臨床血液檢驗(yàn)中應(yīng)用兩種細(xì)菌鑒定藥敏試驗(yàn)的差異性分析

胡衛(wèi)兵，邢軍華，李偉

（仙桃市第一人民醫(yī)院輸血科，湖北 仙桃 433000）

近年來，由于抗生素濫用現(xiàn)象越來越嚴(yán)重，致使諸多抗生素自身敏感性及耐藥性出現(xiàn)明顯變化，進(jìn)而影響臨床檢驗(yàn)工作[1]。每種細(xì)菌對(duì)非同種藥物敏感性不同，盡管同一細(xì)菌的不同菌株，其形成的細(xì)菌敏感度同樣存在差異，由此可知，臨床治療及診斷過程中，細(xì)菌鑒定的選擇尤為重要[2]?，F(xiàn)階段，臨床常用的細(xì)菌鑒定方法包括血清學(xué)凝集試驗(yàn)、鏡檢、直接藥敏試驗(yàn)與常規(guī)檢驗(yàn)等[3]。藥敏試驗(yàn)是指利用血液樣本中細(xì)菌抗藥敏感度開展相應(yīng)分析，以此準(zhǔn)確鑒別細(xì)菌類型，該方法具有操作簡(jiǎn)單、方便、快捷、準(zhǔn)確度高等特點(diǎn)[4]?；诖耍狙芯恐荚诜治霾煌?xì)菌鑒定藥敏試驗(yàn)在臨床血液檢驗(yàn)中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2018年4—11月本院收治的發(fā)熱并存在全身感染癥狀患者250例，其中男160例，女90例；年齡18～65歲，平均（35.41±6.35）歲；收集所選患者血液標(biāo)本，僅進(jìn)行1次收集，每例患者收集30 mL血液，冷藏保存標(biāo)本，并于短時(shí)間內(nèi)送至檢驗(yàn)科檢查。

1.2 方法 每份血液標(biāo)本分別進(jìn)行常規(guī)藥敏實(shí)驗(yàn)與直接藥敏試驗(yàn)檢測(cè)。

1.2.1 常規(guī)藥敏試驗(yàn)方法 分別于血平板、巧克力平板及麥康凱平板上放置本研究收集的陽性血液樣本并進(jìn)行接種，孵育環(huán)境如下：溫度36℃，時(shí)間16～22 h，6.0%的CO2，于平板上涂抹菌落，并實(shí)施格蘭染色，獲取檢測(cè)結(jié)果后選擇合適的酶。最后鑒定利用Walkaway系統(tǒng)藥敏試驗(yàn)。

1.2.2 直接藥敏試驗(yàn)方法 直接藥敏試驗(yàn)檢測(cè)及培養(yǎng)均通過BACTEC9240系統(tǒng)，利用該系統(tǒng)培養(yǎng)、檢測(cè)標(biāo)本。系統(tǒng)檢測(cè)出陽性樣本后，立即采用消毒注射器抽取陽性樣本10 mL，后置入無菌試管中對(duì)細(xì)菌進(jìn)行分離操作，1 600 r/min離心6 min，收集上層清液；29 000 r/min離心13 min，去除上清液，通過PBS洗滌，經(jīng)2次沉淀后重懸。應(yīng)用革蘭氏染色20μL懸液涂片，然后利用顯微鏡觀察。若格蘭陽性均呈鏈狀，則第1次藥敏試驗(yàn)材料為MH+6%羊血的血瓶本，獲取檢測(cè)結(jié)果后，選擇合適的酶，后調(diào)整菌液濃度至6.0×105cuf/L，然后于NC21綜合板上接種，最后開展細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)。常規(guī)菌種，于MH平板上接種，通常滴懸液1～3滴，后利用無菌試紙均勻涂抹，最終置于藥敏紙片上。通過2005NCCLSI標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)確判斷耐藥性及敏感度。

1.3 觀察指標(biāo) 統(tǒng)計(jì)不同檢測(cè)方法菌種檢出符合率及藥敏試驗(yàn)結(jié)果與抗生素敏感度符合率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，行χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢測(cè)方法菌種檢出符合率 250份樣品中，經(jīng)有效檢測(cè)共220份陽性樣品。直接法檢測(cè)的革蘭陰性球菌及革蘭陽性桿菌檢出符合率分別為92.00%和96.43%，與常規(guī)法比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表1 兩種檢測(cè)方法菌種檢出符合率比較[n（%）]Table 1 Comparison of the coincidence rate of the two detection methods for the detection of strains[n(%)]

2.2 兩種檢測(cè)方法藥敏試驗(yàn)結(jié)果與抗生素敏感度符合率比較 直接法檢測(cè)的革蘭陰性球菌、革蘭陽性桿菌抗生素敏感度符合率分別為97.44%和98.39%，與常規(guī)法比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

表2 兩種檢測(cè)方法藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果與抗生素敏感度符合率比較[n（%）]Table 2 Comparison of the coincidence rate between the results of the two detection methods and the sensitivity of antibiotics[n(%)]

3 討論

近年來，由于細(xì)菌耐藥性越來越強(qiáng)，增加了菌血癥及敗血癥等疾病發(fā)生率，導(dǎo)致由血液疾病引起的死亡率不斷升高[5]?？茖W(xué)、合理、快速的檢測(cè)方法在臨床診治中具有重要作用[6]。目前，臨床主要通過藥敏試驗(yàn)方法鑒定血液中的細(xì)菌。藥敏試驗(yàn)要求嚴(yán)格，且試驗(yàn)條件創(chuàng)造難度大[7]?，F(xiàn)階段，臨床使用范圍相對(duì)較廣的藥敏試驗(yàn)方法包括抗生素濃度梯度法、稀釋法、全自動(dòng)培養(yǎng)檢測(cè)儀及紙片擴(kuò)散法等[8]。本研究中，檢測(cè)系統(tǒng)為BACTEC9240系統(tǒng)，該系統(tǒng)屬于全自動(dòng)血液培養(yǎng)系統(tǒng)，通過熒光探測(cè)技術(shù)對(duì)培養(yǎng)瓶密封，連續(xù)檢測(cè)瓶?jī)?nèi)微生物代謝導(dǎo)致的CO2或O2濃度變化[9]，檢測(cè)微生物正常繁殖狀況，其同樣適用于快速血液檢測(cè)和細(xì)菌其他標(biāo)本中真菌、感染及分枝桿菌檢測(cè)中[10]。

利用BACTEC9240系統(tǒng)開展檢測(cè)，利用兩種實(shí)驗(yàn)方法鑒定血培養(yǎng)陽性標(biāo)本可知，在革蘭陰性球菌及革蘭陽性桿菌鑒別診斷中具有較高的符合率[11]，此外，在腸桿菌種檢測(cè)中，也具有較高的檢出符合率[12]。本系統(tǒng)除可清楚顯示革蘭陰性球菌與革蘭陽性桿菌，同時(shí)具有較高的腸桿菌屬敏感性。本研究結(jié)果表明，250份樣品中，經(jīng)有效檢測(cè)共220份陽性樣品，直接法檢測(cè)的革蘭陰性球菌及革蘭陽性桿菌檢出符合率分別為92.00%和96.43%，與常規(guī)法比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；直接法檢測(cè)的革蘭陰性球菌、革蘭陽性桿菌抗生素敏感度符合率分別為97.44%和98.39%，與常規(guī)法比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。根據(jù)上述結(jié)果分析，兩種檢測(cè)方法具有較高的應(yīng)用價(jià)值。與常規(guī)藥物檢測(cè)方法相比，直接藥敏實(shí)驗(yàn)具有準(zhǔn)確率高、操作簡(jiǎn)單、快捷等特點(diǎn)，通常情況下，直接藥敏試驗(yàn)時(shí)間大約為10 h，與其他檢驗(yàn)相比更短，此外，其為臨床診治提供了重要數(shù)據(jù)參考，以便更好開展治療工作，確保良好的治療效果[13]。

綜上所述，常規(guī)藥敏試驗(yàn)與直接藥敏試驗(yàn)均具有較高的臨床血液細(xì)菌檢出率，但與常規(guī)藥敏試驗(yàn)檢測(cè)方法相比，直接藥敏試驗(yàn)具有操作快捷、簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確度高等特點(diǎn)，值得臨床推廣。