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    薏苡仁現(xiàn)代萃取技術(shù)應(yīng)用研究

    2021-09-27 12:33:26鄭秋芳
    中國(guó)食品 2021年17期
    關(guān)鍵詞:閃式蒸餾水刻度

    本項(xiàng)目旨在選擇最佳的薏苡仁萃取技術(shù)和工藝方法。首先,利用Box-Behnken中心組合試驗(yàn)和響應(yīng)面分析法,確定工藝的最優(yōu)過(guò)程;其次,將Sevag法和胰蛋白酶水解法結(jié)合,有效降解試液當(dāng)中的蛋白質(zhì)。最終研發(fā)出工藝簡(jiǎn)單、便于操作的薏苡仁萃取技術(shù),能夠有效提高對(duì)于薏苡仁的利用率。

    一、儀器和材料

    1.儀器和設(shè)備。試驗(yàn)臺(tái)桌,車(chē)間凈化器,烘箱,萬(wàn)能粉碎機(jī),高效液相色譜儀,紫外可見(jiàn)分光光度計(jì),原子熒光光度計(jì),氣像色譜儀,三維混合機(jī),超純水設(shè)備,多功能小型提取濃縮設(shè)備,常溫烘干機(jī),槽型混合機(jī)等。

    2.材料和試劑。薏苡仁(市售);葡萄糖,a-淀粉酶,糖化酶,胰蛋白酶,高濃度乙醇(濃度為95%),正丁醇-氯仿混合液(1︰5,需要臨時(shí)配備),苯酚溶液(濃度為5%),濃硫酸等。

    二、含量測(cè)定方法

    1.對(duì)照品溶液的配制。采用精密儀器稱(chēng)取葡萄糖對(duì)照品30.08mg,在105℃的環(huán)境下,將葡萄糖進(jìn)行干燥,直至達(dá)到恒重;將葡萄糖粉末倒入蒸餾水中使其完全溶解,即可得到葡萄糖對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。

    2.供試品溶液的制備。利用精密儀器稱(chēng)取薏苡仁粉末50g,稱(chēng)取9份相同重量,脫脂后進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn),并加入一定體積的蒸餾水,通過(guò)回流、過(guò)濾等一系列程序得到相對(duì)應(yīng)的濾液。選取1mL濾液并置于50mL容量瓶中,加入蒸餾水至容量瓶刻度線位置,得到定容的樣品試劑,在進(jìn)行測(cè)試之前充分振搖,確保其充分分布于蒸餾水中,以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

    3.利用苯酚-硫酸法測(cè)定薏苡仁中的多糖含量。(1)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。稱(chēng)取配備好的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖并置于100mL容量瓶中,加入蒸餾水至容量瓶刻度線位置,從而得到葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。選取一定量(3mL、5mL、7mL、9mL、11mL、13mL)的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液,分別置于50mL的容量瓶中,再倒入一定量的蒸餾水稀釋至容量瓶的刻度位置。充分搖勻后,分別吸取1mL置于10mL的容量瓶中,再向獲得的溶液中分別加入1mL的苯酚溶液,為了保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性,需將對(duì)應(yīng)的溶液充分搖勻。然后分別加入5mL的濃硫酸,搖勻之后再放置于沸水中,持續(xù)加熱30min后迅速取出,將其放置于事先備好的冰水中,冷卻至室溫后,選取一定位置測(cè)試得到吸光值。一般以試劑克數(shù)為橫坐標(biāo),所對(duì)應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo),經(jīng)過(guò)一系列的實(shí)驗(yàn)操作和數(shù)據(jù)計(jì)算得到標(biāo)準(zhǔn)曲線,方程式如公式(1)所示:

    Y=9.0353X-0.0153(r=0.9994)? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?(1)

    f=W/C*D? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?(2)

    多糖含量%=C*D*f/W*100%? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? (3)

    (2)測(cè)定換算因子。稱(chēng)取50mg的薏苡仁多糖(在0℃環(huán)境下進(jìn)行干燥,直至薏苡仁多糖達(dá)到恒重狀態(tài)),添加一定量的蒸餾水將其稀釋到刻度位置,充分搖勻后進(jìn)行除蛋白等程序。選取一定量(3mL、5mL、7mL、9mL、11mL、13mL)的溶液,分別置于50mL的容量瓶中,再倒入一定量的蒸餾水稀釋至容量瓶的刻度位置,然后分別吸取0.5mL置于10mL的容量瓶中,分別加入1mL的苯酚溶液,充分搖勻后測(cè)定吸光度。利用公式(2)計(jì)算出試液中葡萄糖的密度,從而計(jì)算得出所對(duì)應(yīng)的換算因子。在公式(2)中,W是薏苡仁多糖質(zhì)量(g),C是葡萄糖的濃度(mg/mL),D是對(duì)所對(duì)應(yīng)的多糖稀釋倍數(shù)。通過(guò)檢驗(yàn)和計(jì)算,最終得出換算因子f=1.6。

    (3)測(cè)定試品溶液的多糖含量。精確選取所檢測(cè)的試品溶液0.5mL,加入等量的水置于10mL的容量瓶當(dāng)中。以1mL蒸餾水作空白,吸取1mL試劑至10mL的容量瓶當(dāng)中,分別加入1mL的苯酚溶液,充分搖勻后進(jìn)行吸收度的測(cè)定。利用公式(3)計(jì)算試品溶液的多糖含量,其中,C是葡萄糖的濃度(mg/mL),D是稀釋倍數(shù),W是薏苡仁多糖樣品的質(zhì)量(mg),f是換算因子。

    三、實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

    1.薏苡仁多糖的提取工藝。薏苡仁中具有較高的淀粉含量和一定量的蛋白質(zhì)成分,這就嚴(yán)重制約了對(duì)于多糖的提純,也影響了薏苡仁多糖進(jìn)一步的高值化利用,使其生理活性受到嚴(yán)重的制約。本項(xiàng)目采用閃式提取法進(jìn)行多糖的提取,對(duì)薏苡仁粗多糖中脫淀粉、脫蛋白的純化方法以及多糖組分的分離技術(shù)進(jìn)行研究。利用耐高溫a-淀粉酶和糖化酶的分步酶解技術(shù)分離純化粗多糖中的淀粉,利用胰蛋白酶水解技術(shù)分離純化粗多糖中的蛋白質(zhì),提高薏苡仁多糖的純度。具體的工藝流程為:薏苡仁/薏米→篩選→閃式提取→粉碎、過(guò)濾→去淀粉(a-淀粉酶、糖化酶、胰蛋白酶)→去蛋白(Sevag法、胰蛋白酶)→醇沉→離心分離→低溫噴霧干燥→精致薏米多糖。

    閃式提取法是一種新型的多糖提取方法,具有簡(jiǎn)單、迅速、最大限度保護(hù)植物的有效成分不受熱破壞、提取率高、節(jié)約能源等優(yōu)點(diǎn)。本項(xiàng)目利用單因素試驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)化篩選,采用Box-Benhnken中心組合試驗(yàn)和響應(yīng)面分析法,對(duì)薏苡仁多糖的閃式提取工藝條件進(jìn)行優(yōu)化,建立更高效的閃式提取薏苡仁多糖的工藝。低溫噴霧干燥是瞬間干燥,速度快,溫度低,對(duì)功能性成分的影響小,十分適合熱敏性物質(zhì)。優(yōu)化薏苡仁多糖低溫噴霧干燥技術(shù)參數(shù),解決干燥過(guò)程中粘壁嚴(yán)重、產(chǎn)品易結(jié)塊的難題,提高薏苡仁多糖粉的得率,制備出粉質(zhì)均勻、溶解性好的薏苡仁多糖粉。閃式提取工藝的優(yōu)化以相關(guān)提取率為相應(yīng)的指標(biāo),其多糖含量方差分析結(jié)果如表1所示。

    另外,從上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析得到,最佳的提取方法是提取3次,加水量為15倍,提取時(shí)間為150秒。為驗(yàn)證試驗(yàn)的可靠性,將該方法十倍進(jìn)行,結(jié)果差異較小,說(shuō)明實(shí)驗(yàn)方法穩(wěn)定可靠。

    2.除蛋白實(shí)驗(yàn)。除蛋白的方法主要有兩種,分別是Sevag法和胰蛋白酶水解法。其中,Sevag法的具體實(shí)施過(guò)程為:精確稱(chēng)取50mL的高濃度多糖溶液,加入一定體積的正丁醇氯仿溶液(一般為1/5體積),充分振搖(一般為30min),再將其以4000r/min的速度離心10min,之后進(jìn)行變性蛋白去除操作。取出對(duì)應(yīng)的溶液3mL并置于比色皿中,進(jìn)行紫外線的吸收測(cè)定,其中蒸餾水為空白,將測(cè)量之后的溶液重新放置在原液當(dāng)中,再次進(jìn)行以上操作。如果蛋白含量不夠穩(wěn)定,需要進(jìn)行多次測(cè)量,直至蛋白含量達(dá)到穩(wěn)定值。經(jīng)過(guò)試驗(yàn)測(cè)定,在進(jìn)行第6次操作之后,溶液的吸光度趨于穩(wěn)定。

    四、結(jié)論與展望

    綜上所述,高溫水提法需要高溫才能實(shí)現(xiàn)對(duì)薏苡仁多糖的提取,會(huì)大大破壞糖的活性,因此應(yīng)在溫度較低的環(huán)境下,采用浸提的方法提取多糖。在試驗(yàn)過(guò)程中,Sevag法操作復(fù)雜,胰蛋白酶水解法優(yōu)勢(shì)突出,兩者結(jié)合降解溶液當(dāng)中的蛋白質(zhì)效果更優(yōu)。

    基金項(xiàng)目:福州市科技計(jì)劃項(xiàng)目,項(xiàng)目名稱(chēng)為福建省道地藥材薏苡仁現(xiàn)代萃取技術(shù)的研究與應(yīng)用,項(xiàng)目編號(hào)為2020-ZF-178。

    作者簡(jiǎn)介:鄭秋芳(1988-),女,福建福州人,研發(fā)部經(jīng)理,工程師,研究方向?yàn)槭称房茖W(xué)。

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