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    外源甜菜堿處理對(duì)南果梨果實(shí)貯藏品質(zhì)的影響

    2021-09-17 07:11:32李燦嬰侯佳寶蔣超男葛永紅
    包裝與食品機(jī)械 2021年4期
    關(guān)鍵詞:南果梨醛酸甜菜堿

    李燦嬰 ,侯佳寶 ,張 浪 ,蔣超男 ,葛永紅

    (1.渤海大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院,遼寧錦州 121013;2.生鮮農(nóng)產(chǎn)品貯藏加工及安全控制技術(shù)國(guó)家地方聯(lián)合工程研究中心,遼寧錦州 121013)

    0 引言

    南果梨是遼寧省極具地方特色的秋子梨(Pyrus ussuriensis Maxim)品種,果實(shí)色澤鮮艷,風(fēng)味宜人,素有“梨中之王”的美稱[1-2]。新鮮采收的南果梨果實(shí)堅(jiān)硬,口感較差,缺乏獨(dú)特的香味,后熟后充分顯露出果實(shí)的口感、風(fēng)味和色澤。南果梨成熟時(shí)間一般集中于9月上、中旬,常溫下貯藏壽命較短,由于水分流失、果肉褐變、果實(shí)軟化等原因,南果梨果實(shí)的品質(zhì)受到嚴(yán)重影響[3]。低溫(0±0.5) ℃貯藏通常用于延長(zhǎng)南果梨的貨架期,但長(zhǎng)期冷藏會(huì)降低果實(shí)品質(zhì)并導(dǎo)致冷害癥狀,如失去特有的風(fēng)味、果皮和果肉褐變[4]。因此,研究和開發(fā)南果梨綠色防腐保鮮技術(shù)迫在眉睫。

    目前,南果梨果實(shí)的貯藏保鮮研究多運(yùn)用氣調(diào)、低溫、1-甲基環(huán)丙烯、二氫茉莉酸丙酯、涂膜保鮮、氣調(diào)貯藏等方法[5-11]。甜菜堿是一類季胺型生物堿,是植物細(xì)胞內(nèi)最重要的非毒性滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)之一,對(duì)細(xì)菌、真菌、藻類、植物、動(dòng)物和人類等生物的滲透調(diào)節(jié)起著至關(guān)重要的作用,具有穩(wěn)定生物大分子結(jié)構(gòu)和生物膜系統(tǒng)的完整性、維持細(xì)胞滲透平衡、保持蛋白質(zhì)和代謝酶的活性、緩解氧化脅迫損傷等多種生理功能[12]。研究表明,外源甜菜堿處理能夠提高番木瓜、枇杷、桃、黃瓜、西葫蘆、山楂等果實(shí)的抗冷能力,且抑制冷害的發(fā)生與激活體內(nèi)抗氧化相關(guān)酶活性和保護(hù)膜完整性有關(guān)[13-17]。甜菜堿誘導(dǎo)處理能提高Pichia caribbica對(duì)蘋果灰霉病的控制效果,提高果實(shí)抗氧化酶的活性[18]。此外,甜菜堿處理還能夠提高桃果實(shí)可溶性固形物、總酚和抗壞血酸含量[19];有效減輕香椿嫩芽的失重率和腐爛,抑制呼吸強(qiáng)度,同時(shí)減緩葉綠素、抗壞血酸和總黃酮含量的損失[20]。已有研究表明,甜菜堿能夠提高果實(shí)抗冷能力減輕冷害現(xiàn)象[21],保持果實(shí)良好的采后品質(zhì)。植物在受到脅迫時(shí),通過(guò)在細(xì)胞質(zhì)中大量積累甜菜堿來(lái)調(diào)節(jié)滲透壓,從而維持細(xì)胞的水分平衡[22]。然而,有關(guān)采后甜菜堿處理對(duì)南果梨果實(shí)貯藏品質(zhì)及果實(shí)軟化的影響尚未見(jiàn)報(bào)道。

    本研究以南果梨果實(shí)為試材,研究采后不同濃度的甜菜堿處理對(duì)果實(shí)貯藏品質(zhì)的影響,同時(shí)探討其對(duì)果實(shí)果膠物質(zhì)代謝相關(guān)酶活性的影響,以期為甜菜堿在南果梨果實(shí)采后貯藏保鮮中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    南果梨果實(shí)采自錦州市北鎮(zhèn)市羅羅堡鎮(zhèn),八成熟時(shí)采收,然后用紙箱包裝(60個(gè)/箱),運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室,在(20±1)℃,相對(duì)濕度30%~40%下貯藏待用。

    甜菜堿(純度98%,山東西亞化學(xué)股份有限公司);果膠(純度74%,北京索萊寶科技有限公司);3,5-二硝基水楊酸(分析純,北京索萊寶科技有限公司);三(羥甲基)氨基甲烷(分析純,北京索萊寶科技有限公司)。

    1.2 儀器與設(shè)備

    H1650R型小型冷凍離心機(jī)(湖南湘儀儀器有限公司);UV-1801型紫外分光光度計(jì)(北京北分瑞麗分析儀器集團(tuán));Check Point Ⅱ便攜式CO2/O2測(cè)定儀(丹麥PBI-Dansensor公司);LX-A型硬度計(jì)(北京沃威科技有限公司)。

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 甜菜堿處理

    挑選大小一致、顏色均勻、無(wú)機(jī)械損傷和病蟲害的南果梨果實(shí),用1%次氯酸鈉溶液消毒1 min,清水沖洗后將果實(shí)分為4份,3份分別用5、10和 20 mmol/L甜菜堿溶液(含 0.1%Tween 20)浸泡果實(shí)10 min,1份用等量蒸餾水(內(nèi)含0.1%Tween 20)處理并作為對(duì)照。室溫晾干后分別裝入PE塑料袋并置于干凈的紙箱中,于20±1 ℃貯藏(30%~40% RH)。

    1.3.2 呼吸速率和失重率測(cè)定

    呼吸速率和失重率的測(cè)定參照葛永紅等[22]方法并修改。分別于處理后第0、2、4、6、8、10、12 d取甜菜堿和清水處理果實(shí)30個(gè),分別稱重后放入3個(gè)密封袋中常溫靜置1 h,然后用Check Point Ⅱ便攜式CO2/O2測(cè)定儀測(cè)定剩余O2的體積。呼吸速率用mL O2/(h·kg)表示。將甜菜堿和清水處理南果梨果實(shí)第0 d的重量視為原始重量,并于處理后第 2、4、6、8、10、12 d 分別稱量?jī)山M處理的果實(shí)重量,記為每次稱重量。

    失重率(%)=(原始重量-每次稱重量)

    ×100/原始重量。

    根據(jù)果實(shí)的呼吸速率和失重率的變化差異篩選最佳濃度用于后續(xù)研究。

    1.3.3 取樣

    根據(jù)上述結(jié)果篩選的甜菜堿濃度和清水各處理南果梨果實(shí)210個(gè),參照GE等[23]方法并修改。分別于處理后第 0、2、4、6、8、10、12 d,取南果梨果實(shí)赤道部位皮下2~5 mm的果肉組織約3.0 g,切成小塊后,用液氮快速冷凍,用錫箔紙包好后貯藏在-80 ℃冰箱中待用。每次取樣用果實(shí)15個(gè)。

    1.3.4 果肉硬度、可溶性固形物含量和可滴定酸測(cè)定

    果肉硬度和可溶性固形物含量測(cè)定參照曹建康等[24]方法并修改。每次取15個(gè)甜菜堿處理和對(duì)照果實(shí),削去陰陽(yáng)面中環(huán)部位約1~2 mm的果皮,用LX-A型硬度計(jì)進(jìn)行測(cè)定,單位用kg/cm2表示。削取赤道部位陰陽(yáng)面果實(shí)(約1~2 mm厚)的果肉,用阿貝折光儀測(cè)定可溶性固形物含量,用%表示。

    可滴定酸測(cè)定參照陳松江等[25]方法并修改。取處理和對(duì)照果肉樣品10.0 g,用液氮處理后研磨成粉末并用蒸餾水轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中,沖洗研缽2~3次,合并勻漿,用蒸餾水定容至刻度并搖勻,靜置20 min后過(guò)濾。濾液用0.1 mol/L NaOH溶液進(jìn)行酸堿滴定,記錄NaOH的用量。

    總酸度(%)=cVK×1 000/m

    式中 c——已標(biāo)定NaOH溶液濃度,mol/L;

    V——滴定消耗NaOH溶液體積,mL;

    m——南果梨果實(shí)樣品質(zhì)量,g;

    K——換算為0.067 g/mmol蘋果酸的系數(shù)。

    1.3.5 多聚半乳糖醛酸酶(PG)和果膠甲基酯酶(PME)活性

    參照楊志敏等[26]方法。反應(yīng)混合液為1.0 mL醋酸-醋酸鈉緩沖液(50 mmol/L,pH值為5.5)、0.5 mL密度為10g/L的底物(PG底物為多聚半乳糖醛酸,PME底物為果膠),在37 ℃預(yù)熱5 min后,將0.5 mL酶提取液添加到一個(gè)試管中,并將滅活酶溶液加到另一個(gè)試管中作為對(duì)照?;旌蠐u勻后,在37 ℃的水浴中保溫1 min后再加入1.5 mL 3,5-二硝基水楊酸(DNS),在沸水浴中煮沸5 min,迅速冷卻至室溫,并通過(guò)DNS法在540 nm處測(cè)定。以1 mL酶液1 min催化底物產(chǎn)生1 μg半乳糖醛酸為1個(gè)酶活力單位(U)。

    1.3.6 多聚半乳糖醛酸反式消除酶(PGTE)和果膠甲基反式消除酶(PMTE)活性測(cè)定

    參照楊志敏等方法。取兩個(gè)試管,依次加入pH值為9.0,濃度為50 mmol/L的4.0 mL Gly-NaOH 緩沖液、3.0 mmol/L 的 1.0 mL CaCl2、1.0 g/L的300 μL多聚半乳糖醛酸或果膠。在30 ℃預(yù)保溫5 min,然后加入100 μL酶溶液至試管中,立即測(cè)定232 nm處反應(yīng)混合物的吸光度;加入100 μL酶溶液到另一個(gè)試管中,并在30 ℃保溫10 min,冷卻后在232 nm處測(cè)定吸光度。PGTE和PMTE活性以每分鐘每克組織在酶促反應(yīng)下催化底物釋放1 μmol不飽和醛酸反應(yīng)量表示。

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    所有指標(biāo)測(cè)定進(jìn)行3次生物學(xué)重復(fù)試驗(yàn),數(shù)據(jù)處理采用SPSS 19.0進(jìn)行LSD分析(p<0.05),采用Microsoft Excel 2010計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤差并作圖。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 甜菜堿處理對(duì)南果梨果實(shí)失重率的影響

    由圖1可知,隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng),不同濃度甜菜堿處理和對(duì)照南果梨果實(shí)失重率逐漸增大,5、10、20 mmol/L的甜菜堿處理果實(shí)的失重率始終低于對(duì)照組,其中以5 mmol/L甜菜堿處理果實(shí)的失重率最低,在貯藏第4~12 d顯著低于對(duì)照果實(shí)。

    圖1 不同濃度甜菜堿處理對(duì)南果梨果實(shí)失重率的影響Fig.1 Effects of post-harvest glycine betaine treatment at different concentrations on the weight loss of Nanguo pears

    2.2 甜菜堿處理對(duì)南果梨果實(shí)呼吸速率的影響

    由圖2可知,在整個(gè)貯藏期間,對(duì)照和甜菜堿處理果實(shí)呼吸速率整體呈先上升后下降趨勢(shì),在貯藏第10 d出現(xiàn)呼吸高峰。10和20 mmol/L甜菜堿處理果實(shí)呼吸速率始終高于對(duì)照組,5 mmol/L甜菜堿處理果實(shí)的呼吸速率在貯藏第8~12 d顯著低于對(duì)照組,并且呼吸峰值為對(duì)照的90%。結(jié)合呼吸速率和失重率的變化趨勢(shì)可知,5 mmol/L甜菜堿處理顯著抑制了呼吸速率和失重率的增加,并在一定程度上延緩了果實(shí)的衰老。因此,選擇5 mmol/L甜菜堿處理進(jìn)行后續(xù)指標(biāo)的測(cè)定。

    圖2 不同濃度甜菜堿處理對(duì)南果梨果實(shí)呼吸速率的影響Fig.2 Effects of glycine betaine treatment at different concentrations on the respiration rate of Nanguo pears

    2.3 甜菜堿處理對(duì)南果梨果肉硬度的影響

    果肉硬度是果實(shí)主要的品質(zhì)指標(biāo),影響果實(shí)的口感。如圖3,隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng),甜菜堿處理和對(duì)照果實(shí)果肉硬度均呈逐漸下降的趨勢(shì),但甜菜堿處理在貯藏第6~12 d顯著延緩了果肉硬度的下降。在貯藏第10 d和12 d,甜菜堿處理果肉硬度分別是對(duì)照的1.24倍和1.40倍。

    圖3 甜菜堿處理對(duì)南果梨果肉硬度的影響Fig.3 Effects of glycine betaine treatment on the flesh hardness of Nanguo pears

    2.4 甜菜堿處理對(duì)南果梨果實(shí)可滴定酸的影響

    可滴定酸主要是果實(shí)中的有機(jī)酸,影響果實(shí)品質(zhì)和貯藏性。由圖4可知,隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng),甜菜堿處理和對(duì)照南果梨果實(shí)中的可滴定酸總體呈先升后降趨勢(shì)。在整個(gè)貯藏過(guò)程中,甜菜堿處理果實(shí)中的可滴定酸始終高于對(duì)照組,但二者之間沒(méi)有顯著性差異。

    圖4 甜菜堿處理對(duì)南果梨果實(shí)可滴定酸的影響Fig.4 Effects of glycine betaine treatment on the titratable acid of Nanguo pears

    2.5 甜菜堿處理對(duì)南果梨果實(shí)可溶性固形物含量的影響

    由圖5可知,甜菜堿處理和對(duì)照組南果梨果實(shí)可溶性固形物含量總體呈上升趨勢(shì),且變化趨勢(shì)基本一致。貯藏第0~10 d,對(duì)照和甜菜堿處理組果實(shí)的可溶性固形物含量上升,在第10 d達(dá)到最大,然后開始下降。在整個(gè)貯藏期間,甜菜堿處理果實(shí)的可溶性固形物含量始終低于對(duì)照組,但二者沒(méi)有顯著的差異。

    圖5 甜菜堿處理對(duì)南果梨果實(shí)可溶性固形物含量的影響Fig.5 Effects of glycine betaine treatment on the soluble solids content of Nanguo pears

    2.6 甜菜堿處理對(duì)南果梨果實(shí)PME和PG活性的影響

    由圖6(a)可知,隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng),甜菜堿處理和對(duì)照果實(shí)PME活性呈相同的變化趨勢(shì),貯藏第0~8 d升高,第8~12 d下降,在整個(gè)貯藏期間處理果實(shí)PME活性始終低于對(duì)照組,并且在貯藏第6、8和12 d顯著低于對(duì)照。

    圖6 甜菜堿處理對(duì)南果梨果實(shí)PME和PG活性的影響Fig.6 Effects of glycine betaine treatment on the activities of pectin methylesterase and polygalacturonase of Nanguo pears

    由圖6(b)可知,整個(gè)貯藏過(guò)程中,甜菜堿處理和對(duì)照果實(shí)PG活性總體呈現(xiàn)出相同的變化趨勢(shì)。貯藏第0~6 d,對(duì)照和甜菜堿處理果實(shí)PG活性呈上升趨勢(shì);第6~12 d,PG活性逐漸降低。在整個(gè)貯藏期間,甜菜堿處理果實(shí)的PG活性始終低于對(duì)照,并且在貯藏第4~12 d二者差異顯著。貯藏第8、10和12 d,對(duì)照果實(shí)PG活性分別是甜菜堿處理果實(shí)的1.28、1.36和1.70倍。

    2.7 甜菜堿處理對(duì)南果梨果實(shí)PMTE和PGTE活性的影響

    PMTE和PGTE是兩種重要的果膠裂解酶,與采后果實(shí)的軟化密切相關(guān)。由圖7(a)可知,整個(gè)貯藏過(guò)程中,甜菜堿處理和對(duì)照果實(shí)PMTE活性呈先升高后緩慢下降的變化趨勢(shì),并且甜菜堿處理果實(shí)PMTE活性始終低于對(duì)照組,在貯藏第4~6 d差異顯著。對(duì)照和處理果實(shí)PMTE活性在貯藏第6 d達(dá)到最大,對(duì)照果實(shí)PMTE活性是處理果實(shí)的1.19倍。

    圖7 甜菜堿處理對(duì)南果梨果實(shí)PMTE和PGTE活性的影響Fig.7 Effects of glycine betaine treatment on the activities of pectin methyl-trans-eliminase and polygalacturonic acid trans-eliminase of Nanguo pears

    如圖7(b),隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng),甜菜堿處理果實(shí)PGTE活性始終低于對(duì)照果實(shí),二者均呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢(shì)。貯藏第0~4 d,甜菜堿處理和對(duì)照果實(shí)PGTE活性急劇升高,在第6 d達(dá)到最大,從第6 d開始,二者均開始下降。在貯藏第 4、8、10和 12 d,甜菜堿處理果實(shí) PGTE 活性顯著低于對(duì)照果實(shí),分別是對(duì)照果實(shí)的81.1%、87.4%、82.5%和74.8%。

    3 討論

    本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)甜菜堿處理能夠有效降低南果梨果實(shí)的失重率、抑制呼吸速率,并且顯著降低呼吸高峰值。研究發(fā)現(xiàn),苯并噻重氮處理能夠顯著抑制南果梨果實(shí)呼吸速率的升高和失重率的增加,并保持較好的品質(zhì)。由此表明,采后安全化學(xué)藥物處理通過(guò)抑制呼吸速率和失重來(lái)保持果實(shí)的品質(zhì)。果實(shí)的硬度、可溶性固形物含量和可滴定酸是衡量果實(shí)貯藏品質(zhì)的重要指標(biāo)。果實(shí)硬度的下降主要由失水和果膠物質(zhì)降解等引起。于冠年[27]研究發(fā)現(xiàn),采后1-MCP處理明顯延緩南果梨果實(shí)果肉的硬度下降,抑制可溶性固形物含量的上升和可滴定酸的下降。本試驗(yàn)結(jié)果表明,甜菜堿處理有效抑制了南果梨果肉硬度和可滴定酸的下降;但可溶性固形物含量變化與前人研究結(jié)果有所差異,主要是因?yàn)樘鸩藟A延緩了南果梨果實(shí)后熟過(guò)程中淀粉轉(zhuǎn)化為可溶性糖。

    PG和PME是參與細(xì)胞壁降解的關(guān)鍵酶,PG將多聚半乳糖醛酸降解為半乳糖醛酸,使細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)解體;PME能作用于果膠,脫去甲氧基生成低甲氧基果膠;PGTE和PMTE屬于果膠裂解酶,PGTE裂解果膠酸分子中的 α-1,4糖苷鍵,而PMTE降解細(xì)胞壁中的果膠或甲酯化的多聚半乳糖醛酸[28]。程園等[29]研究發(fā)現(xiàn),硝普鈉處理能夠抑制南果梨果實(shí)PG、PME、PGTE和PMTE活性的升高,有效延緩南果梨果實(shí)的軟化。本研究發(fā)現(xiàn),甜菜堿處理顯著抑制了南果梨果實(shí)PG、PGTE、PME 和PMTE 活性的升高。由此表明,外源甜菜堿處理延緩果實(shí)的軟化與其抑制果膠物質(zhì)降解酶活性密切相關(guān)。

    綜上所述,外源甜菜堿處理能夠顯著抑制南果梨果實(shí)呼吸高峰值,并保持硬度,延緩失重率的增加,抑制可滴定酸的下降和可溶性固形物含量的升高,并且甜菜堿處理保持果實(shí)的品質(zhì)與其抑制細(xì)胞壁降解酶活性有關(guān)。

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