青梗菜種質(zhì)資源加代分離技術(shù)規(guī)程

邵貴榮 鐘鳳林 鄭學(xué)立 王春華 林曉 方勇 朱彬 曹萍 崔田 蔣鵬 吳雙

摘 要：青梗菜種質(zhì)資源豐富，但育種時間長、育種進(jìn)程復(fù)雜，嚴(yán)重影響工作的進(jìn)展。為加快青梗菜新品種的育種進(jìn)程，通過對青梗菜種子和植株低溫春化處理、蕾期人工授粉、剝種皮加代處理、智能人工氣候室培養(yǎng)和田間試驗鑒定等相結(jié)合的手段，可使青梗菜種質(zhì)資源每年可以繁育3～4代，縮短育種年限至4～5年。在前期試驗的基礎(chǔ)上，總結(jié)了青梗菜種質(zhì)資源加代分離技術(shù)規(guī)程，為加快青梗菜品種選育以及資源鑒定評價提供參考。

關(guān)鍵詞：青梗菜;種質(zhì)資源;加代分離技術(shù);技術(shù)規(guī)程

中圖分類號：S 634?? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A?? 文章編號：0253-2301（2021）07-0065-04

DOI： 10.13651/j.cnki.fjnykj.2021.07.012

Technical Regulations for the Generationadding Separation ofthe Germplasm Resources of Chinese Cabbage

SHAO Guirong1， ZHONG Fenglin2， ZHENG Xueli3， WANG Chunhua2， LIN Xiao1，

FANG Yong1， ZHU Bin1， CAO Ping1， CUI Tian1， JIANG Peng1， WU Shuang2*

（1. Fujian Jinpin Agricultural Science and Technology Co.， Ltd.， Fuzhou， Fujian 350100， China;

2. College of Horticulture， Fujian Agriculture and Forestry University， Fuzhou， Fujian 350100， China;

3. Fuzhou Vegetable Research Institute， Fuzhou， Fujian 350111， China）

Abstract： There were abundant germplasm resources of Chinese cabbage， but the long breeding time and complex breeding process seriously affected the work progress. In order to speed up the breeding process of new varieties of Chinese cabbage， through the combination of the treatments such as low temperature vernalization of seeds and plants， artificial pollination at bud stage， seedpeeling and generationadding processing， cultivation in the intelligent artificial climate chamber and field test evaluation， the germplasm resources of Chinese cabbage could be bred for 3-4 generations every year， and the breeding period could be shortened to 4-5 years. On the basis of the previous experiments， the technical regulations for the generationadding separation of the germplasm resources of Chinese cabbage were summarized， which could provide reference for the variety breeding and resource identification and assessment of Chinese cabbage.

Key words： Chinese cabbage; Germplasm resources; Generationadding separation technology; Technical regulations

青梗菜Brassica rapa L.ssp.chinensis，俗稱青菜，又稱膠菜、瓢兒菜、瓢兒白、油菜（中國東北某些地區(qū)）、油白菜等[1]。最早產(chǎn)于中國，主要在我國南方地區(qū)栽培生產(chǎn)，在蔬菜周年供應(yīng)中起重要作用[2]。其品種類型豐富，產(chǎn)量高，耐貯藏，方便運(yùn)輸，供應(yīng)期長，營養(yǎng)物質(zhì)充足，有多種食用方法，且栽培省時省工、成本低，是我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和百姓日常生活中不可或缺的蔬菜種類之一。隨著生產(chǎn)和市場需求變化，對青梗菜種業(yè)創(chuàng)新提出了更高要求?？s短育種周期、提高育種效率，是解決青梗菜周年供應(yīng)對品種更新?lián)Q代要求的主要途徑，也是青梗菜育種的關(guān)鍵[3]。

青梗菜屬于十字花科蕓薹屬兩年生低溫長日照蔬菜作物，在正常自然條件下，通過田間冬季自然條件下的春化，1年只能繁育一代種子，這樣在青梗菜的育種工作中，育成1個優(yōu)良的親本需6～8年，選育1個品種則要8～10年或更長的時間，這嚴(yán)重影響了育種工作的進(jìn)展。而春化處理，人工授粉進(jìn)行人為的加代繁殖可以有效加快青梗菜選育新品種的育種進(jìn)程[2，3-5]。春化作用是植物通過感受低溫環(huán)境條件，使得植株由營養(yǎng)生長轉(zhuǎn)向生殖生長，最終誘導(dǎo)植株成花的過程[6]。植物春化有兩種方式，分別為綠體春化和種芽春化[7]。對青梗菜來說，低溫春化及適宜的光照是影響其抽薹開花的重要因素，通過春化處理青梗菜每年可繁育2～3代[8]，再采用智能人工氣候室培養(yǎng)可進(jìn)一步加快分離純化進(jìn)程。徐學(xué)忠等[3]與舒駿等[9]研究發(fā)現(xiàn)隨春化時間的延長，白菜播種至現(xiàn)蕾天數(shù)明顯縮短。王真真等[10]和張德雙等

[11]分別研究表明了不同春化時間對不結(jié)球白菜現(xiàn)蕾、抽薹和開花均有影響，發(fā)現(xiàn)植株春化處理的時間越長，現(xiàn)蕾、抽薹、開花越早，比正常植株花芽分化所需的時間短?；蓰渹b等[12]研究表明7℃為青梗菜春化處理最適溫度，且隨著春化時間增長，花芽分化和現(xiàn)蕾開花時間越短。

由于青梗菜南繁或室內(nèi)加代存在較大困難，使青梗菜育種加代進(jìn)程極為緩慢，不適應(yīng)高效育種的需求[13-14]。種子休眠是在長期進(jìn)化過程中產(chǎn)生的，是由于自然競爭所導(dǎo)致的一種自然選擇、適應(yīng)生存的正常生物現(xiàn)象。通常剛成熟采收的青梗菜種子種皮內(nèi)含發(fā)芽抑制物質(zhì)，具有明顯的休眠特性。其休眠期的長短會由于品種和成熟度而具有不同程度上的差異[15]。剝種皮加代處理主要是對剛成熟飽滿但是還未轉(zhuǎn)色的青梗菜種子（智能人工氣候室培養(yǎng)條件下，授粉后28 d左右）進(jìn)行剝種皮，其目的是打破種子休眠，加快種子萌發(fā)進(jìn)程，促進(jìn)其發(fā)芽。剝種皮需要細(xì)致的處理，過程比較煩瑣，還可能會因處理不當(dāng)，導(dǎo)致種胚受傷進(jìn)而影響發(fā)芽率及發(fā)芽勢。因此，本研究從青梗菜種子和植株低溫春化處理、蕾期人工授粉處理、剝種皮加代處理、田間試驗鑒定以及病蟲害管理等方面，總結(jié)了青梗菜種質(zhì)資源加代分離技術(shù)規(guī)程，以供生產(chǎn)和科研上參考

借鑒。

1 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了青梗菜種質(zhì)資源加代分離技術(shù)的各項技術(shù)環(huán)節(jié)。包括：種子低溫春化、蕾期授粉、結(jié)莢期管理和剝種皮加代處理方法等技術(shù)要求。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于青梗菜種質(zhì)資源的加代分離技術(shù)，可為青梗菜新品種選育、青梗菜種質(zhì)資源鑒定評價以及青梗菜相關(guān)理論研究提供參考。

2 引用標(biāo)準(zhǔn)

下列標(biāo)準(zhǔn)所包含的條文，通過在本標(biāo)準(zhǔn)中引用而構(gòu)成為本標(biāo)準(zhǔn)的條文。在標(biāo)準(zhǔn)出版時，所示版本均為有效。所有標(biāo)準(zhǔn)都會被修訂，使用本標(biāo)準(zhǔn)的各方應(yīng)探討使用下列標(biāo)準(zhǔn)最新版本的可能性。

種子質(zhì)量、純度、活力等應(yīng)符合GB 16715.2-2010《瓜菜作物種子第2部分：白菜類》的要求。

農(nóng)藥使用嚴(yán)格執(zhí)行GB/T 8321.10-2018《農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則（十）》的規(guī)定。嚴(yán)格執(zhí)行國家相關(guān)部門的有關(guān)規(guī)定，不應(yīng)使用高毒、高殘留農(nóng)藥。

肥料的施用應(yīng)符合NY/T 496-2010《肥料合理使用準(zhǔn)則通則》、NY/T 496-2010《肥料合理使用準(zhǔn)則通則》的規(guī)定。作基肥的有機(jī)肥料施用應(yīng)符合NY 525-2021《有機(jī)肥料》的規(guī)定，生物有機(jī)肥施用應(yīng)符合NY 884-2012《生物有機(jī)肥》的規(guī)定。禁止使用未經(jīng)國家或省級農(nóng)業(yè)部門登記或批準(zhǔn)的化學(xué)和生物肥料。禁止使用重金屬含量超標(biāo)的肥料（有機(jī)肥料及礦質(zhì)肥料等）。

3 低溫春化處理

3.1 種子準(zhǔn)備

試驗種子質(zhì)量應(yīng)符合GB 16715.2-2010《瓜菜作物種子 第2部分：白菜類》要求，從試驗品種中隨機(jī)選取飽滿、活力高的種子用于試驗。

3.2 播種

青梗菜種子用清水浸泡4 h后，將種子播于鋪有二層濾紙的玻璃培養(yǎng)皿中，且濾紙用無菌水浸濕，置于光照培養(yǎng)箱（溫度25℃）中萌動。

3.3 種子春化

待培養(yǎng)皿中種子露白后，將其放入智能人工氣候箱進(jìn)行低溫處理，設(shè)光照強(qiáng)度為15 000 lx，濕度為70%，晝夜溫度8℃/3℃，光周期為晝夜16 h/8 h。一般早熟品種春化約15 d，晚熟品種春化約45 d。

3.4 定植

春化結(jié)束后，待種子發(fā)芽至2～3片真葉展開時，將幼苗定植于9孔小穴盤（邊長13 cm×13 cm）內(nèi)，每穴定植1株，后放入智能人工氣候室內(nèi)育苗。

3.5 苗期管理

定植15 d后，植株有5～6片真葉時可進(jìn)行移栽。選取壯苗移栽到10 cm×10 cm的正方形小花盆中，花盆中均裝有含有機(jī)質(zhì)及底肥的基質(zhì)土。移栽時注意不要傷到主根，一個花盆種植一株，把花盆放在托盤

（邊長32 cm×23 cm）里，再放入智能人工氣候室中進(jìn)行培養(yǎng)。

3.6 水肥管理

移栽3 d后可以進(jìn)行追肥，一般情況下，每周施用0.3%三元復(fù)合肥1～2次，為植株生殖生長提供適量的養(yǎng)分供應(yīng)。注意每次施肥過后，植株再用清水噴灑1次，以防燒苗。

3.7 綠體春化

田間鑒定篩選出的植株或種子春化時間不夠的植株，要進(jìn)行綠體春化，將植株移到晝夜溫度8℃/3℃的智能人工氣候箱進(jìn)行低溫春化處理，處理20～45 d后再放入晝夜溫度為25℃/18℃的智能人工氣候室中進(jìn)行培養(yǎng)，等待植株抽薹開花。

4 蕾期人工授粉處理

4.1 整枝

對青梗菜需要定期打底葉，及時摘除低結(jié)位的花蕊，保證植株生殖生長中養(yǎng)分供給。青梗菜進(jìn)入生殖生長時部分青梗菜主枝生長較快，側(cè)枝生長較慢。這時可以選擇打掉主枝，促進(jìn)側(cè)枝生長。不但可以加快現(xiàn)蕾開花，還可以有效提高種子產(chǎn)量。

4.2 剝蕾

授粉時選取無病、健壯、品種性狀典型的生長植株作為授粉對象。一般要求具有發(fā)育完整的花瓣、花藥和柱頭的植株，且植株頂端有8朵以上花蕾且有4朵以上花蕊完全開放時，再進(jìn)行授粉。在授粉前，應(yīng)先用酒精將手指及鑷子進(jìn)行消毒，然后對3 d內(nèi)即將開花的花蕾進(jìn)行剝蕾處理，使用鑷子將花蕾剝開露出柱頭，剝?nèi)飼r要小心不要損傷柱頭。

4.3 授粉

取粉時應(yīng)盡量選取當(dāng)天開花的花粉，挑取花藥上的花粉時，用鑷子的較寬部位去夾花絲的中間，保證在授粉時花藥完整。用花藥涂抹柱頭時，動作要輕、慢，防止鑷子劃傷柱頭，導(dǎo)致種子減產(chǎn)。當(dāng)授粉的植株經(jīng)過3代以上純化時，性狀已趨于穩(wěn)定，需要對已開花的柱頭授粉，進(jìn)行親和性鑒定，以期為后期繁種尋找自交不親和系的材料奠定基礎(chǔ)。授粉結(jié)束7 d后檢查結(jié)莢情況，對結(jié)實率低的植株要進(jìn)行二次授粉。

4.4 套袋

授粉之后，套好硫磺紙袋，使用回形針固定以防止脫落，在標(biāo)簽牌上寫好授粉日期。

5 結(jié)莢期管理

結(jié)莢期要供應(yīng)充足的水分及適當(dāng)追肥防止造成癟子，又要防止水分及肥料過量出現(xiàn)貪青晚熟。待種子灌漿后進(jìn)入臘熟期、果莢由綠轉(zhuǎn)黃時要及時采收，避免果莢枯黃開裂落粒。

6 剝種皮加代處理

6.1 工具準(zhǔn)備及種莢選取、標(biāo)記

授粉后25 d開始檢查并選擇適宜的種莢進(jìn)行剝種皮處理。先要準(zhǔn)備所用的工具，分別為解剖針、鑷子、洗瓶、試紙、培養(yǎng)皿、鉛筆、油筆、標(biāo)簽紙和托盤等。找出要剝種皮的青梗菜材料，放置在一起。在摘取之前，依據(jù)授粉日期或先剝開種莢查看種子的發(fā)育程度，用鉛筆在編號后面做記號，方便查證和記憶。再用油筆在便簽紙上登記，粘在培養(yǎng)皿上，然后每株摘取種莢2～3個放置培養(yǎng)皿中。

6.2 剝種皮

6.2.1 剝種皮方法 將待剝種皮的種子從種莢里剝出，放在培養(yǎng)皿中。每次選取1粒發(fā)育正常的種子用一只手的拇指和食指輕輕捏住，另一只手拿解剖針將種子兩層種皮一層一層剝掉。方法是先找到胚芽、胚根和子葉的位置，根據(jù)胚根的位置下解剖針，順著胚根軸方向上劃，再慢慢剝動，直至兩層種皮全部脫落。在解剖過程中要小心、仔細(xì)，不要將種子胚劃傷，以防在發(fā)芽之后留傷口。每株保留剝掉種皮的完好種子15粒左右。

6.2.2 種子發(fā)芽培養(yǎng) 將剝掉種皮的種子播于鋪有二層濾紙的玻璃培養(yǎng)皿中，濾紙先用無菌蒸餾水噴濕，以濾紙潤濕有水滴但不會成股流下為宜。蓋好培養(yǎng)皿蓋子后，將其放置在托盤中，置于智能人工氣候室中進(jìn)行培養(yǎng)，每隔2 d補(bǔ)充水分1次。

6.2.3 春化 同3.3。

6.2.4 定植 同3.4。

6.2.5 苗期管理 同3.5。

6.2.6 授粉 同4。

7 田間試驗鑒定

7.1 采種

授粉40 d后，當(dāng)植株有70%～80%的種莢由青轉(zhuǎn)黃、籽粒硬實轉(zhuǎn)色時及時采收，采種時把授粉的枝條用剪刀剪下后，注意摘掉沒有標(biāo)記的枝條及種莢，連同標(biāo)記牌一起裝在網(wǎng)袋里，晾干后進(jìn)行脫粒、單株分別標(biāo)記儲藏。

7.2 播種育苗

每加代一代均進(jìn)行田間試驗鑒定，實驗室加代后采收的種子一般放置15 d待解除休眠后再播種，采用50孔穴盤育苗，苗期18 d左右移栽，每個材料移栽30株左右，株行距25 cm×25 cm，其他管理同田間常規(guī)管理方法。

7.3 株選、移栽及管理

經(jīng)田間試驗鑒定，每個材料篩選抗逆、抗病、符合育種目標(biāo)的優(yōu)良單株3～6株移回智能人工氣候室，移栽到10 cm×10 cm的正方形小花盆中（種植時去除老葉）進(jìn)行培養(yǎng)，緩苗（培養(yǎng)7 d左右）后移到智能人工氣候箱進(jìn)行春化處理，春化時間根據(jù)材料的耐抽薹情況設(shè)定。春化結(jié)束后再放入智能人工氣候室中進(jìn)行培養(yǎng)、授粉、加代及采種，步驟同文中4、5、6。

8 病蟲害管理

8.1 主要病蟲害

智能人工氣候室里青梗菜主要蟲害有蚜蟲和小菜蛾，主要病害有軟腐病和干燒心。

8.2 防治原則

病蟲害防治堅持“預(yù)防為主，綜合防治”原則，噴施農(nóng)藥時藥劑應(yīng)選擇低毒、低殘留、藥效好和見效快的農(nóng)藥。

8.3 防治方法

注意多種農(nóng)藥交替使用，噴藥防治時要注意避開開花的植株及剛授粉的枝條，并且幼苗要控制濃度，同時結(jié)合殺蟲燈和黃板等進(jìn)行綜合防治。另外，人工用電蚊拍捕捉小菜蛾成蟲，降低蟲口。

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（責(zé)任編輯：柯文輝）