藥材赤芍的對(duì)照藥材薄層色譜法的探索性研究

辛薩如拉

【中圖分類號(hào)】R28 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2107-2306（2021）06-129-01

一.品種的基本情況

中藥材赤芍是毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.或川赤芍 Paeonia veitchiiLynch的干燥根，具有清熱京血，散瘀鎮(zhèn)痛。用于熱入營(yíng)血，溫毒發(fā)斑，吐血衄血，目赤腫痛，肝郁脅痛，經(jīng)閉痛經(jīng)，癓瘕腹痛，跌撲損傷，癰腫瘡瘍。芍藥苷為其主要活性成分藥理研究表明該藥有抗血栓形成作用、能顯著降低重型肝炎患者血清內(nèi)毒素及血清腫瘤壞死因子，改善肝臟生化指標(biāo)的作用，此外尚具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗驚厥、抗炎及抗腫瘤等活性。赤芍在臨床應(yīng)用廣泛，許多中成藥制劑中都有赤芍成分，劑型有湯劑、片劑、顆粒劑、合劑等，因此赤芍藥材的質(zhì)量直接影響眾多成藥的質(zhì)量，需嚴(yán)加把控。

二.探索性研究的目的

中藥赤芍在《中國(guó)藥典》2020年版一部赤芍項(xiàng)下鑒別（2）的薄層色譜鑒別試驗(yàn)中，只選擇了芍藥苷作為對(duì)照品，而芍藥苷的來(lái)源包括毛莨科植物芍藥根、牡丹根、紫牡丹根，所以選用對(duì)照藥材對(duì)赤芍品種的判斷專屬性更強(qiáng)。

三.本次探索性研究實(shí)驗(yàn)的樣品概況

本次試驗(yàn)共抽取37家企業(yè)生產(chǎn)的47批次樣品，分布情況如下表格

四.開(kāi)展的探索性研究

（一）對(duì)照藥材的選擇與處理方法

按《中國(guó)藥典》2020年版一部赤芍項(xiàng)下鑒別（2）規(guī)定：取本品粉末0.5g，加乙醇10ml，振搖5分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對(duì)照品，加乙醇制成每1mL含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法通則（0502）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液個(gè)4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：10：0.2）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同的藍(lán)紫色斑點(diǎn)。

以上方法的實(shí)驗(yàn)中47批次赤芍均出現(xiàn)了與對(duì)照品相應(yīng)位置上的藍(lán)紫色斑點(diǎn)，而且還出現(xiàn)了很多其它斑點(diǎn)，所以此方法應(yīng)該能提出赤芍藥材飲片的更多成分，用對(duì)照藥材做薄層專屬性會(huì)更強(qiáng)。以上方法中“濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解”，的步驟中，考慮溶劑相同情況下不蒸干，直接用濾液作為供試品溶液，省略提取步驟，也作為了本次探索研究方向。

中藥材赤芍是毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.或川赤芍 Paeonia veitchiiLynch的干燥根，所以對(duì)照藥材選擇了赤芍對(duì)照藥材和赤芍（川赤芍）對(duì)照藥材。

在《中國(guó)藥典》2015年版一部益腦寧片檢驗(yàn)鑒別（3）項(xiàng)下，赤芍對(duì)照藥材提取如下：取赤芍對(duì)照藥材1g，加水飽和正丁醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液用正丁醇飽和的水洗滌，棄去水洗液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。

參考了以上兩種提取方法和赤芍藥材的來(lái)源，用正丁醇提取的赤芍對(duì)照藥材，用乙醇提取，過(guò)濾未經(jīng)蒸干，溶解的47批次赤芍樣品和赤芍對(duì)照藥材，赤芍（川赤芍）對(duì)照藥材，芍藥苷對(duì)照品溶液及空白溶液點(diǎn)與同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：10：0.2）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。

圖中起點(diǎn)上的1、2、3、4、9、10、12為本次專項(xiàng)抽驗(yàn)的樣品，5為正丁醇提取的赤芍對(duì)照藥材，6為乙醇提取的赤芍對(duì)照藥材，7為乙醇提取的對(duì)照藥材，8為芍藥苷對(duì)照品，11為空白溶液。

5、6、7、8、9起點(diǎn)展開(kāi)后有共同峰一個(gè)藍(lán)色斑點(diǎn)1。

5、6、7、9起點(diǎn)展開(kāi)后都有相應(yīng)位置的1、2點(diǎn)。

5、6、7、9起點(diǎn)展開(kāi)后都有相應(yīng)位置的1、2、3、4點(diǎn)，其中5和9起點(diǎn)展開(kāi)后出現(xiàn)的點(diǎn)的顏色一致，1為藍(lán)紫色，2是紅色，3是淡紫色，4是棕色。

實(shí)驗(yàn)后得出結(jié)論：赤芍對(duì)照藥材和赤芍（川赤芍）對(duì)照藥材都可以在赤芍藥材飲片的薄層色譜鑒別中出現(xiàn)較好的重復(fù)性，和鑒別功能，赤芍（川赤芍）考慮到來(lái)源不能覆蓋所有赤芍，所以選赤芍對(duì)照藥材更為準(zhǔn)確。赤芍對(duì)照藥材的薄層色譜應(yīng)用中，正丁醇提取的對(duì)照藥材溶液出現(xiàn)斑點(diǎn)與藥材色譜中相應(yīng)的斑點(diǎn)數(shù)多，一致性強(qiáng)，但是操作繁瑣，提取費(fèi)時(shí)。乙醇提取的對(duì)照藥材溶液操作簡(jiǎn)單快捷，且明顯的紅色與藍(lán)紫色斑點(diǎn)特征能有效判斷赤芍藥材。

（二）薄層板的選擇

在《中國(guó)藥典》2020年版一部赤芍鑒別（2）項(xiàng)下的檢驗(yàn)中未見(jiàn)熒光斑點(diǎn)，所以本次薄層色譜法的探索中選擇硅膠G板和H板做對(duì)比實(shí)驗(yàn)。

點(diǎn)于G板的結(jié)果如圖1。

點(diǎn)于H板后出現(xiàn)的薄層色譜，展開(kāi)內(nèi)容不明確，如下圖

（三）點(diǎn)樣量的選擇

在《中國(guó)藥典》2020年版一部赤芍鑒別（2）項(xiàng)下的檢驗(yàn)中芍藥苷對(duì)照品點(diǎn)4μl ，供試品4μl，本次探索性研究中，考慮未經(jīng)過(guò)蒸干再溶解的濃縮過(guò)程，將對(duì)照品，對(duì)照藥材及供試品均點(diǎn)6μl實(shí)驗(yàn)。結(jié)果如下圖

圖中從左到右分別為赤芍供試品，芍藥苷對(duì)照品，赤芍對(duì)照藥材，赤芍供試品。

可見(jiàn)圖中兩邊的供試品分離不徹底，藍(lán)紫色斑點(diǎn)厚重有重影，而對(duì)照品和對(duì)照藥材分離的干凈，斑點(diǎn)清晰。

從以上實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)中再將對(duì)照品，對(duì)照藥材各6μl，樣品4μl點(diǎn)于薄層板上，結(jié)果如圖5，分離效果清晰明確。

（四）系統(tǒng)適應(yīng)性

圖3中基線原點(diǎn)至點(diǎn)1的距離為45mm，至點(diǎn)2的距離為63mm，展距為100mm，Rf1=45/100=0.45 ， Rf2=63/100=0.63符合《中國(guó)藥典》2020年版四部通則0502規(guī)定的0.2～08之間為宜。

（五）結(jié)論：取赤芍藥材或飲片粉末0.5g，加乙醇10ml，振搖5分鐘，濾過(guò)，作為供試品溶液。另取赤芍對(duì)照藥材作同法制成對(duì)照藥材溶液。再取芍藥苷對(duì)照品，加乙醇制成每1mL含2mg的溶液，。照薄層色譜法通則（0502）試驗(yàn)，吸取上述對(duì)照品溶液6μl，對(duì)照藥材溶液6μl，供試品溶液4μl分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：10：0.2）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同的藍(lán)紫色斑點(diǎn)，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上應(yīng)顯相同顏色的藍(lán)紫色半點(diǎn)與紅色斑點(diǎn)。

五.實(shí)驗(yàn)結(jié)果

本次實(shí)驗(yàn)選取的47批次赤芍品種通過(guò)（五）結(jié)論的方法提取、展開(kāi)、顯色、晾干，得出的薄層色譜在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，都顯相同的藍(lán)紫色斑點(diǎn)，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上都顯相同顏色的藍(lán)紫色斑點(diǎn)與紅色斑點(diǎn)，數(shù)據(jù)證明簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)步驟，加赤芍對(duì)照藥材的薄層色譜法操作簡(jiǎn)單，專屬性更強(qiáng)。

參考文獻(xiàn)：

[1]《中國(guó)藥典》2020年版一部

[2]《中國(guó)藥典》2020年版四部