CD4+CD25+Foxp3+Treg 細胞在變異性鼻炎與支氣管哮喘的差異性表達

楊萍 ，徐峰圣 ，陳沁

1.福建中醫(yī)藥大學附屬人民醫(yī)院（福建省人民醫(yī)院）呼吸科，福建福州 350000；2.福建中醫(yī)藥大學，福建福州 350122；3.福建中醫(yī)藥大學中西醫(yī)結(jié)合學院，福建福州 350004

哮喘是由多種細胞以及細胞組分參與的慢性氣道炎癥性疾病，臨床表現(xiàn)為反復發(fā)作的喘息、氣急，伴或不伴胸悶或咳嗽等癥狀， 同時伴有氣道高反應性和可變的氣流受限，隨著病程延長可導致氣道結(jié)構改變，即氣道重塑[1]。 變應性鼻炎是機體暴露于變應原后主要由IgE 介導的鼻黏膜非感染性慢性炎癥疾病[2]。 上述兩種疾病存在高度關聯(lián)性，臨床研究結(jié)果證明，治療變應性鼻炎可改善哮喘癥狀[4-5]。 在兩者的發(fā)病過程中，調(diào)節(jié)性T 細胞具有重要作用。 該文于2020 年3 月—2021 年3月通過設立過敏性鼻炎組和支氣管哮喘組， 檢測兩組外周血CD4+CD25+Treg 含量及Foxp3 水平并做比較，以了解過敏性鼻炎患者、支氣管哮喘患者外周血CD4+CD25+Treg 含量及Foxp3 水平是否下降，并對過敏性鼻炎患者和支氣管哮喘患者外周血CD4+CD25+Treg 含量及Foxp3 水平進行相關性分析，以期探究過敏性鼻炎與支氣管哮喘是否存在免疫遞進關系， 為臨床更好地認識過敏性鼻炎和哮喘是“一個呼吸道,一種疾病”提供理論依據(jù)， 并為臨床提供一種早期發(fā)現(xiàn)過敏性鼻炎可能發(fā)展為哮喘的預測指標，現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

便利選取福建中醫(yī)藥大學附屬人民醫(yī)院門診確診變異性鼻炎27 例，所有病例均符合變應性鼻炎診斷標準；支氣管哮喘患者33 例，所有病例均符合支氣管哮喘防治診斷標準；且27 例變異性鼻炎患者中常年性14例，季節(jié)性13 例；33 例哮喘患者中發(fā)作期18 例，緩解期15 例。 20 名健康者為對照組。

1.2 納入標準

均符合診斷標準；年齡在14～90 歲；男女不限；受試者對研究知情同意，且自愿受試。

1.3 排除標準

不符合診斷標準者； 該次發(fā)病已用過相應治療藥物者；合并肺炎、支氣管炎者；妊娠期、哺乳期婦女；具有嚴重的原發(fā)性心、肝、腎、血液疾病及糖尿病，或影響其生存的嚴重疾病者。

1.4 外周血CD4+CD25+Treg 含量及Foxp3 水平測定

從肝素鈉抗凝全血1 mL 中經(jīng)密度梯度離心法分離外周血單核細胞（PBMCs），調(diào)整細胞為 1×106／mL，取100 μl 細胞懸液加入 10 μl 抗人 CD4-FITC，CD25-PE單抗，室溫避光染色30 min，用染色緩沖液洗滌1 次，再加入1 mL 經(jīng)稀釋的固定、 透膜劑，4℃暗孵40 min，加 2 mL 透膜緩沖液洗滌 2 次并重懸，加入 2 μl（2%）正常大鼠血清封閉15 min，再加入PE 標記的抗人FOXP3抗體 10 μl，4℃暗孵 30 min 后洗滌 2 次，加入適量的染色緩沖液混勻重懸， 應用流式細胞儀檢測，CellQues 軟件獲取并分析數(shù)據(jù)， 用三色熒光抗體染色陽性細胞百分率記錄結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計學軟件分析數(shù)據(jù)，計量資料用（）表示，比較采用t檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者 CD4+CD25+Foxp3 及調(diào)節(jié) T 細胞（Treg）水平比較

哮喘組患者外周血中CD4+CD25+Foxp3 低于鼻炎組和對照組，調(diào)節(jié)性T 細胞（Treg 細胞）水平顯著高于鼻炎組和對照組患者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組患者 CD4+CD25+Foxp3 及調(diào)節(jié) T 細胞（Treg）水平比較（）

表1 兩組患者 CD4+CD25+Foxp3 及調(diào)節(jié) T 細胞（Treg）水平比較（）

組別CD4+CD25+Foxp3（%） Treg（KU/L）對照組（n=20）鼻炎組（n=27）哮喘組（n=33）7.88±1.68 5.60±1.28 4.77±0.93 20.58±16.83 174.58±110.59 460.21±320.47

2.2 CD4+CD25+Foxp3 在變異性鼻炎不同分型與哮喘不同分期表達比較

鼻炎組患者CD4+CD25+Foxp3 常年表達為 （5.08±0.78）%、季節(jié)性為（6.20±1.51）%，差異有統(tǒng)計學意義（t=2.448，P＜0.05）。 哮喘組患者 CD4+CD25+Foxp3 發(fā)作時表達為（3.23±0.65）%、緩解時表達為（4.72±1.18）%，差異有統(tǒng)計學意義（t=2.744，P＜0.05）。

2.3 變異性鼻炎不同分型與哮喘不同分期時調(diào)節(jié)T 細胞（Treg）水平比較

鼻炎組患者 Treg 常年表達為 （215.55±115.74）%、季節(jié)性為 （130.08±95.12）%， 差異有統(tǒng)計學意義 （t=2.087，P＜0.05）。 哮 喘 組 患 者 Treg 發(fā) 作 時 表 達 為（618.39±323.24）%、緩解時表達為（368.22±290.33）%，差異有統(tǒng)計學意義（t=2.317，P＜0.05）。

3 討論

從病理生理上講， 鼻與支氣管及肺的關系非常密切[6-8]。 上呼吸道黏膜和下呼吸道黏膜有解剖上的連續(xù)性,過敏性鼻炎的上呼吸道炎癥極易向下蔓延,導致過敏性支氣管炎癥和哮喘。 同時過敏性鼻炎的上呼吸道和哮喘的下呼吸道有相同的免疫抑制功能缺陷,過敏性鼻炎和哮喘也有相似的發(fā)病機制。 在最新的指南中，有無合并變應性鼻炎也被認為是哮喘嚴重程度重要的評估內(nèi)容[9-10]。

大量研究顯示，Treg 細胞作為免疫負調(diào)節(jié)的角色出現(xiàn),在免疫耐受中發(fā)揮著舉足輕重的作用[11-13]。特應性個體在遇到過敏原后不能正常地建立起免疫抑制狀態(tài),繼而發(fā)生過敏性炎性反應。 有報道指出，Treg 細胞根據(jù)其來源、 表位特征及發(fā)揮效應的機制可劃分為天然Treg 細胞（natural regulatory T cell）和獲得性 Treg 細胞（adaptive regulatory T cell） 兩大類， 據(jù)此定義，CD4+CD25+Treg 細胞屬于前者[14]。 Foxp3,一個叉頭狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子, 被報道是CD4+CD25+Treg 細胞特有的一個標記物,它表達在大多數(shù)的CD4+CD25+highT 細胞和少部分 CD4+CD25intT 細胞,且其與CD4+CD25+Treg 細胞表型和功能的維系密切相關。 CD4+CD25+Treg 細胞膜表面的 CTLA-4 和可溶性 TGF-β 提供免疫抑制信號已被證實。 通過對胸腺的CD4+CD25+Foxp3+Treg 細胞抑制機制研究表明Th2 細胞較Th1 細胞對 CTLA-4/TGF-β 介導的免疫抑制機制更為敏感。 由此可以得出CD4+CD25+Foxp3+Treg 細胞通過抑制Th2 在過敏性疾病中的優(yōu)勢發(fā)揮免疫抑制作用。 而在過敏性患者體內(nèi)CD4+CD25+Treg 是有缺陷的，從而成為過敏性疾病發(fā)生的重要原因。 在小鼠和人的實驗研究中有報道[15], CTLA-4和可溶性 TGF-β 的聯(lián)合作用可阻斷靶細胞 CD4+或CD8+CD25-T 細胞增生和功能實現(xiàn)。 通過對胸腺的CD4+CD25+Foxp3+Treg 細胞抑制機制研究表明，Th2 細胞較Th1 細胞對 CTLA-4/TGF-β 介導的免疫抑制機制更為敏感[16]。 由此可以得出 CD4+CD25+Foxp3+Treg 細胞通過抑制Th2 在過敏性疾病中的優(yōu)勢發(fā)揮免疫抑制作用。 而在過敏性患者體內(nèi)CD4+CD25+Treg 是有缺陷的，從而成為過敏性疾病發(fā)生的重要原因。

該研究發(fā)現(xiàn)，在變應性鼻炎和哮喘患者的比較中，哮喘組患者外周血中 CD4+CD25+Foxp3 （4.77±0.93）%低于鼻炎組，調(diào)節(jié)性T 細胞（Treg 細胞）水平顯著高于鼻炎組和對照組 （P＜0.05）。 鼻炎組患者 CD4+CD25+Foxp3 常年、季節(jié)性表達差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。哮喘組患者發(fā)作、 緩解時表達差異有統(tǒng)計學意義 （P＜0.05）。 鼻炎組患者Treg 常年、季節(jié)性表達差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 哮喘組患者 Treg 發(fā)作、緩解時表達表達明差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 這與陳菲菲等[14]學者在相關研究中得出， 哮喘患者外周血中CD4+CD25+Foxp3 （4.62±0.87）%低于變異性鼻炎，Treg （458.21±311.37）高于變異性鼻炎患者的結(jié)果相近。 表明獲得適應性Treg 作為一種反饋形式， 調(diào)節(jié)傳統(tǒng)的抗原特異性免疫反應。 FoxP3 是免疫抑制效應程序的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。 既往有研究[17]分析過CD4+T 細胞群中FoxP3 的表達， 觀察到的FoxP3 表達的增加可能是由于一小部分FoxP3+ Treg 細胞群的擴張或外周非調(diào)節(jié)性CD4+ T 細胞向Treg 的轉(zhuǎn)化，該研究認為，持續(xù)的抗原刺激和頻繁的氣道炎癥與FoxP3 表達的增加以及隨后的Treg 細胞亞群的增加有關。 哮喘的過敏反應和癥狀表現(xiàn)明顯強于過敏性鼻炎，CD4+CD25+Foxp3+Treg 細胞水平的差異性可能和這一趨勢存在相關聯(lián)系[18]。

綜上所述， 外周血中CD4+CD25+Foxp3 及調(diào)節(jié)T細胞與患者的病情過敏性鼻炎與支氣管哮喘存在免疫遞進關系，CD4+CD25+Foxp3+Treg 細胞水平可能與過敏的嚴重程度有關。