不同生長(zhǎng)年份、生境人參判別方法的研究進(jìn)展

郭 靜， 陳丹青， 王士祥

(上海上藥神象健康藥業(yè)有限公司，上海 200336)

人參是馳名中外的名貴藥材，具有保肝[1]、調(diào)節(jié)免疫[2]、抗疲勞[3-5]、抗糖尿病[6]、抗腫瘤[7-8]、抗抑郁[9]、治療心腦血管[10-12]和神經(jīng)系統(tǒng)疾病[13-15]的功效。根據(jù)人參生長(zhǎng)環(huán)境和栽培方式的不同，可以分為園參、林下山參、野山參和野生人參4類。自然傳播、生長(zhǎng)于深山密林的原生態(tài)人參，稱為野生人參。野生人參是人參中的極品，產(chǎn)量極少，資源瀕臨枯竭，且不允許私自采挖和買賣，因此市場(chǎng)上以園參、林下山參和野山參為主。其中人工栽培的人參俗稱“園參”；播種在山林野生狀態(tài)下自然生長(zhǎng)的人參稱“林下山參”，習(xí)稱“籽海”；播種后自然生長(zhǎng)于深山密林15年以上的人參，可稱為野山參[16]。野山參價(jià)值不菲，經(jīng)常單支售價(jià)過萬，林下山參價(jià)格從每公斤幾千到十幾萬元不等，而園參的價(jià)格僅為每公斤數(shù)百至千元。參齡是影響人參品質(zhì)的重要因素，也是野山參分等定價(jià)的重要依據(jù)。園參的商品年限多在4～5年，一般不超過6年，林下山參的商品年限多在10年以上，野山參的商品年限多在20年左右。目前不同生境的人參及其生長(zhǎng)年份的判別仍以經(jīng)驗(yàn)鑒別為主，蘆、艼、體、紋、須、皮、點(diǎn)等方面的外觀特征是其主要的鑒別要點(diǎn)[17-18]，但該方法過于主觀，評(píng)價(jià)結(jié)果不具備可重復(fù)性，對(duì)鑒定者的鑒別經(jīng)驗(yàn)也有極高的要求。近年來得益于現(xiàn)代科技的快速發(fā)展，與人參判別相關(guān)的技術(shù)方法層出不窮，但尚無文獻(xiàn)對(duì)其進(jìn)行系統(tǒng)的整理，本文現(xiàn)就園參、林下山參、野山參及其生長(zhǎng)年份的判別方法進(jìn)行綜述，以期為市售人參的質(zhì)量評(píng)價(jià)和年份判別提供參考。

1 不同生境人參的年份判別

參齡和生長(zhǎng)環(huán)境對(duì)人參化學(xué)成分和內(nèi)在品質(zhì)有著極大的影響，而目前《中國藥典》僅以人參皂苷Rg1、Re和Rb1含量作為檢查指標(biāo)，方法過于簡(jiǎn)單，不能凸顯出不同生長(zhǎng)年份人參的成分差異，也無法用于園參、林下山參及野山參等不同生境人參的科學(xué)判別。本文對(duì)上述3種常見人參的年份判別方法進(jìn)行了整理，但由于目前尚無野山參年份判別的針對(duì)性報(bào)道，而常與園參、林下山參一起作為試驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行分類識(shí)別，故后續(xù)僅對(duì)園參的年份判別、林下山參的年份判別以及園參、林下山參、野山參的分類判別方法進(jìn)行歸納。

1.1 園參的年份判別

1.1.1 顯微鑒別 通過觀察人參的顯微結(jié)構(gòu)可以快速鑒別人參真?zhèn)?，而根?jù)顯微特征物的變化還可以初步比較人參年份的長(zhǎng)短。鄭秀茜等[19]采用顯微定量法，以人參的草酸鈣簇晶為顯微特征物，根據(jù)不同年限不同部位特征物含量及形態(tài)上的差異對(duì)1～7年生園參進(jìn)行了鑒別，發(fā)現(xiàn)蘆頭內(nèi)的草酸鈣簇晶含量明顯高于其他部位，且隨著生長(zhǎng)年限的增加，全參、蘆頭、主根、側(cè)根、須根中草酸鈣簇晶的含量明顯上升且體積逐漸增大。而隨著年限的增長(zhǎng)，2～5年生石柱參須根中草酸鈣簇晶的含量呈逐漸降低的趨勢(shì)。這表明基于特征物的形態(tài)和含量變化，顯微鑒別法可用于樣本量較少時(shí)同種園參樣本間年限長(zhǎng)短的快速比較，但尚不能對(duì)單個(gè)園參樣本的品種及生長(zhǎng)年限進(jìn)行判別或預(yù)測(cè)。

1.1.2 成分鑒別 基于不同生長(zhǎng)年限園參中多種成分含量的差異，結(jié)合現(xiàn)代檢測(cè)分析技術(shù)，可以較為準(zhǔn)確的判別和預(yù)測(cè)園參年份。這些檢測(cè)分析技術(shù)主要分為光譜法、色譜法、質(zhì)譜法及色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等方法，其中光譜法又包括紅外光譜法和紫外光譜法，而色譜法則以液相色譜法為主。

1.1.2.1 光譜法 光譜法分紅外光譜法和紫外光譜法。其中紅外光譜法高效、快速，可用于人參的定性和定量分析，還可以實(shí)現(xiàn)對(duì)人參品種和年份的初步判別。Kwon等[20]比較了4個(gè)品種的1、2、3年生園參葉的紅外光譜，并將其數(shù)據(jù)進(jìn)行量化，發(fā)現(xiàn)不同品種和生長(zhǎng)年份的園參葉在多糖、酰胺等代謝成分的組成和含量上均存在明顯差異，并基于此差異建立了PLS-DA判別模型，可以有效的判別和預(yù)測(cè)園參葉的生長(zhǎng)年份，準(zhǔn)確率達(dá)94.8%。紫外光譜法以紫外分光光度法為主，在園參總皂苷含量的分析測(cè)定中較為常用。麻銳等[21]利用紫外分光光度法測(cè)定了1～5年生園參的總皂苷含量，對(duì)比發(fā)現(xiàn)園參總皂苷含量隨生長(zhǎng)年限的增加而顯著增加，其中5年生園參是1年生園參的近4倍。

1.1.2.2 液相色譜法 液相色譜法是色譜法中應(yīng)用最為普遍的一種方法，在園參的年份判別研究中多用于分析皂苷類成分含量的整體變化趨勢(shì)。余江鋒等[22]采用HPLC技術(shù)測(cè)定了吉林撫松3～9年生園參中8種人參皂苷的含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rg1含量隨生長(zhǎng)年限的增長(zhǎng)而逐漸增加，而8種人參皂苷的總含量與人參皂苷Rg1含量的比值，及人參皂苷Re、Rb1、Rc、Rd含量與人參皂苷Rg1含量的比值均呈逐年下降趨勢(shì)(P<0.01)。麻銳等[21]通過HPLC法分析了1～5年生園參中6種常見人參皂苷的含量，發(fā)現(xiàn)皂苷含量整體呈現(xiàn)逐年遞增趨勢(shì)，其中人參皂苷Rb1、Rb2含量隨年限顯著遞增，Rg1、Rc、Rd呈現(xiàn)逐年緩增趨勢(shì)，而Re含量在第3年最高，隨后趨于平緩。

1.1.2.3 質(zhì)譜法 質(zhì)譜是一種測(cè)量離子荷質(zhì)比的分析方法，具備高特異性、高靈敏度和廣適性，可以在一次分析中提供豐富的結(jié)構(gòu)信息。Bai等[23]采用MALDI-TOF-MSI和MALDI-TOF-MS/MS技術(shù)建立了一種有效探索人參皂苷分布規(guī)律的方法，并對(duì)2、4、6年生園參根進(jìn)行了定位研究，發(fā)現(xiàn)人參皂苷類成分主要集中在形成層以外的韌皮部和皮層中，且以m/z1 117(Rb2/Rc)和m/z1 147(Rb1)處質(zhì)譜峰所對(duì)應(yīng)的人參皂苷在園參中的含量高于其他成分(P<0.01)，二者峰強(qiáng)度之比可以用于園參和西洋參的區(qū)分，以及不同年份園參的鑒別。

1.1.2.4 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)具有廣適性好、分離能力強(qiáng)、檢測(cè)限低、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，是植物代謝組學(xué)中最重要的分離和鑒定的分析方法之一，在園參年份判別的研究中應(yīng)用也極為廣泛。Xiu等[24]采用HPLC-MRM/MS技術(shù)對(duì)不同生長(zhǎng)年份園參中14種皂苷類成分進(jìn)行定量研究，并基于人參皂苷Rg1、Rb1、Rb2、Rc、20(S)-Rf、20(S)-Rh1及Rb3在3年生和5年生園參中含量的顯著差異，建立了PLS-DA模型，準(zhǔn)確的判別了園參的年份。張博等[25]采用RRLC-Q-TOF-MS技術(shù)發(fā)現(xiàn)，3年生和5年生園參中人參皂苷Rb1、Rh4、Rk2等11種成分存在顯著性差異，其中人參皂苷 Rb1、Rk2和 Rh4等成分含量呈現(xiàn)隨生長(zhǎng)年限增長(zhǎng)而增加的趨勢(shì)，人參皂苷Rg1、Rf、Rh1、Rb1等10種成分在不同產(chǎn)地間存在顯著性差異，而基于上述差異可以為人參生長(zhǎng)年限和產(chǎn)地的判斷提供一定的信息。Huang等[26]采用UHPLC-QTOF/MS技術(shù)對(duì)2～6年生園參的整體代謝物質(zhì)進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)基于35種與糖類、有機(jī)酸、脂類、氨基酸和皂苷相關(guān)的成分含量存在顯著差異。糖類成分的積累與園參生長(zhǎng)年限呈顯著正相關(guān)(R2>0.9)；3～5年生園參中氨基酸和皂苷類成分含量高于2、6年生園參，而丙二酰人參皂苷Rd和丙二酰人參皂苷Rc/Rb2含量卻隨著生長(zhǎng)年限的增加呈逐漸減少趨勢(shì)；3～5年生園參中以氨基酸和有機(jī)酸含量差異較為明顯。此外，該研究發(fā)現(xiàn)了1種2年生園參的缺失性成分，該成分有可能作為鑒別2年生園參的依據(jù)。還建立了差異代謝物峰面積總和與園參生長(zhǎng)年限之間的回歸方程，用以預(yù)測(cè)和判別3～6年生園參樣本的生長(zhǎng)年限，準(zhǔn)確率高達(dá)91.7%。

1.1.2.5 其他方法 雙向電泳技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)對(duì)不同年份園參蛋白質(zhì)表達(dá)差異的研究。麻銳等[27]利用雙向電泳技術(shù)分離了1～5年生園參根蛋白，重點(diǎn)分析了3年生和5年生根之間的蛋白質(zhì)組學(xué)差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在園參生長(zhǎng)發(fā)育的過程中存在過氧化氫酶、果膠酯酶等多種蛋白的差異性表達(dá)，此外，新穎的電子鼻技術(shù)近年來在園參的年份判別研究中也有所應(yīng)用。Cui等[28]同時(shí)采用電子鼻技術(shù)和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)2～5年生園參中揮發(fā)性成分的種類和含量進(jìn)行了比較，基于差異性成分建立了可以有效區(qū)分園參生長(zhǎng)年限的判別模型和樹狀圖，還通過分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果初步發(fā)現(xiàn)，電子鼻技術(shù)較氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)能更好的應(yīng)用于園參年份的判別研究。

1.2 林下山參的年份判別

1.2.1 顯微鑒別 基于對(duì)林下山參顯微結(jié)構(gòu)及其特征物的觀察，可以快速比較林下山參的生長(zhǎng)年份。Liang等[29]從1～6年生二馬牙林下山參主根石蠟切片中觀測(cè)到了與其年份相對(duì)應(yīng)的清晰年輪，然而當(dāng)參齡超過6年時(shí)年輪不再清晰，不能精確地反映林下山參生長(zhǎng)年限。

1.2.2 成分鑒別 林下山參具有和野山參相似的品質(zhì)和成分，研究表明光譜法、液相色譜法、質(zhì)譜法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用及分子鑒別等方法適用于不同年限林下山參成分的分析，可以從多水平多角度實(shí)現(xiàn)林下山參年份的直接或間接判別。

1.2.2.1 光譜法 光譜法在林下山參年份判別研究中的應(yīng)用以紅外光譜法為主，基于組織橫切面紅外吸收光譜的差異，可以真正實(shí)現(xiàn)林下山參年份的無損識(shí)別。而研究表明不同生長(zhǎng)年限的林下山參同一掃描部位的近紅外吸收光譜有所不同，當(dāng)年份一致而掃描部位不同時(shí)其吸收光譜也不一樣。卜海博等[30]發(fā)現(xiàn)林下山參主根上部為無損識(shí)別和生長(zhǎng)年限判別掃描的最佳部位，并通過掃描采集了12、15年生林下山參的近紅外光譜，在對(duì)光譜進(jìn)行預(yù)處理后結(jié)合主成分分析-馬氏距離法，建立了12、15年生林下山參的無損識(shí)別模型，并實(shí)現(xiàn)了準(zhǔn)確分類。紫外光譜法則主要用于林下山參中總皂苷、淀粉、糖類成分含量的測(cè)定。Pan等[31]通過測(cè)定不同生長(zhǎng)年限林下山參和園參的供試品溶液在580 nm處的紫外吸收，發(fā)現(xiàn)林下山參中淀粉的量不如園參，且林下山參的生長(zhǎng)年限越長(zhǎng)，所含淀粉量越低。

1.2.2.2 液相色譜法 液相色譜法在林下山參的化學(xué)成分分析中也較為常用，多用于皂苷類成分的定量檢測(cè)，再通過對(duì)測(cè)定結(jié)果的分析可以初步得到成分含量隨年份的變化規(guī)律。余江鋒等[22]采用HPLC法測(cè)定了8～18年林下山參中人參皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd 8種成分的含量，發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rb1、Rb2的含量及8種皂苷的總量隨生長(zhǎng)年限的增長(zhǎng)而明顯增加，人參皂苷Rg1含量隨生長(zhǎng)年限的增長(zhǎng)先增加后減少，在13～14年時(shí)達(dá)到峰值，人參皂苷Re在15年時(shí)達(dá)到峰值，并提出可以根據(jù)人參皂苷Rg1含量和人參皂苷Re、Rb1與人參皂苷Rg1的含量比值初步推測(cè)其生長(zhǎng)年限。楊文志等[32]通過比較林下山參和園參的HPLC圖譜發(fā)現(xiàn)，林下山參中人參皂苷Rb1的含量明顯高于園參(P<0.01)，且隨著參齡的增長(zhǎng)而增加，而Rg1和Re則表現(xiàn)為下降趨勢(shì)。

1.2.2.3 質(zhì)譜法 質(zhì)譜分析可與蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)結(jié)合，用于分析不同生長(zhǎng)年限林下山參中的差異性表達(dá)蛋白。Ma等[33]基于蛋白組學(xué)技術(shù)結(jié)合MALDI-TOF/TOF MS分析，發(fā)現(xiàn)林下山參中192個(gè)差異蛋白的表達(dá)量隨年份增長(zhǎng)而增加，并推測(cè)與能量代謝、人參皂苷生物合成和應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)。其結(jié)果還表明隨著生長(zhǎng)年限的增加，林下山參的外觀、蛋白表達(dá)、皂苷合成能力等與野山參相似度越高，初步證明了林下山參可以作為野山參替代資源的可能性。

1.2.2.4 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用 與園參一樣，液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在林下山參的年份判別研究中應(yīng)用也極為廣泛，不僅可以對(duì)整體代謝物進(jìn)行分析，最大程度的獲取差異性成分，還能結(jié)合統(tǒng)計(jì)學(xué)方法建立有效的年份判別模型，是目前國內(nèi)外最常用的前沿分析方法。Chang等[34]通過UHPLC/QTOF-MS技術(shù)分析了6～18年生林下山參葉中的成分，發(fā)現(xiàn)基于人參皂苷Rb1、Rc、Rb2、Rd、Re、F2等成分含量的顯著差異(P<0.05)，不同年份林下山參葉可以被明確劃分為6～10、11～13、14～18年 3個(gè)年份區(qū)間，其中人參皂苷Rb1、Rc、Rb2、Rd等8種成分在6～10年內(nèi)含量較高，人參皂苷Re、三七皂苷Fe、三七皂苷Fd在11～13年內(nèi)含量較高，人參皂苷F2則在14～18年內(nèi)含量較高。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，6～10年生參葉主要在人參皂苷Re、三七皂苷R1等10種成分含量上存在明顯差異，11～13年生參葉中人參皂苷Rc、Rb2、Rd等8種成分含量差異顯著，14～18年生參葉中人參皂苷Rb1、Rc、Rb2、Rd等10種成分含量存在明顯差異，根據(jù)這些差異可以很好的判別和預(yù)測(cè)各林下山參樣本的生長(zhǎng)年份，為林下山參生長(zhǎng)年限的無損判別提供了重要參考。常相偉等[35]基于UPLC-Q-TOF/MS技術(shù)還發(fā)現(xiàn)11～15年生林下山參蘆頭中的代謝物組成也存在明顯差異，其中包含了290個(gè)與年份相關(guān)的差異代謝物，基于這些代謝物在含量上的顯著差異，再通過PCA和OPLS-DA等統(tǒng)計(jì)學(xué)方法建立了年份判別模型，有效的區(qū)分了不同年份的林下山參樣本，為林下山參生長(zhǎng)年限的判別又提供了一種新的方法。Zhu等[36]采用UPLC-QTOF/MS技術(shù)從林下山參根部篩選出了棕櫚烯酸、24-羥基齊墩果酸、人參皂苷Re1、Re2、Rs1和丙二酰人參皂苷 Rb2、Rb1異構(gòu)體7個(gè)與年份相關(guān)的差異代謝物，建立了OPLS-DA模型，成功將12年生和20年生林下山參進(jìn)行了區(qū)分。

1.2.3 分子鑒別 林下山參在分子水平上的年限刻錄主要體現(xiàn)在端粒長(zhǎng)度的變化上。黃璐琦課題組基于人參端粒和端粒酶的分子機(jī)制，探索了不同產(chǎn)地和品種的林下山參端粒長(zhǎng)度與年限的相關(guān)性。其中Liang等[29]首先發(fā)現(xiàn)，二馬牙林下山參蘆頭下約1厘米主根處的端粒長(zhǎng)度是最好的年齡指標(biāo)，該長(zhǎng)度隨著林下山參年限的增長(zhǎng)逐漸延長(zhǎng)，可用于2～8年生林下山參的年份判別。程春松[37]發(fā)現(xiàn)1～14年生石柱參的平均端粒長(zhǎng)度隨著年限的增長(zhǎng)而縮短，表明林下山參端粒長(zhǎng)度的變化趨勢(shì)受到品種的影響。此外，該研究還基于端粒分子技術(shù)建立了以林下山參生長(zhǎng)年限和端粒長(zhǎng)度為自變量的數(shù)學(xué)模型，并在年份刻度明顯、生長(zhǎng)環(huán)境相似的維管植物赤芍中得以技術(shù)重現(xiàn)，證明了平均端粒的縮短可以作為年份鑒定的指標(biāo)。該課題組研究從分子水平上提供了一種可操作、可量化、科學(xué)準(zhǔn)確而又近乎無損識(shí)別的林下山參年份判別技術(shù)，對(duì)于林下山參內(nèi)在質(zhì)量的科學(xué)把控具有重要意義。

此外，荊禮等[38]通過比較多種內(nèi)參基因表達(dá)量的穩(wěn)定性，發(fā)現(xiàn)延伸因子1-α及V型質(zhì)子ATP酶亞基B1在各年份林下山參中表達(dá)量最穩(wěn)定，從而提出可以將其作為矯正實(shí)時(shí)熒光定量PCR數(shù)據(jù)的內(nèi)參基因，有助于提高基因表達(dá)分析的準(zhǔn)確性，也為林下山參分子水平上的年份鑒別研究奠定了基礎(chǔ)。

2 園參、林下山參和野山參的判別

2.1 顯微鑒別 顯微鑒別是一種基于組織切片或粉末的鑒別方法，這種方法以觀察細(xì)胞中后含物特征、數(shù)量為主。研究表明，園參、林下山參和野山參的顯微特征有所不同。徐世義等[39]發(fā)現(xiàn)，園參、林下山參和野山參主根的木質(zhì)部和須根的橫切面特征存在差別，主要表現(xiàn)為主根橫切面木質(zhì)部比例隨參齡增長(zhǎng)而有所增加，主根簇晶、木質(zhì)部導(dǎo)管的數(shù)量及輻射狀排列的連續(xù)程度均隨生長(zhǎng)年限的增加呈顯著增加趨勢(shì)，而淀粉粒的數(shù)量則隨年份增加而顯著減少。

此外，X射線相襯顯微成像技術(shù)具有無損、原位、三維定量等優(yōu)點(diǎn)，文獻(xiàn)[40]報(bào)道可以用于園參、野山參等的三維顯微結(jié)構(gòu)的定量分析，并同時(shí)掌握草酸鈣簇晶的大小和位置分布信息，在物種鑒定和年齡鑒定等方面具有重要意義。

2.2 紅外光譜鑒別 紅外光譜具有高效、快速、可進(jìn)行無損檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，也可用于園參、林下山參和野山參的鑒別。Liu等[41]發(fā)現(xiàn)，在1 200～1 000 cm-1范圍內(nèi)，野山參和林下山參于1 049 cm-1處有最強(qiáng)峰，而園參的最強(qiáng)峰則在1 017 cm-1處；野山參和林下山參在1 318 cm-1處有一極強(qiáng)峰，而園參沒有；野山參和林下山參在1 628 cm-1處有一尖峰，而園參相應(yīng)位置卻為一拱形峰。Zhang等[42]發(fā)現(xiàn)不同生境的人參在紅外光譜和二級(jí)衍生光譜1 800～400 cm-1范圍內(nèi)，以及二維同步相關(guān)譜1 730～1 045 cm-1和1 730～1 410 cm-1范圍內(nèi)差異明顯。基于上述光譜形狀和強(qiáng)度的差異，可能作為園參、林下山參和野山參快速識(shí)別的依據(jù)。而通過與統(tǒng)計(jì)學(xué)方法的進(jìn)一步結(jié)合，可更準(zhǔn)確、快速、有效的識(shí)別園參、林下山參和野山參。另外，卜海博等[30]采集了園參和林下山參的近紅外光譜，并對(duì)光譜進(jìn)行平滑和多元散射校正等預(yù)處理后，結(jié)合主成分分析-馬氏距離法進(jìn)行判別分析，所建立的判別模型可以實(shí)現(xiàn)園參和林下山參的準(zhǔn)確分類。其后續(xù)研究采用顯微紅外光譜技術(shù)也實(shí)現(xiàn)了林下山參和園參的無損判別[43]。

2.3 成分鑒別 基于成分組成和含量差異，研究者們先后報(bào)道了多種判別園參、林下山參和野山參的方法，主要以液相色譜法和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的方法為主。徐世義[44]建立了野山參、林下山參和園參的HPLC指紋圖譜，指出園參與林下山參差別較大，園參總體成分含量明顯較林下山參低；林下山參與野山參指紋圖譜相似，但野山參所含組分在數(shù)量及含量上均高于林下山參，且野山參在保留時(shí)間為13 min左右有1個(gè)專屬性色譜峰。因此通過HPLC指紋圖譜的比對(duì)，也可將園參、林下山參和野山參初步區(qū)分開。Xu等[45]采用UPLC-QTOF-MS/MS技術(shù)結(jié)合主成分分析等對(duì)4～7年生園參和15年生林下山參的代謝物差異進(jìn)行了研究，基于代謝物差異有效區(qū)分了園參和林下山參，并篩選了人參皂苷Ra1等12種差異性成分。朱海林[46]采用UPLC-QTOF-MS/MS技術(shù)對(duì)12～20年生林下山參與4～6年生園參之間的成分差異進(jìn)行研究，篩選出三七皂苷R1、丙二酰人參皂苷Rb2等11種區(qū)別于園參的林下山參差異性成分，其中9種成分未在園參中檢出，而園參中存在人參環(huán)氧炔醇等6種區(qū)別于林下山參的特異性成分。其后續(xù)研究[36]采用UPLC-QTOF/MS技術(shù)研究了4～6年生園參、12年和20年生林下山參整體代謝物的差異，篩選出了α-亞麻酸、油酸、亞油酸、人參環(huán)氧炔醇、人參皂苷Ro、Rf等17個(gè)園參和林下山參的差異代謝物，并建立了OPLS-DA模型，成功將園參和12年生林下山參、園參和20年生林下山參進(jìn)行了區(qū)分。其中α-亞麻酸、油酸、亞油酸和人參環(huán)氧炔醇均是園參和12年生林下山參、園參和20年生林下山參的差異代謝物，可能作為鑒別園參和林下山參的依據(jù)。

此外，還有研究基于質(zhì)譜法、凝膠電泳法[47]等對(duì)園參、林下山參和野山參中的無機(jī)元素、氨基酸、蛋白質(zhì)等成分種類和含量進(jìn)行比較，其比較結(jié)果也有利于不同生境人參的準(zhǔn)確判別。

2.4 分子鑒別 近年來，直接擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性(DALP)分子標(biāo)記技術(shù)日趨成熟，使得人們可以從分子水平上認(rèn)識(shí)不同生境人參之間的差異，也為其鑒別提供了良好的平臺(tái)。王帥等[48]采用DALP分子標(biāo)記技術(shù)，建立了林下山參與園參的DALP指紋鑒定圖譜，經(jīng)對(duì)比篩選出林下山參共有而園參沒有的6條特異性DNA片段，可以作為鑒別林下山參與園參的有效依據(jù)。Li等[49]通過對(duì)不同人參樣品線粒體nad7內(nèi)含子3區(qū)進(jìn)行多重比對(duì)，發(fā)現(xiàn)了俄羅斯野山參特有的SNP位點(diǎn)，并基于該位點(diǎn)的差異成功區(qū)分了園參和野山參?；谏鲜鑫墨I(xiàn)資料，對(duì)不同生長(zhǎng)年份、生境人參的判別研究進(jìn)行歸納，見表1。

表1 不同生長(zhǎng)年份、生境人參的判別研究

3 結(jié)語

園參、林下山參和野山參的栽培方式和生長(zhǎng)環(huán)境不同，常見的商品年限也有所差異。國內(nèi)外研究表明，不同生長(zhǎng)年份、不同生境的人參在多種成分種類和含量上存在差異，顯微特征及吸收光譜也有所不同，而基于這些差異再結(jié)合統(tǒng)計(jì)學(xué)方法可以建立科學(xué)的判別模型，有效判別不同生境的人參及其生長(zhǎng)年限。目前研究者們已不局限于對(duì)人參皂苷等單一活性成分的研究，而更傾向于對(duì)整體代謝物質(zhì)的比較，力求尋找到與年份、品種、產(chǎn)地相關(guān)的差異性或特異性指標(biāo)成分，為不同年份、不同品種、不同產(chǎn)地人參間的質(zhì)量和價(jià)值差異作出科學(xué)解釋。

如何科學(xué)準(zhǔn)確、快速無損地識(shí)別人參產(chǎn)地、品種和生長(zhǎng)年限等信息，一直是研究者們努力探索的課題。但就目前而言，野山參年份判別相關(guān)的研究甚少，且與移山參等趴貨的差異性成分仍不明確，有待深入系統(tǒng)的探討。此外，國內(nèi)外文獻(xiàn)中對(duì)半野生和野生人參的稱謂都比較混亂，如野生山參、野山人參、林下參、wild ginseng、mountain wild ginseng、wild grown ginseng、cultured/cultivated wild ginseng、forest ginseng、mountain cultivated ginseng等，并未指出其具體的生境，也幾乎沒有樣本圖，這給樣本來源的準(zhǔn)確性判斷帶來了極大困擾。建議在今后的比較分析研究中，敘述樣本采集環(huán)境，規(guī)范統(tǒng)一樣本稱謂，并在文章中保留樣本的圖片資料。