油桐花水提物對大鼠燙傷創(chuàng)面的促愈作用研究

彭 健，王永萍，劉 欣

（貴州中醫(yī)藥大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，貴州 貴陽 550002）

燒燙傷是指人們在生活或工作中被沸水、油燙傷，或者是被火、電、化學(xué)藥物等灼燒，引起皮膚起泡或深層組織感染、潰爛、形成疤痕，甚至傷及內(nèi)臟的一種復(fù)雜的外科疾病[1]。西醫(yī)常采用抗生素和手術(shù)治療燒燙傷，雖有一定的療效，但患者常常出現(xiàn)創(chuàng)面收斂緩慢、耐藥菌產(chǎn)生以及機(jī)體免疫功能降低等不良反應(yīng)。由于燒燙傷破壞了皮膚的防御功能，并且大量的壞死組織和細(xì)胞在創(chuàng)面生成，容易滋生細(xì)菌，造成感染[2-3]。因此，縮短燙傷創(chuàng)面的愈合時(shí)間，對于燒燙傷病人的恢復(fù)具有重要意義。中醫(yī)認(rèn)為燒燙傷屬于“火毒、熱毒”，常因火毒熱氣內(nèi)攻，致皮肉潰爛，加重病情[4]。油桐花（Tung flower）又稱桐子花，具有清熱、解毒、化瘀、收斂生肌等作用[5]，已有古人用其治療燒燙傷，常能獲得療效。本實(shí)驗(yàn)擬通過觀察油桐花水提物對燙傷大鼠創(chuàng)面愈合率及體重的影響，證明其對燙傷創(chuàng)面的促愈作用，為油桐花水提物在臨床的推廣應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物 從長沙天勤生物公司購SPF級Wistar雄性大鼠60只，體質(zhì)量為（150 ± 15） g。動物許可證：SCXK（湘）2019-0013；實(shí)驗(yàn)動物合格證編號：NO.1107262011001163。

1.1.2 藥品與試劑 硫化鈉（批號：20191210，中國醫(yī)藥集團(tuán)有限公司）；濕潤燒傷膏（批號：13923911455，汕頭市美寶制藥有限公司）；蘇木素染液（批號：C200301，珠海貝索生物技術(shù)有限公司）；伊紅染液（批號：C200403，珠海貝索生物技術(shù)有限公司）。

1.1.3 主要儀器 QE-300型中藥粉粹機(jī)（浙江屹立工貿(mào)有限公司）；YLS-5Q型燙傷儀（山東益延科技有限公司）；KD-BM型包埋機(jī)（浙江金華科迪儀器設(shè)備有限公司）；YD-335型石蠟切片機(jī)（浙江金華科迪儀器設(shè)備有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 藥材處理 油桐花是大戟科植物油桐Vernicia fordii(Hemsl.) Airy Shaw的花[6]。油桐樹在四川南部丘陵地帶有廣泛分布，油桐花盛開于三月底至四月，新鮮油桐花采自四川省峨眉山市黃灣鎮(zhèn)，花和蒂一并采摘，并由貴州中醫(yī)藥大學(xué)孫慶文教授鑒定。日光下曬干，用粉碎機(jī)將其粉碎，裝入密封塑料袋，備用。前期課題組研究證明油桐花活性部位為其水提物。

1.2.2 油桐花水提物制備 精密稱取油桐花粉末30 g，裝入盛有300 mL蒸餾水的圓底燒瓶，浸泡30 min，恒溫水浴鍋加熱回流2 h，紗布過濾3次，并將紗布中殘留的液體壓出，即得油桐花水提物濃度0.1 g/mL（低劑量）。按上述方法制得油桐花濾液后倒入蒸發(fā)皿中，電爐加熱濃縮，制得濃度0.6、0.3 g/mL油桐花水提物，即高劑量、中劑量[6]。

1.2.3 動物造模及給藥 參考課題組前期經(jīng)驗(yàn)[6-7]，大鼠隨機(jī)分組：正常組（n= 10）、造模組（n=50），適應(yīng)喂養(yǎng)7 d。20%硫化鈉脫背毛，24 h后，造模大鼠腹腔注射10%水合氯醛，充分麻醉后標(biāo)記燙傷位置，為兩耳連線中點(diǎn)后5 cm。YLS-5Q控溫燙傷儀設(shè)置溫度120 ℃，實(shí)際溫度約90 ℃，3#燙頭（約2.5 cm2）緊貼皮膚燙傷18 s。燙傷前設(shè)置空調(diào)溫度為26 ℃，防止大鼠體溫過低而死亡。燙傷3 d后，隨機(jī)選模型大鼠1只剪取燙傷全層皮膚，放入4%多聚甲醛溶液固定，做HE染色與正常組對比，證明造模是否成功。造模成功后再分為模型組、陽性組（濕潤燒傷膏組）、油桐花水提物高、中、低劑量組，每組10只，用記號筆標(biāo)記。分別用棉簽蘸取油桐花水提取物高、中、低劑量溶液對創(chuàng)面進(jìn)行均勻涂抹，每次1 mL，1次/d。陽性組用棉簽蘸取濕潤燒傷膏均勻涂抹，厚度不超過1 mm，連續(xù)21 d，1次/d。正常組和模型組不給藥。

1.2.4 取材 用藥21 d后剪取正常組皮膚及各燙傷組燙傷全層皮膚組織，放入4%多聚甲醛固定，備用。

1.2.5 指標(biāo)檢測 給藥前、給藥后每周用相機(jī)拍攝各組患處并測量面積和稱體重。藥物干預(yù)21 d后，油桐花水提物對燙傷大鼠創(chuàng)面愈合的影響可用創(chuàng)面大體圖片、面積及損傷皮膚HE染色來觀察，并進(jìn)行分析。

1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS 25.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差±s）表示，多組間比較采用方差分析。以P< 0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 燙傷大鼠模型建立驗(yàn)證

大鼠皮膚燙傷后1 d顏色灰白、腫脹，與正常皮膚分界清楚，之后壞死皮膚逐漸發(fā)黑，失水干燥、發(fā)硬，表面凹凸不平，壞死皮膚邊緣翹起。若造模成功，病理切片可見表皮和真皮大面積壞死、皮下肌纖維變性壞死、炎性細(xì)胞浸潤、出血等一系列病理改變，見圖1。實(shí)驗(yàn)過程中對翹起的死皮做清創(chuàng)處理，見創(chuàng)面呈粉紅色，邊緣有菲薄的新生上皮形成。同時(shí)傷口周圍正常皮膚收縮，使傷口總面積逐漸縮小，各組創(chuàng)面表現(xiàn)基本類似。以油桐花低劑量組為例，大鼠創(chuàng)面及周圍皮膚無紅腫，無膿性分泌物溢出。創(chuàng)面由基底部生長的鮮紅色肉芽逐漸生長出新生皮膚覆蓋創(chuàng)面至完全愈合，符合皮膚創(chuàng)面正常愈合規(guī)律。

圖1 大鼠造模前后皮膚組織形態(tài)學(xué)變化（HE，400×）Fig.1 Histomorphological changes of rats skin before and after modeling（HE，400×）

2.2 油桐花水提物對大鼠燙傷創(chuàng)面的影響

燙傷大鼠創(chuàng)面恢復(fù)圖片，見圖2，不同劑量油桐花水提物和濕潤燒傷膏對大鼠燙傷創(chuàng)面恢復(fù)有明顯效果，與模型組比較傷口明顯減小。

圖2 油桐花水提物對燙傷大鼠創(chuàng)面的影響（大體圖片）Fig.2 Effects of aqueous extract of Tung flower on scalded wound in rats (general picture)

2.3 大鼠皮膚組織形態(tài)學(xué)變化

大鼠皮膚HE染色顯示，正常皮膚組織表皮結(jié)構(gòu)完整清晰，角化層明顯，復(fù)層扁平上皮層較薄，細(xì)胞排列整齊緊密；真皮內(nèi)膠原纖維排列整齊，胞質(zhì)紅染、均勻；皮下脂肪層及肌層結(jié)構(gòu)清晰可見，脂肪細(xì)胞及肌纖維排列整齊、致密，體積大小均一，細(xì)胞核形態(tài)正常。模型組皮膚有大批纖維組織增生及炎性細(xì)胞，大批皮下組織變性、壞死。與模型組相比，陽性組和高劑量組皮膚組織損傷區(qū)域可見部分膠原纖維交錯排列和較多的纖維細(xì)胞，少量炎性細(xì)胞浸潤，以淋巴細(xì)胞為主，提示皮膚組織損傷修復(fù)程度相對最好；低劑量組和中劑量組皮膚組織損傷區(qū)域可見較多的纖維細(xì)胞，炎性細(xì)胞較少，提示皮膚組織損傷修復(fù)程度相對較好，見圖3。

圖3 油桐花水提物對燙傷大鼠皮膚組織病理變化的影響（HE，400×）Fig.3 Effects of aqueous extract of Tung flower on the pathological changes of skin tissue in scalded rats（ HE，400×）

2.4 油桐花水提物對燙傷大鼠體重的影響

大鼠造模后體重增長緩慢。給藥14 d后，模型組大鼠體重低于正常組（P< 0.01）；陽性組、油桐花水提物各劑量組體重均高于模型組（P< 0.05）。 給藥21 d后，模型組大鼠體重仍低于正常組（P< 0.01）；陽性組、油桐花水提物各劑量組體重均高于模型組（P< 0.01），見表1。

表1 油桐花水提物對大鼠體重的影響（±s，g）Tab .1 Effects of aqueous extract of Tung flower on body weight of rats（±s，g）

表1 油桐花水提物對大鼠體重的影響（±s，g）Tab .1 Effects of aqueous extract of Tung flower on body weight of rats（±s，g）

注：模型組與正常組相比，#P < 0.05，##P< 0.01；其余組與模型組相比，*P < 0.05，**P< 0.01。

組別 n 給藥前 7 d 14 d 21 d正常組 10 208.2 ± 15.9 239.7 ± 12.3 288.6 ± 8.4 329.7 ± 8.4模型組 10 214.7 ± 16.2 242.6 ± 13.1 273.1 ± 10.3##305.8 ± 5.9##陽性組 10 213.4 ± 16.1 240.3 ± 16.8 289.2 ± 9.8** 327.2 ± 10.2**油桐花水提物10 222.6 ± 6.4 252.0 ± 5.4 288.3 ± 4.4** 326.7 ± 3.7**油高桐劑花量水組提物10 221.4 ± 8.5 251.0 ± 9.2 291.6 ± 7.6** 325.7 ± 11.1**油中桐劑花量水組提物10 218.4 ± 14.1 245.3 ± 19.0 284.7 ± 16.4* 321.1 ± 14.1**低劑量組F 1.621 1.561 4.249 18.389 P 0.17 0.194 0.006 0.000

2.5 油桐花水提物對燙傷大鼠傷口面積及愈合率的影響

分別在給藥前1 d，給藥后7、14、21 d，對傷口創(chuàng)面攝影，并采用描記稱重法測定，即燙傷后2 d的創(chuàng)面面積作為燙傷面積，用透明的方格紙鋪在燙傷處，描出對應(yīng)時(shí)間的創(chuàng)面面積，按描下的筆跡剪下，以此為模板將質(zhì)地均勻的硬紙片剪成同樣大小，以質(zhì)量代替面積，創(chuàng)面愈合率（%）=（燙傷面積-各時(shí)相點(diǎn)面積）/燙傷面積×100%。

給藥7 d后，陽性組和油桐花水提物高、中劑量組比模型組大鼠創(chuàng)面小、愈合率高（P< 0.05、P<0.01）；陽性組比中劑量組創(chuàng)面大、愈合率低（P<0.05）。給藥14 d后，陽性組和油桐花水提物各組比模型組大鼠創(chuàng)面明顯縮小、愈合率明顯升高（P<0.05、P< 0.01）。給藥21 d后，陽性組和油桐花水提物各組比模型組創(chuàng)面均明顯縮小、愈合率均明顯升高（P< 0.01）；中劑量組比陽性組大鼠創(chuàng)面小、愈合率高（P< 0.05），見表2、表3。

表2 油桐花水提物對大鼠傷口面積的影響（±s，cm2）Tab. 2 Effects of aqueous extract of Tung flower on wound area in rats（±s，cm2）

表2 油桐花水提物對大鼠傷口面積的影響（±s，cm2）Tab. 2 Effects of aqueous extract of Tung flower on wound area in rats（±s，cm2）

注：與模型組相比，#P < 0.05，##P< 0.01；與陽性組相比，*P < 0.05，**P< 0.01。

組別 n 7 d 14 d 21 d模型組 10 1.77 ± 0.10* 1.01 ± 0.14* 0.56 ± 0.11**陽性組 10 1.62 ± 0.18# 0.86 ± 0.15# 0.22 ± 0.11##油桐花水提物10 1.49 ± 0.16## 0.81 ± 0.16## 0.27 ± 0.11##高劑量組油桐花水提物10 1.37 ± 0.12##* 0.76 ± 0.06## 0.11 ± 0.05##*油中桐劑花量水組提物10 1.66 ± 0.18 0.89 ± 0.15# 0.34 ± 0.11##低劑量組F 10.614 4.362 25.644 P 0.000 0.005 0.000

表3 油桐花水提物對大鼠傷口愈合率的影響（±s，%）Tab. 3 Effects of aqueous extract of Tung flower on wound healing rate of rats（ ±s，%）

表3 油桐花水提物對大鼠傷口愈合率的影響（±s，%）Tab. 3 Effects of aqueous extract of Tung flower on wound healing rate of rats（ ±s，%）

注：與模型組相比，#P < 0.05，##P< 0.01；與陽性組相比，*P < 0.05，**P< 0.01。

組別 n 7 d 14 d 21 d模型組 10 29.24 ± 4.06* 59.76 ± 5.86* 76.56 ± 5.99**陽性組 10 35.20 ± 7.38# 65.44 ± 5.99# 91.04 ± 4.32##油桐花水提物10 40.60 ± 6.19## 67.60 ± 6.59## 89.20 ± 4.49##高劑量組油桐花水提物10 45.36 ± 4.80##* 69.64 ± 2.20## 95.68 ± 2.17##*中劑量組油桐花水提物10 33.80 ± 7.21 64.48 ± 6.36 86.32 ± 4.42##*低劑量組F 10.614 4.362 25.644 P 0.000 0.005 0.000

3 討論

在本研究中，給藥21 d后，正常組大鼠體重最重，模型組體重最輕，陽性組、油桐花水提物各組體重與正常組差異不明顯；與模型組比較，差異明顯，這表明油桐花水提物能快速恢復(fù)燙傷大鼠體重。比較各組大鼠創(chuàng)面面積，油桐花水提物中劑量組創(chuàng)面面積最小，模型組創(chuàng)面面積最大，油桐花水提物各組與模型組相比，差異明顯；而油桐花水提物各組與陽性組相比，差異不明顯，這表明給予油桐花水提物后，能夠有效促進(jìn)燙傷大鼠創(chuàng)面愈合。通過測量比較各組愈合率，中劑量組最高，陽性組次之，模型組最低。油桐花水提物各組與模型組相比，差異明顯；而油桐花水提物各組與陽性組相比，差異不明顯，這表明油桐花水提物外用后，能夠提高燙傷大鼠創(chuàng)面愈合率。

燙傷后大鼠健康狀態(tài)惡化，疼痛導(dǎo)致體溫下降，活動度降低，飲食和飲水量下降導(dǎo)致體重增長緩慢，燙傷部位焦痂形成疤痕，嚴(yán)重者創(chuàng)面缺血壞死、感染、潰爛[8-10]。由此可見，皮膚組織損害是燒燙傷造成的直接后果[11]，創(chuàng)面組織細(xì)胞缺血缺氧、感染、壞死導(dǎo)致病情惡化，病程延長[12-13]。油桐花通過抗炎鎮(zhèn)痛、清熱解毒、收斂生肌的作用機(jī)理，可縮短燙傷病程，減少疤痕形成[14]。李金鳳等[6]通過研究油桐花水提取物干預(yù)燙傷大鼠Bcl-2、Bax表達(dá)發(fā)現(xiàn)，油桐花水提物可抑制細(xì)胞凋亡，改善創(chuàng)面缺氧環(huán)境，促進(jìn)燙傷創(chuàng)面修復(fù)。張世鳳等[5]采用不同溶劑提取油桐花有效成分的研究發(fā)現(xiàn)，水提物效果最優(yōu)，鎮(zhèn)痛作用最持久。

本研究表明油桐花水提物能減輕燙傷大鼠的疼痛，提高食欲，恢復(fù)其正?；顒樱Чc陽性藥物相當(dāng)。油桐花水提物給藥后，大鼠體重增加較快，創(chuàng)面愈合較快，各劑量組都有不同程度的效果，尤其以中劑量效果最好，說明油桐花水提物對燙傷具有明顯的促愈作用。

4 結(jié)論

油桐花水提物可促進(jìn)燙傷皮膚組織損傷修復(fù)，快速恢復(fù)燙傷大鼠體重，收斂創(chuàng)口，加快創(chuàng)面愈合速度，縮短療程。油桐花水提物濃縮后與浸膏相似，可在創(chuàng)面形成保護(hù)膜，隔絕氧氣、細(xì)菌，起到抗炎、消腫止痛、保濕、收斂傷口的作用。油桐樹易推廣種植，經(jīng)濟(jì)實(shí)用，且油桐花水提物提取工藝簡單，便于臨床開發(fā)應(yīng)用，有利于發(fā)揮中醫(yī)藥特色作用。但油桐花有小毒，如何將油桐花水提物中的毒性成分去除，以保證高效安全，且水提物不宜長時(shí)間存放，如何延長保質(zhì)期，以及水提物中含有多少單體成分和具體分子作用機(jī)制，都是下一步研究的方向和要解決的問題。