急性白血病初診及緩解后bcl-2表達(dá)水平的比較及臨床意義

袁冬妹，張敬東，孟美麗，何程明

（贛州市人民醫(yī)院血液內(nèi)科，江西 贛州 341000）

目前化療為臨床治療急性白血?。ˋL）的常用方式，可有效降低機(jī)體腫瘤細(xì)胞含量，達(dá)到抑制疾病發(fā)展的目的，但該病治療難度大且易復(fù)發(fā)，因此，對(duì)患者治療后的預(yù)后評(píng)估至關(guān)重要，可為進(jìn)一步治療提供依據(jù)[1]。白血病基因2（bcl-2）是一種耐藥基因，在AL患者中有較高表達(dá)，既往臨床評(píng)估患者預(yù)后多對(duì)患者骨髓細(xì)胞中的bcl-2水平表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，但應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)，仍有部分患者存在較高的復(fù)發(fā)率[2]。相關(guān)研究表明，治療后，骨髓活檢組織中仍存在成簇分布的原始bcl-2細(xì)胞，因此，聯(lián)合骨髓活檢組織檢測(cè)可進(jìn)一步提升預(yù)后價(jià)值[3]。鑒于此，本研究回顧性分析2016年1月至2020年1月于本院確診并接受治療的91例AL患者的臨床資料，通過(guò)研究急性白血病骨髓活檢組織和骨髓細(xì)胞中bcl-2表達(dá)水平，旨在探討急性白血病初診及緩解后白血病基因2（bcl-2）表達(dá)水平及臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 回顧性分析2016年1月至2020年1月于本院確診并接受治療的91例AL患者的臨床資料，其中男44例，女47例；年齡26～41歲，平均年齡（33.26±3.29）歲；體質(zhì)量41～73 kg，平均體質(zhì)量（57.19±5.16）kg。分別在治療前、緩解后抽取所有患者骨髓活檢組織和骨髓液，檢測(cè)bcl-2表達(dá)水平，并分析急性白血病骨髓活檢組織和骨髓細(xì)胞中bcl-2表達(dá)水平對(duì)患者預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：符合急性髓系白血病或急性淋巴細(xì)胞白血病診斷標(biāo)準(zhǔn)；同意化療；依從性較高；臨床資料完整，且患者及家屬均簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：精神狀態(tài)異常，無(wú)法正常交流；治療依從性差；先天性發(fā)育不良；合并全身感染性、免疫系統(tǒng)疾??；嚴(yán)重基礎(chǔ)疾病，如心、腦、肝等重要器官存在器質(zhì)性病變。

1.3 方法

1.3.1 骨髓細(xì)胞中bcl-2水平檢測(cè) 分別在治療前、緩解后抽取所有患者骨髓液，在所獲得的骨髓液中加入PBS緩沖液，緩沖液與骨髓液的比例為2∶1，然后按等比例加入淋巴細(xì)胞分離液上層，800×g離心20 min，吸取中間細(xì)胞層，加入ACK裂解殘存的紅細(xì)胞，離心獲取單個(gè)核細(xì)胞，采用細(xì)胞免疫熒光標(biāo)記法測(cè)定患者骨髓單細(xì)胞內(nèi)的bcl-2水平。

1.3.2 骨髓活檢組織中bcl-2水平檢測(cè) 分別在治療前、緩解后抽取所有患者骨髓活檢組織，并用10%中性福爾馬林固定液固定，采用免疫組化染色法測(cè)定患者骨髓活檢組織內(nèi)bcl-2水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以“±s”表示，行t檢驗(yàn)，采用Logistics回歸分析檢驗(yàn)AL患者骨髓活檢組織和骨髓細(xì)胞中bcl-2表達(dá)水平于預(yù)后的相關(guān)性，并繪制患者工作曲線(xiàn)（ROC）得到曲線(xiàn)下面積（AUC），檢驗(yàn)AL患者骨髓活檢組織和骨髓細(xì)胞中bcl-2表達(dá)水平對(duì)預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值：AUC值＞0.90表示預(yù)測(cè)性能較高，0.71～0.90表示有一定的預(yù)測(cè)性，0.50～0.70表示預(yù)測(cè)性能較差，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 治療前后骨髓活檢組織和骨髓細(xì)胞中bcl-2表達(dá)水平比較 聯(lián)合化療后，骨髓活檢組織中bcl-2、骨髓細(xì)胞中bcl-2水平均低于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 治療前后骨髓活檢組織和骨髓細(xì)胞中bcl-2表達(dá)水平比較（±s）Table 1 Comparison of bcl-2 expression levels in bone marrow biopsy tissue and bone marrow cells before and after treatment(±s)

表1 治療前后骨髓活檢組織和骨髓細(xì)胞中bcl-2表達(dá)水平比較（±s）Table 1 Comparison of bcl-2 expression levels in bone marrow biopsy tissue and bone marrow cells before and after treatment(±s)

注：bcl-2，白血病基因2

時(shí)間治療前（n=91）聯(lián)合化療后（n=91）t值P值骨髓活檢組織中bcl-2 2.05±0.81 0.97±0.26 12.111＜0.001骨髓細(xì)胞中bcl-2 1.01±0.37 0.46±0.18 12.751＜0.001

2.2 Logistics回歸分析結(jié)果 將AL患者預(yù)后作為因變量，將骨髓活檢組織和骨髓細(xì)胞中bcl-2表達(dá)水平作為協(xié)變量，進(jìn)行Logistics回歸分析，回歸方程為Y=14.582-4.220X1-10.938X2，提示骨髓活檢組織和骨髓細(xì)胞中低bcl-2表達(dá)水平是AL患者預(yù)后的保護(hù)因素（OR＜1，P＜0.05），相關(guān)參數(shù)見(jiàn)表2。

表2 Logistics回歸分析結(jié)果Table 2 Logistics regression analysis results

2.3 骨髓活檢組織和骨髓細(xì)胞中bcl-2表達(dá)水平在AL患者預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值 將AL患者預(yù)后作為狀態(tài)變量，骨髓活檢組織和骨髓細(xì)胞中bcl-2表達(dá)水平作為檢驗(yàn)變量，繪制ROC曲線(xiàn)，結(jié)果顯示，骨髓活檢組織中bcl-2表達(dá)水平單獨(dú)預(yù)測(cè)的AUC為0.861，具有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值；骨髓細(xì)胞中bcl-2表達(dá)水平單獨(dú)預(yù)測(cè)AUC為0.854，具有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值；骨髓活檢組織和骨髓細(xì)胞中bcl-2表達(dá)水平聯(lián)合預(yù)測(cè)AL患者預(yù)后的AUC為0.944，具有較高的預(yù)測(cè)價(jià)值。

3 討論

AL為臨床血液系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性疾病，是造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病，發(fā)病骨髓中異常的原始細(xì)胞及白血病細(xì)胞大量增殖，蓄積于骨髓并抑制正常造血功能，也可廣泛浸潤(rùn)肝、脾、淋巴結(jié)等髓外臟器，臨床癥狀主要表現(xiàn)為面色蒼白、疲乏、出血、發(fā)熱等，如不及時(shí)治療，不僅會(huì)損害呼吸、消化、泌尿等系統(tǒng)，還可造成酸堿電解質(zhì)平衡紊亂，危脅患者健康及生命[4-6]。化療為治療AL的常用方式，但臨床應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)，該病治療難度較大，化療后患者的緩解率及5年生存率均較低。因此，本研究旨在尋找一種評(píng)估患者預(yù)后的相關(guān)指標(biāo)，為臨床進(jìn)一步治療提供可靠依據(jù)。

本研究結(jié)果顯示，緩解后骨髓活檢組織中bcl-2、骨髓細(xì)胞中bcl-2水平均低于治療前；Logistics回歸分析，得到回歸方程Y=14.582-4.220X1-10.938X2，提示骨髓活檢組織和骨髓細(xì)胞中低bcl-2表達(dá)水平是AL患者預(yù)后的保護(hù)因素（OR＜1，P＜0.05）；繪制ROC曲線(xiàn)，結(jié)果顯示，骨髓活檢組織和骨髓細(xì)胞中bcl-2表達(dá)水平預(yù)測(cè)AL患者預(yù)后的AUC為0.944，具有較高的預(yù)測(cè)價(jià)值。其原因在于，bcl-2是一種耐藥基因，具有明顯抑制細(xì)胞凋亡的作用，在AL患者中有較高表達(dá)，化療緩解后，患者機(jī)體bcl-2水平顯著降低，表明bcl-2高表達(dá)是急性白血病難治、復(fù)發(fā)的重要原因，對(duì)判斷預(yù)后有一定臨床價(jià)值。但在研究過(guò)程中還發(fā)現(xiàn)，達(dá)到骨髓細(xì)胞學(xué)緩解的患者，bcl-2表達(dá)處于低水平時(shí)仍有較高的復(fù)發(fā)率，因此，可能存在部分AL患者骨髓細(xì)胞檢查并不能完全代表真正意義上的完全緩解[7-9]。而對(duì)患者骨髓活檢組織檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，骨髓細(xì)胞檢查已達(dá)完全緩解標(biāo)準(zhǔn)，緩解后骨髓活檢組織中仍存在成簇分布的原始bcl-2細(xì)胞，由此可見(jiàn)，同時(shí)進(jìn)行骨髓活檢組織和骨髓細(xì)胞bcl-2檢測(cè)能更準(zhǔn)確評(píng)估AL的預(yù)后[10-12]。

綜上所述，AL緩解后骨髓活檢組織中bcl-2、骨髓細(xì)胞中bcl-2水平均低于治療前，骨髓活檢組織和骨髓細(xì)胞中bcl-2水平表達(dá)與AL患者的預(yù)后水平密切相關(guān)，聯(lián)合檢測(cè)具有較高的臨床價(jià)值，可為臨床評(píng)估AL患者疾病恢復(fù)情況并實(shí)施有效的治療方案提供參考依據(jù)，值得推廣應(yīng)用。