干擾素誘導(dǎo)蛋白16在兒童傳染性單核細(xì)胞增多癥中的應(yīng)用價(jià)值

虞莉莎， 楊慧潔， 殷雪瑞， 葛寒宇， 王慧燕， 鄭曉群

（溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院 育英兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江 溫州 325027）

傳染性單核細(xì)胞增多癥（infectious mononucleosis，IM）是好發(fā)于兒童及青少年的傳染性疾病，主要由EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）急性感染所致。該病早期具有多種臨床表現(xiàn)，無特異性，診斷難度較大[1]。干擾素誘導(dǎo)蛋白16（interferon-induced protein 16，IFI16）是新近發(fā)現(xiàn)的一種能識別細(xì)胞DNA的分子，是PYHIN家族成員之一，由1個(gè)PYHIN和2個(gè)HIN結(jié)構(gòu)域組成。IFI16不但能識別多種病毒的雙鏈DNA，也能被單鏈DNA活化[2]，在抗病毒感染過程中起著重要作用。有研究結(jié)果顯示，IFI16是參與EBV生命周期的獨(dú)特宿主因子蛋白[3]，但I(xiàn)FI16是否存在于IM患兒血清中尚未見報(bào)道。為此，本研究擬通過分析IM患兒血清IFI16水平及其與外周血淋巴細(xì)胞亞群等指標(biāo)之間的相關(guān)性，探討IFI16在IM中的應(yīng)用價(jià)值。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2018年11月—2019年9月在溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院確診并住院的IM患兒73例（IM組），其中男39例、女34例，年齡（4.7±2.5）歲。將發(fā)病3～7 d的IM患兒納入急性期組，發(fā)病15～30 d的IM患兒納入恢復(fù)期組[4]，有20例患兒的病程包括急性期和恢復(fù)期。另選取同期健康體檢兒童75名（正常對照組），其中男46名、女29名，年齡（5.1±2.3）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡≤14周歲；（2）無病毒或細(xì)菌感染；（3）無慢性病史。2個(gè)組之間性別和年齡差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。本研究經(jīng)溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患兒家屬均知情同意。

1.2 病例入選、排除標(biāo)準(zhǔn)

參照第7版《褚福棠實(shí)用兒科學(xué)》[5]中的IM診斷標(biāo)準(zhǔn)：（1）不規(guī)則發(fā)熱、扁桃體炎、咽峽炎、淋巴結(jié)腫大、肝腫大、脾腫大中3項(xiàng)以上陽性；（2）外周血異型淋巴細(xì)胞增多（≥10%）或總數(shù)>1.0×109/L；（3）EBV DNA陽性；（4）急性期EBV抗衣殼抗原IgM抗體陽性。具有（1）中的臨床表現(xiàn)，且實(shí)驗(yàn)室檢查符合（2）、（3）、（4）中2條及以上者即可診斷。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并細(xì)菌感染；（2）合并其他病毒感染；（3）有慢性疾病史。

1.3 方法

采集所有對象外周靜脈血，乙二胺四乙酸二鉀抗凝，采集后立即采用BC-5390血液分析儀（深圳邁瑞公司）及配套試劑檢測外周血白細(xì)胞（white blood cell，WBC）計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞百分比（the percentage of lymphocyte，LYMPH%），采用FACSCanto Ⅱ流式細(xì)胞儀（美國BD公司）及配套試劑檢測外周血淋巴細(xì)胞亞群。同時(shí)制作血涂片，采用CX41型光學(xué)顯微鏡（日本奧林巴斯公司）計(jì)數(shù)異型淋巴細(xì)胞，計(jì)算異型淋巴細(xì)胞百分比。另采集正常對照者及IM患兒急性期、恢復(fù)期的靜脈血，室溫下自然凝固，4 110×g離心10 min，分離血清，-70 ℃冰箱保存，統(tǒng)一檢測血清IFI16。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測血清IFI16，試劑購自生工生物工程（上海）股份有限公司，檢測儀器為Sunrise酶標(biāo)儀（瑞士TECAN公司）。嚴(yán)格按試劑說明書及標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 24.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。呈正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以±s表示，2個(gè)組之間比較采用獨(dú)立t檢驗(yàn)。呈非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以中位數(shù)（M）[四分位數(shù)（P25～P75）]表示，組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)，配對比較采用Wilcoxon符號秩檢驗(yàn)。各項(xiàng)指標(biāo)之間的相關(guān)性評價(jià)采用Pearson相關(guān)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 IM組與正常對照組各項(xiàng)指標(biāo)的比較

IM組WBC計(jì)數(shù)、LYMPH%、異型淋巴細(xì)胞百分比及血清IFI16水平均高于正常對照組（P<0.01）。見表1。

表1 IM組和正常對照組各項(xiàng)指標(biāo)的比較

2.2 IM患兒急性期與恢復(fù)期血清IFI16水平的比較

IM患兒急性期血清IFI16水平為105.8（46.0～137.0）ng/L，明顯低于恢復(fù)期[132.5（114.0～158.0）ng/L]（P<0.05）。有7例患兒恢復(fù)期血清IFI16水平低于急性期中位數(shù)水平，13例患兒恢復(fù)期高于急性期中位數(shù)水平。見圖1。

圖1 IM患兒急性期和恢復(fù)期血清IFI16水平的比較

2.3 IM患兒血清IFI16與其他指標(biāo)的相關(guān)性

Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，IM患兒血清IFI16與LYMPH%、CD4+T細(xì)胞百分比及CD4+/CD8+比值呈正相關(guān)（r值分別為0.24、0.27、0.29，P<0.05），與異型淋巴細(xì)胞百分比、CD3+T細(xì)胞百分比、CD8+T細(xì)胞百分比、CD19+B細(xì)胞百分比及CD16+CD56+自然殺傷細(xì)胞無相關(guān)性（r值分別為-0.13、-0.18、-0.19、0.12、0.09，P>0.05）。

3 討論

IM是一種主要由EBV感染引起的，通過口咽分泌物在兒童及青少年間進(jìn)行傳播的急性傳染病。IFI16是新近發(fā)現(xiàn)的一種DNA感受器。在病毒DNA的刺激下，細(xì)胞核中的IFI16被激活，并易位至細(xì)胞質(zhì)，與干擾素基因刺激蛋白（stimulator of interferon gene，STING）結(jié)合，傳遞信號，誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)[6-7]。當(dāng)皰疹病毒感染細(xì)胞時(shí)，IFI16可識別病毒DNA并引發(fā)一系列炎癥反應(yīng)[8]。IFI16水平的下降可導(dǎo)致EBV裂解期轉(zhuǎn)錄水平升高，基因拷貝數(shù)增加[3]。因此，IFI16在EBV感染過程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。本研究結(jié)果顯示，IM患兒血清IFI16明顯升高（P<0.01），且急性期低于恢復(fù)期（P<0.05）。由此可見，IFI16可能參與了IM的發(fā)病過程。

IFI16作為真核細(xì)胞中最重要的固有免疫傳感器之一，在宿主抗DNA病毒免疫方面有著重要的作用。細(xì)胞被不同的病毒感染以及不同的IFI16亞細(xì)胞定位均會(huì)引起不同的免疫反應(yīng)。有研究結(jié)果顯示，IFI16能夠識別皰疹病毒DNA，但皰疹病毒表達(dá)的病毒蛋白pUL83可以與IFI16的吡啶結(jié)構(gòu)域結(jié)合，從而阻止IFI16寡聚和隨后的免疫信號傳導(dǎo)，逃避宿主免疫[9]。為了逃避宿主免疫，EBV能產(chǎn)生某些在功能或結(jié)構(gòu)上可以模擬細(xì)胞因子或細(xì)胞因子受體的蛋白，干擾細(xì)胞因子或其受體的正常功能，從而影響細(xì)胞免疫[10]。本研究結(jié)果顯示，IM患兒血清IFI16水平與LYMPH%、CD4+T細(xì)胞百分比及CD4+/CD8+比值呈正相關(guān)（r值分別為0.24、0.27、0.29，P<0.05），提示細(xì)胞免疫應(yīng)答參與了IM的發(fā)病過程。

本研究結(jié)果還顯示，有7例患兒恢復(fù)期IFI16水平低于急性期中位數(shù)水平，13例患兒恢復(fù)期IFI16水平高于急性期中位數(shù)水平。這可能與這些患兒存在肝功能損傷或因個(gè)體差異造成恢復(fù)時(shí)間不同有關(guān)。后續(xù)將擴(kuò)大樣本量，并觀察更長時(shí)間，以進(jìn)一步分析IFI16在IM中的作用。

綜上所述，血清IFI16在IM的輔助診斷和預(yù)后判斷中均有一定的價(jià)值，或可作為IM輔助診斷和預(yù)后判斷的指標(biāo)。