• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    QuEChERS-UPLC-MS/MS測定果蔬中18 種琥珀酸脫氫酶抑制劑類殺菌劑

    2021-09-28 03:27:30彭青枝黃宗騫
    食品科學 2021年18期
    關鍵詞:酰胺殺菌劑果蔬

    龔 蕾,黃 徽,韓 智,江 豐,彭青枝*,黃宗騫,王 亨

    (湖北省食品質量安全監(jiān)督檢驗研究院,湖北省食品質量安全檢測工程技術研究中心,湖北 武漢 430070)

    琥珀酸脫氫酶抑制劑(succinate dehydrogenase inhibitors,SDHIs)是一類通過抑制病原菌琥珀酸脫氫酶活性,從而干擾其呼吸作用的新型殺菌劑[1],是近年發(fā)展很快且應用前景最廣的一類新型農藥[2],包括麥銹靈、氟酰胺、滅銹胺、甲呋酰胺、萎銹靈、氧化萎銹靈、啶酰菌胺、噻呋酰胺、呋吡菌胺、吡噻菌胺以及近2 a新研發(fā)的氟吡菌酰胺、聯(lián)苯吡菌胺、吡唑萘菌胺、氟唑環(huán)菌胺和氟唑菌苯胺等[3]。目前,該類殺菌劑主要應用于蔬菜、水果、糧食等經(jīng)濟作物的殺菌和防霉[4]。雖然該類殺菌劑毒性較低,但因其使用日益廣泛,SDHIs殺菌劑及代謝物殘留對農產(chǎn)品質量安全造成嚴重影響。美國、日本和韓國規(guī)定小麥中萎銹靈的最大殘留限量(maximum residue limit,MRL)值均為0.2 mg/kg,中國、國際食品法典委員會(codex alimentarius commission,CAC)和歐盟等均未制定萎銹靈在小麥中的MRL標準[5]。吡噻菌胺、氟唑菌酰胺、氟吡菌酰胺、啶酰菌胺和吡唑萘菌胺的MRLs已經(jīng)確定,蘋果MRL為10 mg/kg,草莓為10 mg/kg,番茄為3 mg/kg,菠菜為60 mg/kg[6-8]。歐盟規(guī)定啶酰菌胺、吡噻菌胺、吡唑萘菌胺、氟唑菌酰胺在西紅柿中的限量為3 mg/kg[9],我國規(guī)定啶酰菌胺在草莓和蘋果中的限量分別為3 mg/kg和2 mg/kg,新版GB 2763—2019《食品中農藥最大殘留限量》增加了吡唑萘菌胺、吡噻菌胺、氟唑環(huán)菌胺、氟唑菌酰胺和苯并烯氟菌唑在大麥、小麥、黃瓜、香蕉、結球甘藍、畜禽肉等食品中的臨時限量[10],其他SDHIs殺菌劑還沒有相應的MRL值。有關此類農藥檢測的標準方法較少,僅見GB 23200.8—2016《水果和蔬菜中500 種農藥及相關化學品殘留量的測定 氣相色譜-質譜法》[11]和GB/T 20769—2006《水果和蔬菜中405 種農藥及相關化學品殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質譜法》[12]中涉及了麥銹靈、氟酰胺、滅銹胺等幾種,其他SDHIs殺菌劑也沒有相應的國標檢驗方法。因此有必要開展快速分析SDHIs殺菌劑方法的研究,為該類殺菌劑的使用、監(jiān)管提供技術依據(jù)。

    目前,國內外報道的關于食品中部分SDHIs類殺菌劑的分析方法主要有免疫分析法[13-15]、氣相色譜(gas chromatography,GC)法[16-17]、氣相色譜-質譜(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)法[18-20]、液相色譜(liquid chromatography,LC)法[21]和液相色譜-串聯(lián)質譜(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)法[22-26]。LC-MS/MS法分離能力強,可同時定性定量測定多組分,研究者采用較多。Abad-Fuentes等[27]建立了LC-MS/MS法測定果蔬中吡唑萘菌胺等7 種SDHIs殺菌劑;孫亞米等[28]采用LC-MS/MS法快速測定果蔬中啶酰菌胺、呋吡菌胺、噻唑菌胺、氟吡菌酰胺、聯(lián)苯吡菌胺和吡噻菌胺等16 種新型酰胺類殺菌劑;楊歡等[29]利用LC-MS/MS法測定果蔬中8 種新型SDHIs殺菌劑;Han Lijun等[30]采用了GC-MS/MS和UHPLC-MS/MS分別測定鯰魚肌肉組織中219 種和128 種農藥,涵蓋部分SDHIs殺菌劑;還有研究者[31-32]采用超高效液相色譜-串聯(lián)質譜(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)法檢測柑橘、土豆、大豆及水果加工產(chǎn)品等不同基質中上百種農藥或其代謝物的殘留,包括啶酰菌胺、氧化萎銹靈、滅銹胺、吡噻菌胺等,而有關異丙噻菌胺、氟唑菌酰胺、苯并烯氟菌唑等新一代SDHIs殺菌劑在果蔬中殘留的檢測方法至今鮮見報道。

    考慮到不同SDHIs殺菌劑限量范圍較寬以及樣品基質的復雜性,為滿足樣品實際測定需要,本研究采用經(jīng)濟、簡便、易操作的QuEChERS(quick, easy, cheap,effective, rugged and safe)前處理方法與UPLC-MS/MS技術結合,建立了能同時分析果蔬中18 種SDHIs殺菌劑的UPLCMS/MS方法。本方法快速、操作簡便、分析時間短、靈敏度高,可滿足果蔬中SDHIs殺菌劑的定量檢測需要。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    76 份果蔬樣品購自湖北武漢中百倉儲超市、沃爾瑪超市、武商超市3 家超市。

    標準品:麥銹靈、氟酰胺、滅銹胺、氟吡菌酰胺、甲呋酰胺、萎銹靈、氧化萎銹靈、聯(lián)苯吡菌胺、呋吡菌胺、吡唑萘菌胺、氟唑菌苯胺、吡噻菌胺、氟唑環(huán)菌胺、氟唑菌酰胺、苯并烯氟菌唑、異丙噻菌胺、啶酰菌胺、噻呋酰胺(均為液態(tài)標準物質,質量濃度均為100 μg/mL) 阿爾塔科技有限公司。

    乙腈(色譜純) 德國Merck公司;甲酸(色譜純)美國Thermo Fisher公司;醋酸鈉、無水硫酸鎂(均為分析純) 國藥集團化學試劑有限公司;N-丙基乙二胺(primary secondary amine,PSA)(40~60 μm)上海安譜科學儀器有限公司;超純水由Millipore系統(tǒng)制備。

    1.2 儀器與設備

    AB SCIEX Triple QuadTM4500液相色譜-質譜聯(lián)用儀美國AB SCIEX公司;ME204電子天平 梅特勒-托利多儀器有限公司;MS3 digital渦旋儀 德國IKA公司;Centrifuge 5810離心機 艾本德中國有限公司;0.22 μm有機相濾膜 天津津騰公司;Milli-Q超純水系統(tǒng)美國Millipore公司。

    1.3 方法

    1.3.1 UPLC條件

    色譜柱:ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱(50 mm×2.1 mm,1.7 μm);進樣量2 μL;柱溫35 ℃;流動相:A相為0.1%甲酸溶液,B相為乙腈,流速0.3 mL/min;梯度洗脫條件如表1所示。

    表1 梯度洗脫程序Table 1 Gradient elution program

    1.3.2 質譜條件

    離子源:電噴霧電離源(electrospray ionization,ESI);掃描方式:正負離子模式同時掃描;檢測方式:多反應監(jiān)測,ESI+電壓5 500 V,ESI-電壓-4 500 V;離子源溫度500 ℃;氣簾氣壓力35 psi;碰撞氣壓力9 psi;霧化器壓力50 psi;輔助氣壓力50 psi;入口電壓10.0 V;碰撞室出口電壓6 V。各殺菌劑的質譜條件見表2。

    表2 18 種SDHIs的定性離子、定量離子、去簇電壓和碰撞能量Table 2 Qualitative ions, quantitative ions, cone voltages and collision energies for eighteen compounds

    1.3.3 標準溶液配制

    分別準確移取質量濃度為100 μg/mL的麥銹靈、氟酰胺、滅銹胺、氟吡菌酰胺、甲呋酰胺、萎銹靈、氧化萎銹靈、聯(lián)苯吡菌胺、呋吡菌胺、吡唑萘菌胺、氟唑菌苯胺、吡噻菌胺、氟唑環(huán)菌胺、氟唑菌酰胺、苯并烯氟菌唑、異丙噻菌胺、啶酰菌胺、噻呋酰胺標準品各1.0 mL至10 mL容量瓶,用乙腈定容到10.00 mL,18 種SDHIs的標準品母液質量濃度均為10.0 μg/mL,于-18 ℃保存。

    標準品混合中間液:準確移取18 種SDHIs的標準品母液各1.0 mL于20 mL容量瓶,用乙腈定容到20.00 mL,各化合物質量濃度均為0.5 μg/mL,于4 ℃保存。

    標準曲線工作液:用乙腈稀釋混合中間液,配制系列標準曲線為0.5、5、20、50、100、200 ng/mL。

    1.3.4 樣品前處理

    取新鮮果蔬樣品,用粉碎機粉碎混勻,于-18 ℃冷凍保存。

    準確稱取10.00 g(準確至0.01 g)試樣于50 mL離心管中,加10.0 mL乙腈,振蕩混勻2 min,再加入5 g無水硫酸鎂和1 g醋酸鈉,混勻,4 000 r/min離心5 min。取3 mL上清液于15 mL離心管中,加入100 mg無水硫酸鎂、50 mg PSA,渦旋3 min后,于4 000 r/min離心3 min,過0.22 μm有機濾膜,供UPLC-MS/MS待測。

    1.3.5 實際樣品檢測

    采集湖北武漢中百倉儲超市、沃爾瑪超市、武商超市共3 家超市76 份蔬菜及水果,采用本研究建立的前處理方法和液相色譜-質譜法測定18 種農藥的殘留量。

    1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計及圖表繪制

    本研究所有數(shù)據(jù)均在AB SCIEX公司的Analyst Software軟件下采集,采用MultiQuant3.0.2軟件進行定性定量分析,采用Origin 9.0進行圖像處理。

    2 結果與分析

    2.1 質譜條件與色譜條件的優(yōu)化

    為獲得18 種SDHIs最佳靈敏度和分離效果,對質量濃度為0.5 mg/L的18 種SDHIs單標溶液依次采取蠕動泵注射的方式進行一級質譜掃描。結果顯示:在正離子模式下,噻呋酰胺難以形成穩(wěn)定的[M+H]+峰,其他17 種殺菌劑在正離子模式下均有較好響應;在負離子模式下,噻呋酰胺能形成穩(wěn)定的[M-H]-峰。因此本實驗采取正負離子同時掃描,噻呋酰胺為負離子掃描,其他17 種SDHIs正離子掃描。為了得到響應值高,穩(wěn)定性好的子離子,優(yōu)化了質譜和液相色譜參數(shù),圖1為優(yōu)化后18 種殺菌劑的多反應監(jiān)測離子色譜圖。

    圖1 18 種化合物定量離子流圖Fig.1 Total ion current chromatograms for quantitative analysis of 18 compounds

    2.2 樣品前處理方法的優(yōu)化

    2.2.1 提取

    QuEChERS法是經(jīng)典的果蔬農藥殘留檢測方法,包含原始QuEChERS法、AOAC的QuEChERS法和歐盟的QuEChERS法。鹽析法也是農殘檢測中常用的前處理方法[33]。本實驗選擇毛白菜為實驗對象,通過加標回收,考察QuEChERS及鹽析法對SDHIs的提取效率。5 種前處理方法分別為:1)原始QuEChERS法,10 g樣品+10 mL乙腈+4 g無水MgSO4+1 g NaCl;2)歐盟的QuEChERS法,10 g樣品+10 mL乙腈+4 g無水MgSO4+1 g NaCl+1 g檸檬酸三鈉+0.5 g檸檬酸氫二鈉;3)AOAC的QuEChERS法(未酸化),10 g樣品+10 mL乙腈+4 g無水MgSO4+1 g醋酸鈉;4)AOAC的QuEChERS法,10 g樣品+10 mL乙腈+4 g無水MgSO4+1 g醋酸鈉+0.1%乙酸;5)NY/T 761—2008《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留的測定》的提取方法,10 g樣品+10 mL乙腈+7 g NaCl。

    考察不同前處理對提取效果的影響,具體操作步驟如下:取均質的10 g毛白菜樣品(每個樣品3 個平行),加入100 μL質量濃度為1 μg/mL的混合標準溶液,靜置30 min后,用以上5 種方法進行提取,渦旋3 min,取上清液,過0.22 μm濾膜檢測,通過計算18 種化合物的回收率計算提取方式。

    表3顯示,采取方法3)整體提取效果較好,總體回收率好。方法1)中整體回收率較低,氧化萎銹靈回收率僅65.7%,方法5)中超過一半樣品的回收率高于100%,有明顯的基質增強效應,方法2)平均回收率不及方法3)和方法4),方法3)和方法4)的回收率差別不大,區(qū)別在于噻呋酰胺在酸化條件下回收率高于120%,綜合考慮,本實驗選擇方法3)提取,即稱取10 g樣品,加入10 mL乙腈,渦旋振蕩,加入4 g無水MgSO4和1 g醋酸鈉混勻。

    表3 不同提取方法的18 種化合物總體回收率Table 3 Effects of different extraction methods on recoveries of eighteen compounds

    2.2.2 凈化與基質效應

    QuEChERS法常用到凈化劑C18、N-丙基乙二胺(primary secondary amine,PSA)和石墨化碳黑(graphitized carbon black,GCB)。C18可用來除脂,PSA可用來消除各種果蔬的有機酸、色素及一些糖和脂肪酸,GCB可用來去除甾體、葉綠素等色素,但對含苯官能團的化合物有較強吸附作用。楊歡等[29]在研究8 種新型SDHIs殺菌劑快速測定中,對凈化試劑進行比較和優(yōu)化,發(fā)現(xiàn)C18的加入對氟唑環(huán)菌胺、聯(lián)苯吡菌胺等化合物有吸附作用,本實驗參考其研究結果,使用PSA粉末進行凈化。并考察不同質量PSA(0、20、40、50、80、100、200、500 mg)與200 mg無水MgSO4的凈化效果,選取基質為毛白菜、芹菜、梨、橙4 種。

    分別用乙腈和空白基質溶液配制相同質量濃度的標準溶液,在相同色譜條件下測定,按照基質效應/%=B/A×100計算樣品基質溶液的基質效應,其中B為目標化合物在空白基質溶液中的響應值,A為目標化合物在乙腈中的響應值。通過基質效應強弱評價方法的凈化效果。結果表明,PSA的加入能有效達到凈化效果,并發(fā)現(xiàn)在取上清液3 mL的條件下,使用50 mg PSA即能有效降低基質增強效應,加大PSA量對凈化效果無顯著性影響,與楊歡等[29]的研究相同。

    2.2.3 線性范圍、檢出限及定量限

    在空白樣品中添加一系列質量濃度的目標化合物,在1.3.4節(jié)的前處理條件下進行檢測,以目標物質量濃度為橫坐標,質譜定量峰面積為縱坐標繪制標準曲線(表4),得出18 種農藥在0.5~200 ng/mL范圍內呈現(xiàn)出良好的線性關系,相關系數(shù)R均大于0.99,以信噪比RSN=3確定檢出限,以RSN=10確定定量限,18 種SDHIs檢出限為0.5~2.0 μg/kg,定量限為1.5~6.0 μg/kg,具體結果見表4。楊歡等[29]研究的8 種SDHIs殺菌劑檢出限為0.2~1.7 μg/kg,本方法檢出限與其水平相當,均滿足檢測需要。

    表4 18 種SDHIs的標準曲線、相關系數(shù)、檢出限和定量限Table 4 Linear ranges, related coefficient, LODs and LOQs for 18 compounds

    在毛白菜、芹菜、梨、橙4 種基質中分別添加標準溶液,按照1.3.4節(jié)進行樣品前處理,按高中低3 水平對空白樣品提取液進行添加,每個添加水平平行測定6 次,計算平均回收率和相對標準偏差(relative standard deviation,RSD),結果見表5。各種目標化合物在4 種基質中3 個添加水平(10、50 μg/kg和150 μg/kg)下的回收率為83.6%~109.4%,RSD為1.2%~8.4%。孫亞米等[28]利用LC-MS/MS建立的16 種SDHIs殺菌劑回收率為85.7%~103.9%;楊歡等[29]建立的8 種SDHIs殺菌劑回收率為71.4%~121.3%,本研究與其相比,均能滿足果蔬中農藥殘留檢測的回收率要求。

    表5 18 種SDHIs的加標回收率及RSDTable 5 Average spiked recoveries and precision of 18 compounds

    續(xù)表5

    2.3 實際樣品檢測結果

    采用優(yōu)化建立UPLC-MS/MS快速分析方法對市售沃柑、橙、梨、黃瓜、番茄、菠菜、辣椒、山藥、上海青、白菜、茄子、芹菜、豇豆、油麥菜等76 份樣品進行測試。結果顯示氟吡菌酰胺檢出樣品2 個,分別為西紅柿和黃瓜,檢出值分別為10.2、22.6 μg/kg;氟唑菌酰胺檢出樣品1 個,為黃瓜,檢出值為7.8 μg/kg;啶菌酰胺在芹菜、黃瓜、番茄、菠菜、上海青、茄子6 種蔬菜共12 個樣品中均有檢出,檢出值為7.4~1 966 μg/kg,其中在2 批次芹菜中檢出值分別高達1 017、1 966 μg/kg。噻呋酰胺檢出樣品1 個,為沃柑,檢出值為47.2 μg/kg。

    3 結 論

    本實驗建立了同時分析果蔬中18 種SDHIs殺菌劑殘留的UPLC-MS/MS檢測方法。該方法靈敏度高、重復性好,經(jīng)過系列方法學驗證,結果表明18 種目標化合物在0.5~200 μg/L范圍內線性關系良好,相關系數(shù)均大于0.99,方法檢出限為0.5~2.0 μg/kg,定量限為1.5~6.0 μg/kg。各種目標化合物在4 種基質中3 個添加水平(10、50 μg/kg和150 μg/kg)下的回收率為83.6%~109.4%,RSD為1.2%~8.4%(n=6)。實際樣品的檢測結果表明氟吡菌酰胺、氟唑菌酰胺、啶酰菌胺和噻呋酰胺均在黃瓜、西紅柿、芹菜、沃柑等果蔬中有殘留,啶菌酰胺殘留現(xiàn)象嚴重。該方法操作簡單、凈化效果好,適用于果蔬中SDHIs殺菌劑的快速檢測,不僅可以滿足當前國際上對果蔬中這18 種SDHIs殺菌劑MRL的檢測要求,也可推進果蔬中SDHIs殺菌劑殘留的食品安全風險評估,為政府監(jiān)管部門數(shù)據(jù)支撐具有重要的實際意義和社會效益。

    猜你喜歡
    酰胺殺菌劑果蔬
    12種殺菌劑對三線鐮刀菌的室內毒力測定
    云南化工(2021年6期)2021-12-21 07:31:04
    奇思妙想的果蔬們
    童話世界(2019年26期)2019-09-24 10:57:56
    雙酰胺類殺蟲劑Broflanilide
    世界農藥(2019年3期)2019-09-10 07:04:16
    三氟咪啶酰胺的合成工藝研究
    世界農藥(2019年3期)2019-09-10 07:04:14
    新穎殺菌劑Picarbutrazox合成方法概述
    世界農藥(2019年2期)2019-07-13 05:55:10
    清洗果蔬農殘 你做對了嗎
    啟蒙(3-7歲)(2018年8期)2018-08-13 09:31:14
    這些果蔬能保護呼吸道
    果蔬大作戰(zhàn)
    童話世界(2016年8期)2016-06-02 09:21:05
    真菌病害怎樣正確選擇殺菌劑?
    營銷界(2015年23期)2015-02-28 22:06:21
    國外二硝酰胺銨的發(fā)展現(xiàn)狀
    火炸藥學報(2014年3期)2014-03-20 13:17:38
    高清在线国产一区| 国产真人三级小视频在线观看| 动漫黄色视频在线观看| 激情视频va一区二区三区| 欧美精品亚洲一区二区| 美国免费a级毛片| 欧美人与性动交α欧美软件| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 成人永久免费在线观看视频 | 一本一本久久a久久精品综合妖精| 国产精品免费一区二区三区在线 | 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲第一av免费看| 涩涩av久久男人的天堂| 国产成人系列免费观看| 极品少妇高潮喷水抽搐| 午夜福利欧美成人| av视频免费观看在线观看| 1024香蕉在线观看| 国产主播在线观看一区二区| 宅男免费午夜| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 久久av网站| 亚洲中文av在线| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产亚洲精品久久久久5区| 亚洲av第一区精品v没综合| 交换朋友夫妻互换小说| 久久久久国内视频| 欧美成狂野欧美在线观看| 女警被强在线播放| 最新在线观看一区二区三区| 久久久国产一区二区| 高清在线国产一区| 怎么达到女性高潮| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 亚洲专区字幕在线| 国产精品久久久久久精品电影小说| 久热爱精品视频在线9| 999久久久精品免费观看国产| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产精品一区二区免费欧美| 国产成人免费观看mmmm| 老司机福利观看| 搡老乐熟女国产| 高潮久久久久久久久久久不卡| 一区二区三区国产精品乱码| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产精品一区二区精品视频观看| 婷婷成人精品国产| 丁香六月天网| 另类亚洲欧美激情| 精品少妇黑人巨大在线播放| 性高湖久久久久久久久免费观看| 欧美激情高清一区二区三区| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 男女边摸边吃奶| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 欧美日韩黄片免| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 精品视频人人做人人爽| 日韩欧美三级三区| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 精品国产乱码久久久久久男人| 久久99一区二区三区| 黄片大片在线免费观看| bbb黄色大片| 少妇的丰满在线观看| 多毛熟女@视频| 国产成人av激情在线播放| 搡老熟女国产l中国老女人| a级毛片黄视频| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲全国av大片| 国产在线观看jvid| 欧美午夜高清在线| 午夜福利在线免费观看网站| 免费观看人在逋| 五月开心婷婷网| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 久久天堂一区二区三区四区| 久久婷婷成人综合色麻豆| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 亚洲成人免费电影在线观看| av线在线观看网站| 美女午夜性视频免费| 亚洲男人天堂网一区| 日韩视频一区二区在线观看| 最近最新中文字幕大全免费视频| 久久九九热精品免费| 午夜老司机福利片| 亚洲avbb在线观看| 脱女人内裤的视频| 岛国在线观看网站| 蜜桃国产av成人99| 在线观看人妻少妇| 国产野战对白在线观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 女性生殖器流出的白浆| 男女下面插进去视频免费观看| 国产黄频视频在线观看| 国产一区二区在线观看av| 国产人伦9x9x在线观看| 精品高清国产在线一区| 欧美日韩精品网址| 亚洲专区中文字幕在线| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲成人免费av在线播放| 欧美激情 高清一区二区三区| 成人免费观看视频高清| 狠狠狠狠99中文字幕| 久久午夜亚洲精品久久| 久久这里只有精品19| 欧美国产精品一级二级三级| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 岛国在线观看网站| 日韩中文字幕欧美一区二区| 99国产极品粉嫩在线观看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 99国产综合亚洲精品| 欧美日韩成人在线一区二区| e午夜精品久久久久久久| 久久午夜综合久久蜜桃| 一区二区三区乱码不卡18| 一区二区三区激情视频| 少妇精品久久久久久久| 午夜福利,免费看| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 又紧又爽又黄一区二区| 99久久人妻综合| 宅男免费午夜| 免费观看av网站的网址| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 亚洲欧洲日产国产| 9191精品国产免费久久| 欧美成人午夜精品| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 在线永久观看黄色视频| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 久久香蕉激情| 高清av免费在线| 精品高清国产在线一区| 中文亚洲av片在线观看爽 | 亚洲欧美色中文字幕在线| 99re6热这里在线精品视频| 交换朋友夫妻互换小说| 日本wwww免费看| 久久久久精品国产欧美久久久| 咕卡用的链子| 欧美 日韩 精品 国产| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 精品久久久久久久毛片微露脸| 高清毛片免费观看视频网站 | 老司机靠b影院| 日韩欧美一区视频在线观看| 亚洲av电影在线进入| 中文欧美无线码| 多毛熟女@视频| 一本大道久久a久久精品| 飞空精品影院首页| 在线永久观看黄色视频| 欧美激情高清一区二区三区| 精品国产乱码久久久久久小说| 色尼玛亚洲综合影院| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 999精品在线视频| 午夜福利乱码中文字幕| 黑丝袜美女国产一区| 青草久久国产| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 亚洲欧美色中文字幕在线| 日韩欧美三级三区| 狠狠狠狠99中文字幕| 亚洲伊人久久精品综合| 久久午夜综合久久蜜桃| 热99国产精品久久久久久7| 亚洲 国产 在线| 国产91精品成人一区二区三区 | 一区二区三区乱码不卡18| 老司机靠b影院| 他把我摸到了高潮在线观看 | 丰满少妇做爰视频| 国产精品久久久久久精品古装| 国产高清激情床上av| 丝袜美腿诱惑在线| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 中文字幕最新亚洲高清| 欧美性长视频在线观看| 自线自在国产av| 国产欧美日韩精品亚洲av| 1024视频免费在线观看| 成年女人毛片免费观看观看9 | 欧美一级毛片孕妇| 咕卡用的链子| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲av美国av| av超薄肉色丝袜交足视频| 一本色道久久久久久精品综合| 大片免费播放器 马上看| 久久久久久免费高清国产稀缺| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产男女超爽视频在线观看| bbb黄色大片| 窝窝影院91人妻| 飞空精品影院首页| 人妻一区二区av| 一级片免费观看大全| 老司机午夜福利在线观看视频 | 国产亚洲精品第一综合不卡| 国产三级黄色录像| 欧美成狂野欧美在线观看| 久久影院123| 成年版毛片免费区| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 久久国产精品大桥未久av| 在线观看免费午夜福利视频| 91大片在线观看| 国产日韩欧美视频二区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 一级片免费观看大全| 欧美一级毛片孕妇| 日韩免费高清中文字幕av| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 午夜福利免费观看在线| 在线观看免费午夜福利视频| 黄色怎么调成土黄色| 久久久精品区二区三区| 国产91精品成人一区二区三区 | 下体分泌物呈黄色| 精品一区二区三卡| 男女免费视频国产| av片东京热男人的天堂| 色综合婷婷激情| 亚洲精品国产区一区二| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 久久久久国内视频| 国产高清videossex| av免费在线观看网站| 久久久精品免费免费高清| 欧美精品一区二区大全| 国产成人欧美在线观看 | 欧美人与性动交α欧美软件| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产一区二区三区综合在线观看| 久久性视频一级片| 久久影院123| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 久久天堂一区二区三区四区| 午夜视频精品福利| 一本一本久久a久久精品综合妖精| a在线观看视频网站| 最新美女视频免费是黄的| 午夜两性在线视频| 久久中文看片网| 麻豆国产av国片精品| 搡老熟女国产l中国老女人| av视频免费观看在线观看| 女警被强在线播放| av电影中文网址| 精品一品国产午夜福利视频| 欧美在线一区亚洲| 91大片在线观看| 久久久久久人人人人人| 视频区欧美日本亚洲| 成人国语在线视频| 一二三四在线观看免费中文在| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 99热国产这里只有精品6| 91九色精品人成在线观看| 日本欧美视频一区| 高清毛片免费观看视频网站 | 亚洲精品一二三| 久久久国产成人免费| 精品高清国产在线一区| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产精品一区二区免费欧美| 大型黄色视频在线免费观看| 91成年电影在线观看| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 国产精品98久久久久久宅男小说| 99re6热这里在线精品视频| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产高清激情床上av| 波多野结衣一区麻豆| 午夜日韩欧美国产| 丁香欧美五月| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 99精品在免费线老司机午夜| 免费黄频网站在线观看国产| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 欧美国产精品va在线观看不卡| 日韩精品免费视频一区二区三区| 亚洲人成电影观看| 黄色毛片三级朝国网站| 精品亚洲成国产av| 国产精品 国内视频| 国产在线精品亚洲第一网站| 老熟女久久久| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 黑人猛操日本美女一级片| 成人av一区二区三区在线看| 叶爱在线成人免费视频播放| 免费av中文字幕在线| 飞空精品影院首页| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| av一本久久久久| 纯流量卡能插随身wifi吗| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 男女高潮啪啪啪动态图| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 亚洲中文av在线| 人妻久久中文字幕网| 成人特级黄色片久久久久久久 | 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 一二三四在线观看免费中文在| 99国产精品免费福利视频| 桃花免费在线播放| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 宅男免费午夜| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 国产老妇伦熟女老妇高清| 男女床上黄色一级片免费看| 国产97色在线日韩免费| 麻豆成人av在线观看| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 亚洲成a人片在线一区二区| 久久国产精品影院| 国产在线免费精品| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 亚洲国产av影院在线观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 免费在线观看完整版高清| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 欧美激情久久久久久爽电影 | 久9热在线精品视频| 热re99久久国产66热| 久久狼人影院| tocl精华| 日韩免费高清中文字幕av| 他把我摸到了高潮在线观看 | 纯流量卡能插随身wifi吗| 久久99一区二区三区| 淫妇啪啪啪对白视频| 欧美精品高潮呻吟av久久| 这个男人来自地球电影免费观看| 午夜日韩欧美国产| 亚洲视频免费观看视频| 久久香蕉激情| 美女国产高潮福利片在线看| 国产在线免费精品| 久久久久视频综合| 日本黄色视频三级网站网址 | av网站免费在线观看视频| 最新美女视频免费是黄的| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 麻豆av在线久日| 色综合婷婷激情| 欧美老熟妇乱子伦牲交| av片东京热男人的天堂| 一区二区三区激情视频| 亚洲九九香蕉| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产在线一区二区三区精| 亚洲人成电影观看| 一本综合久久免费| 99国产精品免费福利视频| 人妻久久中文字幕网| 999久久久国产精品视频| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产精品电影一区二区三区 | 午夜福利欧美成人| 99热国产这里只有精品6| 久久国产精品影院| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 欧美精品av麻豆av| 国产亚洲精品第一综合不卡| 大香蕉久久成人网| 国产精品久久久久成人av| 十八禁网站免费在线| 大片电影免费在线观看免费| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产成人精品久久二区二区91| 一区二区三区国产精品乱码| 多毛熟女@视频| 男人舔女人的私密视频| 亚洲精华国产精华精| 久久精品国产综合久久久| 午夜福利,免费看| 精品午夜福利视频在线观看一区 | 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 超色免费av| xxxhd国产人妻xxx| 日本欧美视频一区| 狠狠狠狠99中文字幕| 黑人欧美特级aaaaaa片| 午夜福利欧美成人| 极品人妻少妇av视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 18禁美女被吸乳视频| 91精品国产国语对白视频| 国产精品国产av在线观看| 精品久久久久久电影网| 国产精品久久久久久精品古装| 欧美精品一区二区大全| 咕卡用的链子| 国产在线视频一区二区| 男女高潮啪啪啪动态图| 免费看a级黄色片| 欧美精品一区二区免费开放| 99国产精品一区二区三区| 大香蕉久久网| 国产高清videossex| 国产一区有黄有色的免费视频| 中文字幕人妻熟女乱码| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 看免费av毛片| 久久毛片免费看一区二区三区| 桃花免费在线播放| 中文字幕制服av| 免费人妻精品一区二区三区视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 99riav亚洲国产免费| 精品久久久久久电影网| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 伊人久久大香线蕉亚洲五| 高清毛片免费观看视频网站 | 国产在线视频一区二区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲精品成人av观看孕妇| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲av片天天在线观看| 天堂动漫精品| 国产片内射在线| av在线播放免费不卡| 女人精品久久久久毛片| 中文字幕制服av| 久久性视频一级片| 水蜜桃什么品种好| 国产伦人伦偷精品视频| netflix在线观看网站| 久久久水蜜桃国产精品网| 伦理电影免费视频| 国产淫语在线视频| 国产成人欧美在线观看 | 色在线成人网| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 另类精品久久| 色精品久久人妻99蜜桃| 色婷婷久久久亚洲欧美| 黄色视频,在线免费观看| 99精品在免费线老司机午夜| 宅男免费午夜| svipshipincom国产片| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 免费不卡黄色视频| 久久久久久久国产电影| 久久精品亚洲av国产电影网| 成年人午夜在线观看视频| 久久中文字幕一级| 午夜91福利影院| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 在线 av 中文字幕| 99国产综合亚洲精品| 久久国产亚洲av麻豆专区| 日本黄色日本黄色录像| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 中文字幕最新亚洲高清| 日韩精品免费视频一区二区三区| 久久久久视频综合| 无遮挡黄片免费观看| 日本wwww免费看| 18禁观看日本| 久久香蕉激情| 老汉色∧v一级毛片| 欧美精品一区二区免费开放| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 这个男人来自地球电影免费观看| 国产精品99久久99久久久不卡| 久久久久久久精品吃奶| 国产精品熟女久久久久浪| 国产伦人伦偷精品视频| 一本综合久久免费| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产精品av久久久久免费| 亚洲成人手机| 色94色欧美一区二区| 国产av国产精品国产| 亚洲男人天堂网一区| 久久午夜综合久久蜜桃| 考比视频在线观看| 亚洲国产中文字幕在线视频| 精品视频人人做人人爽| 色综合欧美亚洲国产小说| 在线观看一区二区三区激情| 夜夜夜夜夜久久久久| 男女午夜视频在线观看| 最新在线观看一区二区三区| 在线观看人妻少妇| 成人国产av品久久久| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 91精品国产国语对白视频| 国产欧美亚洲国产| 久久99热这里只频精品6学生| 亚洲av美国av| 欧美久久黑人一区二区| 欧美激情 高清一区二区三区| av天堂久久9| 亚洲视频免费观看视频| 国产精品一区二区在线不卡| 蜜桃在线观看..| 制服人妻中文乱码| 蜜桃在线观看..| 久久人妻av系列| 日韩欧美三级三区| 久久ye,这里只有精品| av天堂在线播放| 无人区码免费观看不卡 | 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 精品久久久久久电影网| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 性少妇av在线| 在线观看人妻少妇| 777米奇影视久久| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲综合色网址| 日韩欧美一区视频在线观看| 成人18禁在线播放| 久久久欧美国产精品| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 国产又爽黄色视频| 国产男女内射视频| 国产xxxxx性猛交| 国产激情久久老熟女| 久久毛片免费看一区二区三区| 精品第一国产精品| 亚洲精品美女久久av网站| 在线观看免费高清a一片| 露出奶头的视频| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久中文字幕人妻熟女| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 最近最新中文字幕大全免费视频| 精品福利观看| 桃红色精品国产亚洲av| 老汉色∧v一级毛片| 黄色片一级片一级黄色片| videos熟女内射| 人妻久久中文字幕网| 在线永久观看黄色视频| 人人澡人人妻人| 啦啦啦 在线观看视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 叶爱在线成人免费视频播放| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 亚洲精品国产区一区二| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | av网站在线播放免费| 久久久欧美国产精品| xxxhd国产人妻xxx| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 中文字幕av电影在线播放| 成在线人永久免费视频| 久久久久网色| 麻豆av在线久日| 亚洲精品国产区一区二| 亚洲人成伊人成综合网2020| 免费黄频网站在线观看国产| 成人三级做爰电影| 一进一出好大好爽视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 大陆偷拍与自拍| 老司机亚洲免费影院| 色精品久久人妻99蜜桃| 热re99久久精品国产66热6| 99香蕉大伊视频| 精品亚洲成国产av| www.精华液| 99国产精品免费福利视频| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 人成视频在线观看免费观看| 欧美成人午夜精品| 操出白浆在线播放| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产精品 欧美亚洲| 亚洲男人天堂网一区| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产精品久久久久久精品电影小说| 久久精品亚洲av国产电影网| 丝瓜视频免费看黄片| 大片电影免费在线观看免费| 免费在线观看完整版高清| 中文字幕高清在线视频| 亚洲国产精品一区二区三区在线|