腺樣體肥大伴變應(yīng)性鼻炎患兒致敏原譜及腺樣體組織中IL-25 IL-32 EOS表達(dá)分析及診斷價值

韓江南，徐艷紅，姜 霞，石向陽，張瑞林

(1.四川雅安市人民醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，四川 雅安 625000 2.四川省成都市第二人民醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，四川 成都 610017)

變應(yīng)性鼻炎是一種變態(tài)反應(yīng)性疾病，好發(fā)于兒童，在臨床上又被稱為過敏性鼻炎。雖然應(yīng)變原不同，但其典型臨床表現(xiàn)基本相似，即為陣發(fā)性噴嚏、大量清涕等，且具有季節(jié)性發(fā)作與常年性發(fā)作等特點[1]?；诖耍鞔_致敏原尤為重要，對臨床治療及預(yù)防具有重要意義。而腺樣體肥大是一種經(jīng)反復(fù)炎癥刺激而發(fā)生的病理性疾病，隨著增生及肥大進(jìn)展的改變，可引起分泌性中耳炎、睡眠打鼾，以及呼吸暫停等臨床癥狀。經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，變應(yīng)性鼻炎患兒常伴有腺樣體肥大表現(xiàn)[2]。有研究指出，腺樣體肥大伴變應(yīng)性鼻炎患兒機(jī)體存在炎癥因子異常表達(dá)情況，譬如IL-25、IL-32。也有研究表示，IL-25、IL-32參與了腺樣體肥大伴變應(yīng)性鼻炎發(fā)生、發(fā)展。但臨床上對于上述指標(biāo)與腺樣體肥大伴變應(yīng)性鼻炎的關(guān)系尚未明確，尚不清楚其作用機(jī)制，故本次選取96例變應(yīng)性鼻炎患兒與48例健康體檢者的臨床資料進(jìn)行回顧性分析，旨在分析腺樣體肥大伴變應(yīng)性鼻炎患兒致敏原譜及腺樣體組織中IL-25、IL-32、EOS表達(dá)及診斷價值，現(xiàn)將其報告如下：

1 資料與方法

1.1一般資料:回顧性分析2017年5月至2020年5月診治96例變應(yīng)性鼻炎患兒與48例健康體檢者的臨床資料，按照1∶1個體匹配原則選擇腺樣體肥大伴變應(yīng)性鼻炎患者48例為A組與單純變應(yīng)性鼻炎患者48例為B組。診斷標(biāo)準(zhǔn)：符合“變應(yīng)性鼻炎診斷和治療指南”[3]相關(guān)于變應(yīng)性鼻炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)血清過敏原IgE檢測，其濃度>0.35UL/mL。納入標(biāo)準(zhǔn)：①臨床資料齊全；②總病程≥4周；③伴有鼻癢、打噴嚏、清水樣涕、鼻塞等臨床癥狀，其癥狀持續(xù)或累計1h以上；④無支氣管哮喘等疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有急慢性感染性鼻腔疾??；②伴有鼻竇炎等疾??；③伴有重要臟器功能障礙等疾病。變應(yīng)性鼻炎患兒中男性49例、女性47例，年齡范圍3～12歲，平均值(7.21±1.25)歲；48例健康體檢者中男性25例、女性23例；年齡范圍3～14歲，平均值(7.32±1.19)歲。兩組一般資料比較齊同(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法:回顧性分析96例變應(yīng)性鼻炎患兒與48例健康體檢者經(jīng)IL-25、IL-32及EOS檢測的資料。包括變應(yīng)性鼻炎患兒經(jīng)變應(yīng)原檢測的資料。操作步驟如下：①變應(yīng)原檢測：于空腹?fàn)顟B(tài)下抽取靜脈血3mL行血清特異性IgE檢測，采用德國Cl-BioSciTec GmbH免疫檢測儀，試劑盒為AllergyScreen Test Kit。并行吸入物篩查，如戶塵螨、春季花粉組合、夏秋季花粉組合等常見吸入性應(yīng)變原。已任何一項檢測結(jié)果≥0.35KU/L視為存在致敏原。②IL-25與IL-32檢測：取新鮮腺樣體組織標(biāo)本后采用4%多聚甲醛固定，常規(guī)脫水后，行石蠟包埋備用。將標(biāo)本制成石蠟切片，采用SP法對其進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，操作步驟按照說明書依次進(jìn)行。其中，陽性判定標(biāo)準(zhǔn)為細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)存在環(huán)狀沉淀的棕黃色/棕褐色顆粒狀物質(zhì)，陰性判定標(biāo)準(zhǔn)為無顯著特異性著色。在低倍鏡下觀察各玻片，計算陽性細(xì)胞個數(shù)在總細(xì)胞個數(shù)中所占百分比，且算出平均值。③EOS檢測：標(biāo)本制成石蠟切片后在顯微鏡下肉眼觀察經(jīng)蘇木精-伊紅染色后組織標(biāo)本中的EOS浸潤情況，譬如EOS是否呈圓形，細(xì)胞內(nèi)充分均勻排列粉紅色嗜酸顆粒，選取5個視野進(jìn)行計數(shù)，計算取平均值。

1.3觀察指標(biāo)

1.3.1分析變應(yīng)性鼻炎患兒的致敏原譜，譬如戶塵螨、春季花粉組合(榿木、榛屬、楊屬、榆屬、柳屬)、夏秋季花粉組合(葎草、艾蒿、豚草、車前草)、短豚草、霉菌組合(點青霉、牙枝霉、黑根霉、交鏈孢霉)、狗毛皮屑，以及雞蛋白、牛奶、魚蝦蟹所占比率。

1.3.2評估三組受檢人員的白介素-25(IL-25)、白介素-32(IL-32)、嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)。

1.3.3分析腺樣體肥大伴變應(yīng)性鼻炎患者的獨(dú)立影響因素，以及IL25、IL32與EOS相關(guān)性。

2 結(jié) 果

2.1致敏原譜分布:96例變應(yīng)性鼻炎患兒經(jīng)血清變應(yīng)原總IgE檢測，其陽性為94例(97.92%)；其中僅對一種變應(yīng)原過敏共42例(44.68%)，對2種以上變應(yīng)原過敏共52例(55.32%)。吸入性變應(yīng)原中以戶塵螨陽性率最高，以狗毛皮屑陽性率最低；食入性變應(yīng)原中以雞蛋白陽性率最高，以魚蟹蝦陽性率最低。詳見表1。

表1 92例患兒的致敏原譜分布

2.2IL-25、IL-32及EOS比較:A組與B組的IL-25、IL-32、EOS均高于對照組(P<0.05)；A組的IL-25、IL-32、EOS高于B組(P<0.05)。詳見表2。

表2 三組的IL-25 IL-32及EOS比較

2.3二分類Logistic回歸分析:以“組別”為因變量(賦值：1=A組，0=B組)，以“IL-25、IL-32、EOS”為自變量，納入Logistic回歸分析。經(jīng)二分類Logistic回歸分析顯示，IL-25、IL-32、EOS高表達(dá)是腺樣體肥大伴變應(yīng)性鼻炎患者的獨(dú)立影響因素(P<0.05)。詳見表3。

表3 腺樣體肥大伴變應(yīng)性鼻炎患者的二分類Logistic回歸分析

表4 IL-25 IL-32 EOS對腺樣體肥大伴變應(yīng)性鼻炎的診斷價值分析

2.4相關(guān)性分析:Pearson相關(guān)性分析顯示，IL-25與EOS呈正相關(guān)(r=0.742，P<0.05)；IL-32與EOS呈正相關(guān)(r=0.871，P<0.05)。散點圖見圖1、2。

圖1 IL-25與EOS的相關(guān)性

2.5ROC曲線分析:ROC曲線分析顯示，IL-25、IL-32、EOS、三項聯(lián)合預(yù)測腺樣體肥大伴變應(yīng)性鼻炎的AUC值分別為0.855、0.977、0.996、0.994(P<0.05)。詳見表4。ROC曲線見圖3。

圖2 IL-32與EOS的相關(guān)性

圖3 IL-25、IL-32、EOS及三項聯(lián)合的ROC曲線分析

3 討 論

變應(yīng)性鼻炎是指機(jī)體過敏原暴露后，在IgE介導(dǎo)作用下由多種細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)所參與的一種非感染性慢性疾病。按照其發(fā)病機(jī)制可分為兩個階段，一為致敏過程，是指初次接觸致病原產(chǎn)生IgE過程，即為致敏過程；二為激發(fā)階段，是指再次接觸過敏原，根據(jù)發(fā)作時間分為早發(fā)性與晚發(fā)性；前者是由肥大細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞脫顆粒釋放炎性介質(zhì)所引起；后者是由細(xì)胞因子引發(fā)炎性細(xì)胞浸潤的黏膜炎癥[4,5]。從上述作用機(jī)制可得出，細(xì)胞因子、炎性介質(zhì)等參與了變應(yīng)性鼻炎的發(fā)生及發(fā)展。在正常情況下，機(jī)體血清IgE含量極低，僅占血清免疫球蛋白總量的0.2%，而在變應(yīng)性鼻炎患者中，其血清IgE含量顯著上升，約是正常人1000-10000倍左右[6]?；诖耍瑱z測變應(yīng)性鼻炎患兒的血清IgE顯得尤為重要，且通過行吸入物篩查，明確致敏原。研究結(jié)果顯示，吸入性變應(yīng)原陽性率顯著高于食入性變應(yīng)原，由此說明，環(huán)境因素在變應(yīng)性鼻炎發(fā)病過程中占據(jù)重要位置，譬如戶塵螨、春季花粉組合、夏秋季花粉組合、短豚草、霉菌組合、狗毛皮屑等，均為該病的主要致敏原；其中，以戶塵螨占比最高。針對其致敏原，注意室內(nèi)衛(wèi)生，開窗通風(fēng)，對減少變應(yīng)原數(shù)量及減少變應(yīng)性鼻炎誘發(fā)因素具有重要意義。

經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，變應(yīng)性鼻炎患兒大多都伴有腺樣體肥大癥狀。而腺樣體肥大是由炎癥反復(fù)刺激所引起的一種病理性增生[7]。對于其發(fā)病病因，目前臨床上尚未全部闡明，僅認(rèn)為與微生物刺激、大氣污染等外來刺激具有一定相關(guān)性，通過使腺樣體表面上皮黏附生物膜，持續(xù)刺激腺樣體，促使其增生、肥大，最終發(fā)展為慢性炎癥[8]。眾多臨床研究顯示，多種炎性細(xì)胞因子，譬如IL-25、IL-32在腺樣體肥大伴變應(yīng)性鼻炎發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用[9]。其中，IL-25與IL-7具有同源性特征，主要是由Th2細(xì)胞所生產(chǎn)，通過促進(jìn)炎性因子分泌及增強(qiáng)Th2型免疫應(yīng)答，導(dǎo)致嗜酸性粒細(xì)胞浸潤。IL-32則是由T細(xì)胞所產(chǎn)生，是一種促炎性細(xì)胞因子，在宿主防御機(jī)制中發(fā)揮重要作用。在正常情況下，其含量極低，而在異常情況下，其水平上調(diào)[10]。研究結(jié)果顯示，A組與B組的IL-25、IL-32表達(dá)量均高于對照組，由此說明IL-25、IL-32參與了腺樣體肥大伴變應(yīng)性鼻炎的病理過程，且水平的升高，會促進(jìn)炎性因子分泌及增強(qiáng)Th2型免疫應(yīng)答，導(dǎo)致嗜酸性粒細(xì)胞浸潤，進(jìn)一步加劇過敏性疾病[11]。另外，A組的IL-25、IL-32的水平高于B組，經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)與腺樣體肥大具有一定相關(guān)性，即腺樣體增厚、肥大越明顯，腺樣體組織中的炎性細(xì)胞因子水平越高，而異常表達(dá)的炎性細(xì)胞因子會嚴(yán)重影響局部免疫，從而引發(fā)各種并發(fā)癥，從中說明IL-25、IL-32等炎性細(xì)胞因子可能參與腺樣體組織結(jié)構(gòu)的重塑[12]。另外，發(fā)現(xiàn)IL-25、IL-32與嗜酸性粒細(xì)胞浸潤，可起到互為促進(jìn)的作用[13]。在Pearson相關(guān)性分析可看到，IL-25、IL-32與EOS呈正相關(guān)；由此推測IL-25、IL-32通過誘導(dǎo)機(jī)體細(xì)胞形成大量促炎性因子，或直接促進(jìn)炎癥細(xì)胞的聚集及活化，形成了嗜酸性粒細(xì)胞與炎性細(xì)胞因子的惡性循環(huán)[14]。

綜上所述，IL-25、IL-32參與了腺樣體肥大伴變應(yīng)性鼻炎的發(fā)生及發(fā)展，可考慮將其作為診斷該病的生物學(xué)指標(biāo)，以期為臨床診治提供重要信息。