高速離心法消除脂血對臨床常規(guī)生化檢測項(xiàng)目的干擾分析

李宜錚，李麗莉，薛云松，周林華，李增安，王 芳，羅翔燕

云南省第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南昆明 650000

影響臨床生化實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果失真的常見檢驗(yàn)前因素有標(biāo)本溶血、脂血(乳糜血)、標(biāo)本稀釋、標(biāo)本類型錯誤等，及時識別出檢測的干擾因素并采取合適的應(yīng)對措施對保證檢測結(jié)果的可靠性具有重要意義。脂血是臨床生化檢驗(yàn)中常見的導(dǎo)致標(biāo)本不合格的因素之一，不同程度的脂血會對生化檢測結(jié)果造成不同的影響[1]?；颊邫C(jī)體代謝原因及注射脂肪乳等都會造成脂血標(biāo)本，因此，不同于其他不合格標(biāo)本，往往退回重采標(biāo)本的措施也無法避免脂血標(biāo)本發(fā)生。在日常檢驗(yàn)工作中，消除脂血對常規(guī)生化結(jié)果的影響具有實(shí)際意義。本研究采用高速離心法處理脂血標(biāo)本，探討高速離心前后常規(guī)生化項(xiàng)目檢測結(jié)果是否有差異。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來源 從2020年1-8月本院收治的患者中收集50份脂血標(biāo)本，血清外觀為乳白色，三酰甘油>16.05 mmol/L(試劑說明書的檢測上限)，標(biāo)本管為黃色血清管(含分離膠，無促凝劑)。

1.2儀器與試劑 雅培C-16000全自動生化分析儀、湘儀CTK120C自動脫蓋離心機(jī)、湘儀H1850高速離心機(jī)?？偟鞍?TP)、清蛋白(ALB)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)、尿酸(UA)、葡萄糖(Glu)檢測試劑均為美國雅培制藥有限公司產(chǎn)品(批號分別為36010UN19、36010UN19、41367UN19、54975UN19、51891UN19、33533UN19、28802UN19、55718UN19)，前清蛋白(PA)、總膽汁酸(TBA)、尿素氮(UREA)、載脂蛋白A1(APOA1)、載脂蛋白B(APOB)檢測試劑均為中生北控生物科技股份有限公司產(chǎn)品(批號分別為92637098、92685089、92618098、92651133、926532133)，總膽紅素(TBIL)、直接膽紅素(DBIL)檢測試劑均為日本和光純藥工業(yè)株式會社產(chǎn)品(批號分別為ER325、ER330)，肌酐(CREA)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、脂蛋白a(LPa)檢測試劑均為積水醫(yī)療科技(中國)有限公司產(chǎn)品(批號分別為844RLQ、838RKQ、840RLQ、829RHQ)。

1.3檢測項(xiàng)目 檢測項(xiàng)目包括TP、ALB、PA、TBIL、DBIL、TBA、AST、ALT、ALP、GGT、UREA、UA、CREA、GLU、HDL-C、LDL-C、APOA1、APOB、LPa共19項(xiàng)指標(biāo)。

1.4檢測方法 儀器參數(shù)設(shè)置按照儀器和試劑說明書進(jìn)行。質(zhì)控品為伯樂生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品(上海)有限公司多項(xiàng)生化質(zhì)控品，包括中值(批號45832)和高值(批號45833)兩個水平，檢測當(dāng)天儀器狀態(tài)正常，本研究檢測項(xiàng)目的質(zhì)控結(jié)果均在控，無失控和警告。收集門診和住院部患者生化檢測標(biāo)本，常規(guī)離心后進(jìn)行檢測，再將脂血血清高速離心后取下層清亮血清檢測相同項(xiàng)目，整個過程在2 h內(nèi)完成。將標(biāo)本管置于離心機(jī)，3 500 r/min常規(guī)離心法離心10 min，分離血清測定。高速離心法將常規(guī)離心后的血清分離至EP管中，15 000 r/min離心10 min，棄去上層懸浮的脂質(zhì)，吸取下層的清亮血清進(jìn)行測定。HDL-C、LDL-C檢測原理為直接法，APOA1、APOB、PA檢測原理為免疫比濁法，LPa檢測原理為膠乳凝集比濁法，TP檢測原理為雙縮腺法，ALB檢測原理為漠甲酚綠法，AST、ALT檢測原理為速率法，GGT檢測原理為左旋-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺底物法，ALP檢測原理為磷酸對硝基苯法，TBIL、DBIL檢測原理為鑰酸氧化法，TBA檢測原理為循環(huán)酶法，UREA檢測原理為酶耦聯(lián)速率法，UA檢測原理為尿酸酶法，CREA檢測原理為酶法，GLU檢測原理為己糖激酶法。

2 結(jié) 果

高速離心法離心后，APOA1、APOB、LPa、TP、ALB、PA、DBIL、UA、CREA、GLU的檢測結(jié)果與常規(guī)離心法離心后檢測結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而兩種不同離心方法離心后的HDL-C、LDL-C、AST、ALT、GGT、ALP、TBIL、TBA、UREA檢測結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩種離心方式的生化項(xiàng)目檢測結(jié)果比較

離心方法PA(mg/L)AST(U/L)ALT(U/L)GGT(U/L)ALP(U/L)TBIL(μmol/L)常規(guī)離心法11.29±3.1135.02±21.0933.41±4.5583.55±18.5486.28±28.1811.87±2.13高速離心法284.59±47.4034.8±21.3234.53±3.9783.37±17.7386.04±28.5014.24±6.19P<0.0010.3710.2850.5160.2940.154

離心方法DBIL(μmol/L)TBA(μmol/L)UREA(μmol/L)UA(μmol/L)CREA(μmol/L)GLU(mmol/L)常規(guī)離心法3.98±1.295.19±2.534.89±1.36399.37±109.4672.06±22.557.28±3.37高速離心法4.64±1.285.19±2.594.91±1.35412.82±112.6874.63±22.787.44±3.40P<0.0010.9110.121<0.001<0.001<0.001

3 討 論

常規(guī)生化檢驗(yàn)(肝功、腎功、血糖、血脂)是臨床醫(yī)生在為門診和住院患者診療過程中開具的最常見檢驗(yàn)項(xiàng)目。近年來，隨著人民群眾生活水平的提高，由于飲食攝入過多脂質(zhì)和代謝紊亂造成的高脂血癥患者不斷增加，在日常檢驗(yàn)工作中血清外觀呈“奶白色”的乳糜血越來越常見。同時，某些需要靜脈注射脂肪乳的患者也會出現(xiàn)類似問題。當(dāng)標(biāo)本中三酰甘油水平過高，外觀表現(xiàn)為奶白色時，其中的大量乳糜微粒(CM)會對入射光產(chǎn)生散射，對生化項(xiàng)目檢測結(jié)果產(chǎn)生影響，甚至導(dǎo)致出現(xiàn)負(fù)值結(jié)果或無法測出結(jié)果[2-3]，需要檢驗(yàn)人員給予額外關(guān)注以消除干擾。臨床實(shí)驗(yàn)室常用的幾種消除脂血對檢測結(jié)果影響的方法包括生理鹽水稀釋法、高速離心法、有機(jī)溶劑(乙醚)抽提法、干化學(xué)法[1-5]。生理鹽水稀釋法對于結(jié)果正?；驒z測值較低的項(xiàng)目會產(chǎn)生較明顯的誤差，通常只適用于對總?cè)８视秃涂偰懝檀歼M(jìn)行低倍數(shù)(3倍)稀釋后檢測。乙醚抽提法會對部分項(xiàng)目的檢測過程產(chǎn)生干擾[5]，并有可能對實(shí)驗(yàn)室工作人員的健康產(chǎn)生不利影響，而且乙醚屬于危險(xiǎn)化學(xué)品，在安全儲存方面也有額外的要求。干化學(xué)法消除脂血對檢測結(jié)果的影響效果比較明顯，但需要實(shí)驗(yàn)室額外購置相應(yīng)的儀器，且干化學(xué)法檢測成本較高，實(shí)驗(yàn)室需增加預(yù)算，同時還需要進(jìn)行儀器間比對等工作。高速離心法操作簡單、快速，能較好地滿足臨床生化實(shí)驗(yàn)室的日常工作需求。本研究針對TP、ALB、PA、TBIL、DBIL、TBA、AST、ALT、ALP、GGT、UREA、UA、CREA、GLU、HDL-C、LDL-C、APOA1、APOB、LPa共19項(xiàng)指標(biāo)，比較常規(guī)離心法和高速離心法離心后的檢測結(jié)果，分析高速離心法對消除脂血對常規(guī)生化檢驗(yàn)項(xiàng)目的影響所具有的實(shí)用價值。

本研究結(jié)果顯示，APOA1、APOB、LPa、TP、ALB、PA、DBIL、UA、CREA、GLU這10項(xiàng)指標(biāo)在高速離心法離心后檢測結(jié)果均有變化，與常規(guī)離心法比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而高速離心法離心后HDL-C、LDL-C、AST、ALT、GGT、ALP、TBIL、TBA、UREA的檢測結(jié)果無明顯變化，與常規(guī)離心法離心后檢測結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，提示高速離心法降低脂血標(biāo)本中CM的干擾后，對保證部分生化檢測結(jié)果準(zhǔn)確性有一定意義。從各項(xiàng)目檢測的方法學(xué)可看出，脂血對免疫比濁法的檢測結(jié)果有明顯干擾，顏彥等[6]的研究也得出同樣的結(jié)論。另外，TP、ALB、GLU這3項(xiàng)為單試劑單波長的檢測項(xiàng)目，高速離心法離心后檢測結(jié)果與常規(guī)離心法離心后檢測結(jié)果比較，差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示可能是單試劑檢測對脂血的抗干擾能力較弱。本研究結(jié)果與部分文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果稍有區(qū)別[7-10]，可能的影響因素有：(1)各個研究使用的檢測系統(tǒng)不盡相同，儀器和試劑的性能參差不齊，干擾機(jī)制和抗干擾能力也有較大差異；(2)對脂血標(biāo)本的高速離心程序沒有標(biāo)準(zhǔn)化，處理過程不夠詳盡；(3)本研究所選取的50份脂血標(biāo)本(常規(guī)離心法離心后血清乳白色，檢測三酰甘油>16.05 mmol/L)屬于高度脂血標(biāo)本，與輕度脂血、中度脂血標(biāo)本結(jié)果可能有差異。

高速離心法處理脂血操作性強(qiáng)，簡便易行，對消除脂血對部分生化檢測項(xiàng)目的干擾有較好的實(shí)用價值，對保證臨床實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果的可靠性有幫助。在臨床實(shí)驗(yàn)室的日常工作中，許多情況下無法簡單地將脂血標(biāo)本判定為不合格標(biāo)本而退回標(biāo)本，重新采集標(biāo)本，例如，由于患者自身病理狀態(tài)造成的脂血、部分急診患者需要評估當(dāng)前的機(jī)體指標(biāo)、門診患者采血后無法召回時，檢驗(yàn)人員只能使用現(xiàn)有條件對標(biāo)本進(jìn)行處理后以發(fā)出相對準(zhǔn)確的檢測報(bào)告[8-9]，高速離心法處理脂血標(biāo)本不失為一個簡單實(shí)用的方法。另外，分析脂血標(biāo)本對不同生化檢測項(xiàng)目的干擾程度，對比不同的儀器、試劑和檢測方法(包括波長、反應(yīng)杯材質(zhì)、吸光度或濁度的檢測間隔時間等)對檢測結(jié)果的影響，能夠給日常檢驗(yàn)工作提供更多的參考價值，如實(shí)驗(yàn)室在選擇檢測系統(tǒng)時對其抗干擾的能力給予額外的關(guān)注，實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)自身情況配置2套或以上不同檢測原理的檢測系統(tǒng)，以便減少干擾，同時實(shí)驗(yàn)室還應(yīng)針對在用檢驗(yàn)系統(tǒng)的性能，加強(qiáng)對工作人員相關(guān)操作能力的培訓(xùn)[10]。在自動化程度越來越高的流水線檢測系統(tǒng)中，通過對檢測結(jié)果的綜合分析，識別出受到干擾的標(biāo)本進(jìn)行復(fù)檢，對臨床診療過程十分重要。檢驗(yàn)人員應(yīng)對檢驗(yàn)前質(zhì)量控制的重要性提高認(rèn)識，建立規(guī)范、合理、高效的標(biāo)準(zhǔn)化處理流程，及時將脂血標(biāo)本識別出來，以減少其對檢測結(jié)果的干擾，為臨床提供更準(zhǔn)確的報(bào)告。