá)組.

表6 各組細(xì)胞遷移能力比較(mean±SD)

2.6 各組細(xì)胞侵襲能力比較 與對照組比較,HPSE2過表達(dá)組細(xì)胞侵襲能力明顯降低(P<0.01).見圖5,表7.

圖5 各組細(xì)胞侵襲能力比較.A:對照組;B:HPSE2過表達(dá)組.

表7 各組細(xì)胞侵襲能力比較(mean±SD)

2.7 各組細(xì)胞E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、TGF-β1、p-NF-κB p65、β-catenin表達(dá)水平對比 與對照組比較,HPSE2過表達(dá)組N-cadherin、Vimentin、TGF-β1、p-NF-κB p65、β-catenin表達(dá)水平均明顯降低,E-cadherin表達(dá)水平明顯升高(P<0.01).見圖6,表8.

圖6 各組細(xì)胞上皮型鈣黏蛋白、神經(jīng)型鈣黏蛋白、波形蛋白、轉(zhuǎn)化生長因子-β1、磷酸化核轉(zhuǎn)錄因子-κB p65、β-catenin表達(dá)水平.E-cadherin:上皮型鈣黏蛋白;N-cadherin:神經(jīng)型鈣黏蛋白;Vimentin:波形蛋白;TGF-β1:轉(zhuǎn)化生長因子-β1;p-NF-κB p65:磷酸化核轉(zhuǎn)錄因子-κB p65.

表8 各組細(xì)胞上皮型鈣黏蛋白、神經(jīng)型鈣黏蛋白、波形蛋白、轉(zhuǎn)化生長因子-β1、磷酸化核轉(zhuǎn)錄因子-κB p65、β-catenin表達(dá)水平對比(mean±SD)

3 討論

胃癌是一種發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜的疾病,研究發(fā)現(xiàn),其發(fā)病可能與吸煙、飲酒、幽門螺旋桿菌感染、胃潰瘍、精神心理狀態(tài)、飲食習(xí)慣等多種因素綜合作用的結(jié)果.其發(fā)病率較高,且由于腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,使患者的死亡率明顯升高[4].因此,抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移可以作為胃癌治療研究中的重要環(huán)節(jié).HPSE2作為HPSE的同源基因,與HPSE有著相反的生物學(xué)特性,其能夠抑制肝素酶活性,抑制多種腫瘤的生長.有研究發(fā)現(xiàn),HPSE2在前列腺、乳腺、卵巢等多種組織中均有表達(dá).Zhang等[5]在乳腺癌的研究中發(fā)現(xiàn),HPSE2在乳腺癌組織中的表達(dá)水平明顯降低.Zheng等[6]在膀胱癌的研究中發(fā)現(xiàn),HPSE2在膀胱癌細(xì)胞中的表達(dá)水平明顯降低,而上調(diào)HPSE2的表達(dá)后,癌細(xì)胞增殖及遷移能力均明顯降低.HPSE2可能在抑制腫瘤血管生成、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞分化等方面扮演著重要角色.本研究主要對HPSE2在胃癌細(xì)胞中的相關(guān)作用及機(jī)制進(jìn)行了探討分析.

細(xì)胞進(jìn)入無限增殖狀態(tài)為腫瘤發(fā)生的標(biāo)志,而相關(guān)研究表明,腫瘤不僅一種細(xì)胞增殖及分化異常的疾病,也是一種細(xì)胞凋亡異常的疾病[7].細(xì)胞凋亡減少、生存期延長,細(xì)胞大量堆,其可能是胃癌發(fā)生、發(fā)展的基礎(chǔ).本研究中通過測定胃癌MKN-28細(xì)胞增殖及凋亡能力的變化,發(fā)現(xiàn),HPSE2過表達(dá)能夠明顯抑制胃癌細(xì)胞增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡.Bax是一種促凋亡基因,能夠拮抗Bcl-2蛋白抑制凋亡的作用.有研究發(fā)現(xiàn)[8],當(dāng)細(xì)胞內(nèi)Bax表達(dá)水平明顯升高時,凋亡細(xì)胞明顯增多.Bcl-2是一種原癌基因,能夠抑制有多種細(xì)胞毒因素引起的細(xì)胞死亡.有研究發(fā)現(xiàn)[9],Bcl-2能夠增強(qiáng)細(xì)胞對大多數(shù)DNA損傷因子的抵抗性,抑制大多數(shù)化療藥物引起的靶細(xì)胞凋亡.Suivivin屬于凋亡抑制蛋白家族成員之一,其在多種腫瘤組織中呈高表達(dá).有研究發(fā)現(xiàn)[10],Suivivin表達(dá)水平與胃癌嚴(yán)重程度明顯相關(guān),其對判斷患者預(yù)后具有重要的指導(dǎo)作用.Suivivin可以作為判斷患者預(yù)后及復(fù)發(fā)的重要指標(biāo).

侵襲與遷移是腫瘤的重要特征,也是影響患者治療的重要原因.研究證實(shí),上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial mesenchymal transition,EMT)在腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移過程中扮演著重要角色[11].E-cadherin作為TGF-β1的下游蛋白,是EMT的一種關(guān)鍵分子,能夠維持細(xì)胞間連接的穩(wěn)定性,維持細(xì)胞骨架與連接支架的穩(wěn)定.E-cadherin表達(dá)水平的降低即為EMT發(fā)生的標(biāo)志[12].Vimentin是一種中間絲纖維蛋白,研究發(fā)現(xiàn),其表達(dá)水平與腫瘤分化程度及侵襲能力呈明顯負(fù)相關(guān)[13].本研究結(jié)果表明,上調(diào)HPSE2表達(dá)能夠明顯抑制胃癌細(xì)胞發(fā)生EMT現(xiàn)象,抑制細(xì)胞侵襲及遷移能力.

眾多研究表明,在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中多條信號通路參與其中,調(diào)控細(xì)胞的活化增殖、細(xì)胞因子釋放、細(xì)胞外基質(zhì)的合成與降解[14,15].其中NF-κB是一種核轉(zhuǎn)錄蛋白,能夠協(xié)調(diào)多種基因的表達(dá),影響機(jī)體內(nèi)的細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡及腫瘤生長等多種生物學(xué)功能[16].據(jù)相關(guān)報道,p65與p50的二聚體為NF-κB最重要的修飾方式之一,而p65的磷酸化為NF-κB最重要的修飾方式之一[17].Wnt/β-catenin信號通路是一種具有高度保守性的信號調(diào)節(jié)系統(tǒng),存在于多種哺乳動物中,參與細(xì)胞的生長、分化及遷移等.β-catenin為Wnt/β-catenin信號通路經(jīng)典通路的關(guān)鍵效應(yīng)分子,正常情況下,β-catenin主要存在于細(xì)胞膜處,在細(xì)胞骨架與鈣黏蛋白的結(jié)合中起連接作用,而當(dāng)Wnt/β-catenin信號通路被激活后,β-catenin表達(dá)明顯增加,進(jìn)而影響細(xì)胞的增殖、侵襲及遷移等生物學(xué)過程[18].本研究結(jié)果表明,上調(diào)HPSE2的表達(dá)能夠抑制NF-κB及Wnt/β-catenin信號通路的激活.

4 結(jié)論

綜上所述,上調(diào)HPSE2表達(dá)能夠明顯抑制細(xì)胞增殖、侵襲及遷移,抑制細(xì)胞發(fā)生EMT,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,其可能是通過抑制NF-κB及Wnt/β-catenin信號通路的激活實(shí)現(xiàn).

文章亮點(diǎn)

實(shí)驗(yàn)背景

隨著醫(yī)醫(yī)療水平的提高,胃癌的早期診斷及治療取得了明顯成效,但患者的死亡率仍居高不下,且預(yù)后較差,侵襲與轉(zhuǎn)移是影響患者預(yù)后的重要因素.因此,探究胃癌的發(fā)病機(jī)制,抑制胃癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移,改善患者預(yù)后意義重大.乙酰肝素酶(heparanase,HPSE)是一種內(nèi)源性糖苷內(nèi)切酶,有研究發(fā)現(xiàn),期在胃癌組織中的表達(dá)水平明顯升高.但關(guān)于乙酰肝素酶2 (heparanase,HPSE2)在胃癌中的相關(guān)作用及其作用機(jī)制尚不明確.本研究旨在HPSE2在胃癌中的相關(guān)作用及其作用機(jī)制.

實(shí)驗(yàn)動機(jī)

分析HPSE2通過抑制核轉(zhuǎn)錄因子κB (NF-κB)、wnt基因/β-連環(huán)蛋白(Wnt/β-catenin)信號通路調(diào)控胃癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的機(jī)制.

實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)

為明確HPSE2在胃癌惡性進(jìn)程中的作用,我們通過免疫組化法測定胃癌組織及癌旁正常組織HPSE2表達(dá)水平,探討期潛在的臨床價值,后通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)染獲得過表達(dá)HPSE2的胃癌細(xì)胞株,分析HPSE2表達(dá)水平對胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,并進(jìn)行下游基因與分子通路的篩選驗(yàn)證,進(jìn)一步揭示HPSE2發(fā)揮腫瘤調(diào)控作用的分子機(jī)制,為探索HPSE2可否作為胃癌治療的新靶點(diǎn)提供初步理論基礎(chǔ).

實(shí)驗(yàn)方法

收集2019-09/2021-04期間在本院進(jìn)行手術(shù)切除治療的74例胃癌患者的胃癌組織及癌旁正常組織,測定HPSE2的表達(dá)水平.將人胃癌細(xì)胞系MKN-28細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)并轉(zhuǎn)染,獲得HPSE2過表達(dá)組及對照組.測定各組細(xì)胞增殖能力、細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞侵襲及遷移能力,并測定細(xì)胞中HPSE2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、TGF-β1、p-NF-κB p65、β-catenin表達(dá)水平變化.

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

與癌旁正常組織對比,胃癌組織中HPSE2表達(dá)水平明顯降低(P<0.01).與對照組比較,HPSE2過表達(dá)組HPSE2表達(dá)水平明顯升高(P<0.01).兩組1 d時細(xì)胞增殖能力無明顯差異(P>0.05);與2 d與對照組比較,HPSE2過表達(dá)組細(xì)胞增殖能力明顯降低(P<0.05或P<0.01).與對照組比較,HPSE2過表達(dá)組細(xì)胞凋亡率及Bax、E-cadherin表達(dá)水平均明顯升高,細(xì)胞侵襲、遷移能力及Bax、Suivivin、N-cadherin、Vimentin、TGF-β1、p-NF-κB p65、βcatenin表達(dá)水平均明顯降低(P<0.01).

實(shí)驗(yàn)結(jié)論

上調(diào)HPSE2表達(dá)能夠明顯抑制細(xì)胞增殖、侵襲及遷移,抑制細(xì)胞發(fā)生EMT,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,其可能是通過抑制NF-κB及Wnt/β-catenin信號通路的激活實(shí)現(xiàn).

展望前景

本次研究中,我們發(fā)現(xiàn),上調(diào)HPSE2表達(dá)能夠明顯抑制細(xì)胞增殖能力(MTT實(shí)驗(yàn)證明)、侵襲能力(Transwell實(shí)驗(yàn)證明)及遷移能力(Transwell實(shí)驗(yàn)證明),促進(jìn)細(xì)胞凋亡能力(流式細(xì)胞儀及蛋白質(zhì)印記法測定證明).我們進(jìn)一步分析了這種現(xiàn)象發(fā)生的原因,發(fā)現(xiàn),HPSE2處理后的MKN-28細(xì)胞中p-NF-κB p65、β-catenin表達(dá)水平均明顯下降.表明HPSE2在抗腫瘤,尤其是抑制胃癌細(xì)胞增殖、侵襲、遷移房間具有一定作用,為今后胃癌的臨床治療用藥的選擇提供了幫助.接下來本實(shí)驗(yàn)將繼續(xù)挖掘HPSE2對胃癌細(xì)胞中各個通路的影響及其機(jī)制,并將其應(yīng)用至在體實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭凶C明,從而能夠更全面的探索HPSE2對胃癌細(xì)胞基因表達(dá)差異的影響.