脂聯(lián)素及其受體在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及預(yù)后評(píng)估價(jià)值研究

鄭曉宇

（廣西南寧市第一人民醫(yī)院胸心血管外科，廣西 南寧 530021）

非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）是臨床常見惡性腫瘤，具有較高的發(fā)病率及死亡率，嚴(yán)重危害人類身體健康及生命安全。目前，臨床治療NSCLC常采用手術(shù)、化療、放療等綜合治療手段，可顯著提高患者生存率，但同一治療方法針對(duì)相同病理類型及分期的患者，預(yù)后差異較大[1]。因此，需尋找新的治療靶點(diǎn)，以衡量NSCLC患者預(yù)后指標(biāo)，增強(qiáng)臨床治療效果。研究發(fā)現(xiàn)，脂聯(lián)素（APN）與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，可抑制癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和增殖，同時(shí)，其受體脂聯(lián)素受體l（AdipoR1）和脂聯(lián)素受體2（AdipoR2）在多種腫瘤組織中均有表達(dá)[2]。但關(guān)于脂聯(lián)素及其受體與NSCLC的關(guān)系研究報(bào)道較少?；诖?，本研究旨在探討APN及其受體在NSCLC組織中的表達(dá)及預(yù)后評(píng)估價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取本院2013年3月至2014年10月收治的NSCLC患者40例，其中將手術(shù)切除的肺癌組織作為實(shí)驗(yàn)組，手術(shù)切除的癌旁正常肺組織作為對(duì)照組。其中男26例，女14例；年齡36～64歲，平均年齡（53.47±6.49）歲；臨床分期：Ⅰ/Ⅱ期19例，Ⅲ/Ⅵ期21例；有吸煙史16例，有吸煙后毛細(xì)支氣管炎史11例，合并肺氣腫5例，有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移17例。本研究獲得本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)病理診斷確診者；無嚴(yán)重精神系統(tǒng)疾病者；有認(rèn)知、書寫、溝通能力者；患者及家屬均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：心臟、肝、腎等臟器疾病者；術(shù)前接受抗腫瘤治療，如化療、放療等者；不能配合檢查或中途退出者。

1.3 方法 術(shù)中取手術(shù)切除肺癌組織塊1 cm3，距離癌組織5 cm處選取正常肺組織塊l cm3，常規(guī)10%多聚甲醛緩沖液固定，石蠟包埋備用。采用免疫組化方法檢測(cè)NSCLC組織及癌旁正常肺組織中APN、AdipoR1和AdipoR2表達(dá)，將蠟塊標(biāo)本行4μm厚度的連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟，并修復(fù)抗原，磷酸緩沖鹽溶液（PBS）浸洗3 min，3次，將切片擦干放入盛水的濕盒內(nèi)。滴加10%正常山羊血清封閉液，室溫20 min，甩去多余液體，勿洗。滴加50～100μL一抗（A液：兔抗人脂聯(lián)素受體多克隆抗體），置于4℃冰箱內(nèi)孵育過夜；滴加二抗（B液：生物素標(biāo)記的山羊抗兔IgG），37℃溫箱內(nèi)孵育20 min，PBS清洗3 min，3次；滴加C液，鏈霉菌抗生物素蛋白一過氧化物酶溶液20 min，用PBS浸洗5 min，4次。用3，3一二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色，蘇木素輕度復(fù)染，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，經(jīng)顯微鏡觀察。選擇組織完整、具有代表性的切片拍照，每張切片隨機(jī)選擇3個(gè)視野（光鏡250倍），連續(xù)計(jì)數(shù)癌細(xì)胞100個(gè)，記錄陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，并計(jì)算百分比。陽(yáng)性細(xì)胞百分比，0分：≤5%；1分：6%～25%；2分：26%～50%；3分：51%～75%；4分：＞75%。染色強(qiáng)度：0分：無著色；1分：淺黃色；2分：深黃色；3分：棕褐色。結(jié)果判定：最終評(píng)分=染色強(qiáng)度評(píng)分+陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比評(píng)分。

1.4 觀察指標(biāo) ①分析APN、AdipoR1和AdipoR2在NSCLC組織與正常癌旁組織中的表達(dá)。②分析NSCLC與APN、AdipoR1、AdipoR2的相關(guān)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以“±s”表示，行t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，行χ2檢驗(yàn)，多因素分析采用Logistic回歸方法，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NSCLC組織及癌旁正常肺組織中APN及其受體表達(dá)評(píng)分 實(shí)驗(yàn)組APN、AdipoR1、AdipoR2表達(dá)評(píng)分均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 NSCLC組織及癌旁正常肺組織中APN及其受體表達(dá)評(píng)分比較（±s，分）Table 1 Comparison of APN and its receptor expression scores in NSCLC tissue and normal lung tissue adjacent to cancer(±s,scores)

表1 NSCLC組織及癌旁正常肺組織中APN及其受體表達(dá)評(píng)分比較（±s，分）Table 1 Comparison of APN and its receptor expression scores in NSCLC tissue and normal lung tissue adjacent to cancer(±s,scores)

注：APN，脂聯(lián)素；AdipoR1，脂聯(lián)素受體l；AdipoR2，脂聯(lián)素受體2

組別對(duì)照組（n=40）實(shí)驗(yàn)組（n=40）t值P值A(chǔ)PN 6.02±1.01 2.94±1.12 12.916 0.000 AdipoR1 5.39±1.07 2.41±1.40 10.696 0.000 AdipoR2 5.09±1.17 2.32±1.48 9.286 0.000

2.2 影響NSCLC的線性回歸分析 線性回歸分析顯示，APN、AdipoR1、AdipoR2表達(dá)與NSCLC相關(guān)，見表2。

表2 影響NSCLC的線性回歸分析Table 2 Linear regression analysis affecting NSCLC

3 討論

近年來，NSCLC發(fā)病率不斷升高，其病因尚不明確，常認(rèn)為與吸煙、環(huán)境、電離輻射、既往肺部慢性感染等因素有關(guān)，具有侵襲性、轉(zhuǎn)移性、隱匿性等特點(diǎn)，患者早期伴有胸部腫痛、低熱、咳嗽等癥狀，晚期出現(xiàn)食欲不振、疲乏、咳血，嚴(yán)重危脅患者生命安全[3-4]。因此，需采取積極的治療手段，提高患者生存質(zhì)量，但肺癌的治療除依據(jù)TNM分期外，尚需考慮其他因素影響，尋找能改善預(yù)后的治療靶點(diǎn)尤為重要[5]。

本研究結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組APN、AdipoR1、AdipoR2表達(dá)評(píng)分均低于對(duì)照組（P＜0.05）；線性回歸分析顯示，APN、AdipoR1、AdipoR2表達(dá)與NSCLC相關(guān)。表明APN及其受體在NSCLC組織中低表達(dá)，可用于疾病診斷、預(yù)后評(píng)估。肥胖與癌癥的發(fā)生與發(fā)展有關(guān)，肥胖人群肺癌的發(fā)生率較高，脂肪組織作為能量貯存器官，也具備內(nèi)分泌功能，其分泌的脂肪細(xì)胞因子具有多種生物活性[6-7]。APN是脂肪細(xì)胞特異分泌的內(nèi)源性生物活性分子，具有調(diào)節(jié)糖脂代謝、改善胰島素抵抗、抗炎、抗動(dòng)脈粥樣硬化及抗腫瘤的作用，與冠心病、糖尿病、高血壓、腫瘤等多種疾病密切相關(guān)[8-9]。脂聯(lián)素的生物學(xué)作用是在脂聯(lián)素受體的介導(dǎo)下發(fā)生的，其受體包括AdipoR1、AdipoR2，其中AdipoR1主要表達(dá)在骨骼肌細(xì)胞，對(duì)APN的球狀結(jié)構(gòu)域具有高親和力，但對(duì)全長(zhǎng)APN親和力低，AdipoR2主要表達(dá)在肝細(xì)胞，對(duì)球形及全長(zhǎng)型APN有中等親和力[10]。APN通過其受體激活環(huán)磷酸腺苷（cAMP）、蛋白激酶A（PKA）和單磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）兩條通路，可阻礙腫瘤血管生成，抑制細(xì)胞增殖、遷移，并促使腫瘤細(xì)胞凋亡，發(fā)揮抗癌作用[11]。另一方面，APN可抑制巨噬細(xì)胞的吞噬活性及巨噬細(xì)胞前體的發(fā)育，減輕機(jī)體炎癥反應(yīng)，進(jìn)而減少腫瘤的發(fā)生[12-13]。此外，APN通過直接作用于癌基因和抑癌基因，從而抑制細(xì)胞的增殖及誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡。

綜上所述，APN及其受體在NSCLC組織中呈低表達(dá)，為NSCLC的早期診斷、治療及預(yù)后評(píng)估提供參考依據(jù)。