蒙藥自擬處方泵嘎日-17的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)性研究

王懷剛 王懷偉 白雅靜

【摘 要】 目的：建立蒙藥制劑泵嘎日-17中熊膽和黃柏的質(zhì)量控制方法。方法：采用薄層色譜鑒別方法（TLC）對制劑中熊膽進(jìn)行定性鑒別，采用高效液相色譜法（HPLC）對制劑中黃柏進(jìn)行含量測定。結(jié)果：泵嘎日-17制劑中熊膽的TLC法分離良好，斑點(diǎn)清晰;HPLC法測定黃柏中鹽酸小檗堿在 5.13～76.96 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系，線性回歸方程為Y=25890X-27638.8（R2=0.9992，n=5），平均加樣回收率為95.6%，RSD為1.8% （n=9）。結(jié)論：該方法科學(xué)、簡便、專屬性較強(qiáng)，可有效控制泵嘎日-17的質(zhì)量。

【關(guān)鍵詞】 泵嘎日-17;黃柏;熊膽;薄層色譜法;高效液相色譜法

【中圖分類號】R291.2??? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2021）17-0053-05

Study on the Correlation of Quality Standard of Mongolian Medicine Self-made Prescription Benggari-17

WANG Huaigang1*WANG Huaiwei2 BAI Yajing1

1.Hulunbuir Institute for food and drug inspection，Hulunbuir 021000，China;

2.Zalantun People's Hospital，Zalantun 162650，China

Abstract：Objective To establish a method for the quality control of bear bile and cortex phellodendri in Mongolian medicine preparation benggari-17. Methods Bear Bile was identified by thin layer chromatography（TLC），and cortex？phellodendri was quantitatively identified by high-performance liquid chromatography（HPLC）. Results The TLC method was good and the spots were clear，and the HPLC method liner relationship between berberine hydrochloride and peak area was good in the range of 5.13～76.96μg/mL. The linear regression equation was y = 25890X-27638.8（R2 = 0.9992，n = 5），the average recovery was 95.6% and RSD was 1.8%（n=9） .Conclusion The method is scientific，simple and specific，and can effectively control the quality of Mongolian medicine preparation benggari-17.

Keywords：Benggari-17;Cortex Phellodendri;Bear Bile;TLC;HPLC

泵嘎日-17為呼倫貝爾市中蒙醫(yī)院自制制劑，處方由黃柏、麥冬、人工牛黃、熊膽粉、紫花地丁等17味藥組成，具有清熱解毒的功效，臨床適用于急性膽囊炎的治療，在蒙醫(yī)醫(yī)院臨床為長期使用的制劑，臨床療效顯著[1]。蒙醫(yī)學(xué)認(rèn)為，膽為希拉之物質(zhì)基礎(chǔ)，具有消化之功能，據(jù)希拉之位的腑器，也是病變希拉竄行之道。因此，膽病多由希拉熱引起。據(jù)《四部醫(yī)典》記載“當(dāng)醫(yī)治肺、肝、膽病時，應(yīng)以清熱邪為主”[2]。方中熊膽具有清熱解毒、止痛、明目之功效，臨床用于治療肝熱熾盛，熱極生風(fēng)所致的驚風(fēng)，抽搐。肝熱，目赤腫痛， 以及用于瘡癰腫痛等癥[3]。而黃柏具有清熱燥濕、瀉火解毒、消腫祛腐的功效。臨床用于治療濕熱瀉痢、黃疸、帶下、熱淋、痔漏、盜汗、遺精等癥[4]。兩味藥在本方治療急性膽囊炎中發(fā)揮主藥作用。研究采用薄層色譜法和高效液相色譜法對制劑中的熊膽和黃柏進(jìn)行定性與定量研究，經(jīng)方法驗(yàn)證確定了理想的實(shí)驗(yàn)條件，表明該方法重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)，并且方中其他成分無干擾，對泵嘎日-17的質(zhì)量控制起到了很好的效果。

1 儀器與材料

1.1 儀器 KQ5200DE型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;Sartorius BP211D 型電子分析天平;Sartorius BS224S型電子分析天平;202型電熱恒溫干燥箱（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）;島津LC-20AT高效液相色譜儀。

1.2 材料 泵嘎日-17制劑由呼倫貝爾市中蒙醫(yī)院制劑室提供;鹽酸小檗堿對照品（批號：110713-201212 含量：86.7%）、熊去氧膽酸對照品（批號：110755-201704）、鵝去氧膽酸對照品（批號：110806-201708）和膽酸對照品（批號：100078-201415）均購自中國食品藥品檢定研究院;乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 熊膽的薄層色譜鑒別

2.1.1 對照品溶液的制備 取熊去氧膽酸、膽酸、鵝去氧膽酸對照品，分別加甲醇制成每1 mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。

2.1.2 樣品溶液的制備 取本品粉末1g，加30 mL甲醇，溫?zé)崾谷芙?，放冷，過濾，濾液蒸干，加10 mL氫氧化鈉溶液（1→ 5），加熱回流1 h，放冷，滴加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值2～3后，乙酸乙酯試劑振搖提取4次，每次10 mL，合并提取液，蒸干，殘?jiān)? mL甲醇溶解，作為樣品溶液。

2.1.3 陰性對照溶液的制備 取1g不含熊膽的處方樣品，同樣品的制備方法制成熊膽陰性對照溶液。

2.1.4 薄層色譜條件及結(jié)果 照薄層色譜法[5]（《中國藥典》2015年版四部通則0502），吸取供試品溶液2 μL、對照品溶液2 μL、陰性對照品2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以異辛烷-乙醚-冰醋酸-正丁醇-水（10∶5∶5∶3∶1）的上層溶液展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱約10 min。置紫外光燈365 nm下檢視（溫度：27 ℃;濕度：32%）。結(jié)果樣品色譜中，在與熊去氧膽酸、膽酸、鵝去氧膽酸對照品的相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。結(jié)果如圖1所示。

2.2 黃柏的含量測定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性條件 填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，流動相為乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀（25∶75），流速為1 mL/min，檢測波長為265 nm，理論塔板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。

2.2.2 溶液的制備

2.2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱定鹽酸小檗堿對照品適量，加鹽酸-甲醇（1∶100） 的混合溶液制成每1 mL含50 ug的溶液，即得。

2.2.2.2 樣品溶液的制備 精密稱定本品細(xì)粉約0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入25 mL鹽酸-甲醇（1∶100）的混合溶液，密塞，稱定重量，超聲處理30 min（功率140 W，頻率4 kHz），放冷，再稱定重量，用上述混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 專屬性考察 分別取陰性樣品供試溶液（除不加黃柏外其余幾份藥材按原方配比）、泵嘎日-17供試樣品溶液、鹽酸小檗堿對照品溶液各5 μL，注入液相色譜儀。按上述色譜條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，陰性樣品對鹽酸小檗堿含量測定結(jié)果無干擾。結(jié)果如圖2所示。

2.2.4 線性范圍 精密稱定鹽酸小檗堿對照品2.5 mg（實(shí)際取2.565 mg），置10 mL量瓶中，加（鹽酸-甲醇 1∶100）使溶解并稀釋至刻度，搖勻（相當(dāng)于0.2565 mg/mL）。精密吸取上述對照品溶液0.5、1、2 mL分別置25 mL量瓶中，吸取2 mL、3 mL分別置10 mL量瓶中，加（鹽酸-甲醇1∶100）混合溶液至刻度，搖勻，配置成濃度為 5.13、10.26、20.52、51.30、76.96 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列，按上述色譜條件測定，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程：Y=25890X-27638.8，R2=0.9992，n=5。結(jié)果表明鹽酸小檗堿在濃度為 5.13～76.96 μg/ mL 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.2.5 精密度 取同一批號樣品（批號：20190912）6份，按樣品溶液制備方法制備樣品，照上述色譜條件及方法進(jìn)行測定每份樣品的含量，平均含量為2.2366 mg/g，RSD為1.81%表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.6穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取樣品溶液5 μL，按上述色譜條件，分別于制備0、2、4、8、10、12 h進(jìn)行色譜測定，記錄色譜峰面積，從數(shù)據(jù)可見，樣品中鹽酸小檗堿在12 h內(nèi)峰面積基本穩(wěn)定不變，RSD為0.9%（n=6）。

2.2.7 加樣回收率試驗(yàn) 取已知鹽酸小檗堿含量的樣品（批號：20190912 含量為2.2366 mg/g）粉末6份，每份約為0.5 g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，分別精密加入用（鹽酸-甲醇1∶100）混合溶液配制的鹽酸小檗堿對照品溶液（C=0.5029 mg/mL）1、1、1、2、2、2、4、4、4 mL，按照樣品溶液制備方法制備樣品溶液。按上述色譜條件測定，記錄色譜圖，計(jì)算回收率，平均回收率為95.6%，RSD為1.8%（n=9）。結(jié)果見表1。

2.2.8 耐用性實(shí)驗(yàn) 用不同型號，不同廠家的色譜柱，取樣品重0.5026 g的供試品，按樣品溶液制備方法制備樣品，以上述色譜條件進(jìn)樣，測定含量。結(jié)果見表2。

2.2.9 樣品測定 依據(jù)建立的鹽酸小檗堿含量測定方法，對三批次（批號為20190920、20190912、20190905）泵嘎日-17中的鹽酸小檗堿含量進(jìn)行測定。樣品測定結(jié)果見表3。

2.2.10 藥材含量的測定 同法對生產(chǎn)上述三批樣品的黃柏藥材進(jìn)行了含量測定，鹽酸小檗堿的含量結(jié)果為39.3166 mg/g。測定結(jié)果見表4。

3 討論

3.1 指標(biāo)成分的選擇 黃柏具有清熱燥濕、瀉火除蒸、解毒療瘡的功效，用于治療濕熱泄痢、黃疸尿赤、骨蒸勞熱等癥，而熊膽具有清熱解毒、息風(fēng)止痙、清肝明目的功效，其所含膽汁酸鹽可顯著增加膽汁分泌量，對總膽管、括約肌有松弛作用，鵝去氧膽酸有溶解膽結(jié)石的作用[6]。二者均對膽囊炎具有一定的治療作用，故選擇二者進(jìn)行泵嘎日-17的質(zhì)量控制指標(biāo)。

3.2 含量測定檢測波長的選擇 通過考察鹽酸小檗堿的紫外光譜得出，鹽酸小檗堿在265 nm處有最大吸收，故含量測定選用265 nm作為含量測定的檢測波長。

3.3 含量測定流動相的選擇 前期預(yù)試驗(yàn)分別考察了甲醇-水（25∶75）、乙腈-水（25∶75）、甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫鉀（25∶75）、乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀（25∶75）作為流動相，結(jié)果選用甲醇-水、乙腈-水為流動相時，鹽酸小檗堿色譜峰型不理想，拖尾較嚴(yán)重;而甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫鉀作為流動相時，由于甲醇在低波長處對鹽酸小檗堿色譜峰型有干擾，沒有乙腈作為流動相時的色譜峰理想，故選用乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀（25∶75）作為流動相。

3.4 含量測定提取方法的選擇 參照了2015年版《中國藥典》大補(bǔ)陰丸的含量測定方法[7]，分別考察了以鹽酸-甲醇（1∶100）的混合溶液為提取溶劑，15、30、45、45、60、75 min超聲處理提取，結(jié)果發(fā)現(xiàn)鹽酸小檗堿在超聲提取30 min后含量基本不變，故確定超聲提取時間為30 min。

3.5 含量測定轉(zhuǎn)移率和含量范圍 從樣品含量測定結(jié)果和生產(chǎn)對應(yīng)批次樣品的藥材含量測定結(jié)果分析比較，通過轉(zhuǎn)移率與2015年版《中國藥典》一部中黃柏鹽酸小檗堿含量限值計(jì)算[7]，擬定泵嘎日-17中黃柏以鹽酸小檗堿計(jì)，不得少于1.4 mg/g。

綜上，研究利用薄層色譜法和高效液相色譜法，分別對泵嘎日-17中主藥熊膽和黃柏進(jìn)行了定性定量測定，建立了泵嘎日-17中熊膽和黃柏的質(zhì)量控制方法，通過試驗(yàn)研究結(jié)果看出，薄層色譜對熊膽的定性鑒別方法科學(xué)、簡便、專屬性強(qiáng);高效液相色譜法對黃柏的定量鑒別方法科學(xué)、穩(wěn)定、重現(xiàn)性好。故本研究可對蒙藥制劑泵嘎日-17的質(zhì)量控制提供方法學(xué)基礎(chǔ)，對促進(jìn)蒙藥標(biāo)準(zhǔn)化，提高蒙藥發(fā)展水平具有一定的積極意義。

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（收稿日期：2021-01-20 編輯：劉 斌）

基金項(xiàng)目：

作者簡介：王懷剛（1987-），男，滿族，碩士研究生，主管中醫(yī)師，研究方向?yàn)橹忻伤帢?biāo)準(zhǔn)化研究。E-mial：47420045@qq.com