血清NSE、ProGRP 與肺癌患者病理學特征及化療效果的關(guān)系

冷 濤，楊貴萍，吳進軍

肺癌（lung cancer，LC）的整體發(fā)病率和死亡率均明顯上升，全國腫瘤登記中心統(tǒng)計顯示，肺癌每年的新發(fā)病例數(shù)量超過70 萬人，且存在逐年增高的趨勢［1］。 肺癌可導致惡性腫瘤患者短期內(nèi)病情惡化速度的增加，影響患者預(yù)后［2］。 如何評估肺癌的嚴重程度、制定合適的治療方案及評估療效在綜合治療肺癌方面具有重要意義。 目前的研究結(jié)果顯示，血清學腫瘤指標能夠在肺癌患者的診療和病情評估工作提供一定的參考，指導臨床上預(yù)后和高危隨訪工作。 神經(jīng)源性烯醇化酶（neuron-specific enolase，NSE）的表達上升能夠催化磷酸甘油的降解，參與到丙酮酸的代謝，影響肺泡上皮細胞的異常代謝， 提高上皮細胞的增殖速度， 大量研究也顯示了NSE 在肺癌患者外周血呈高表達，可用于輔助診斷肺癌［3-4］。胃泌素釋放肽前體（pro-gastrin-releasing peptide，ProGRP）既往認為其主要存在在消化道腺體上皮組織中，近年來發(fā)現(xiàn)在呼吸系統(tǒng)上皮細胞中也存在 ProGRP 表達［5］。 ProGRP 的表達上升，能夠反應(yīng)上皮細胞DNA 增殖和分裂的速度，提高上皮細胞的細胞周期調(diào)控異常的風險［6］。 肺癌按病理學類型可分為鱗癌、 腺癌和小細胞癌3 類， 盡管大量研究分析了NSE、ProGRP 在肺癌高表達的意義， 但NSE、ProGRP 與各類肺癌的病變的關(guān)系還尚不完全明晰。 為揭示NSE、ProGRP 的表達與肺癌及與各類病變的關(guān)系， 本次研究選取2017 年1 月 ~2018 年 1 月確診的肺癌患者 180 例，探討 NSE、ProGRP 的表達及其與肺癌患者臨床病理特征和治療預(yù)后的關(guān)系。

1 對象與方法

1.1 對象 選取2017 年1 月 ~ 2019 年1 月云夢縣人民醫(yī)院確診的肺癌患者180 例 （肺癌組）、 健康體檢對象180 例（對照組）。 肺癌組，年齡 44 ~ 76 歲，平均年齡（60.3 ± 11.6）歲 ；男 102 例 、女 78 例 ；體 質(zhì) 量 指 數(shù) （21.56 ± 1.36）kg/m2；TNM 分期Ⅰ期 44 例、Ⅱ期 60 例、Ⅲ期 58 例、Ⅳ期 18 例；病理學腺癌80 例、鱗癌36 例、小細胞肺癌64 例；其中未接受手術(shù)治療、僅接受化療的患者有76 例。 對照組，年齡45 ~ 78歲，平均年齡（61.6 ± 10.9）歲，男 96 例、女 84 例；體質(zhì)量指數(shù)（21.58 ± 1.45）kg/m2。 兩組研究對象的年齡、性別和體質(zhì)量指數(shù)比較差異無統(tǒng)計學意義（P ＞0.05）。

納入標準：（1） 肺癌患者的診斷標準依據(jù)人民衛(wèi)生出版社《診斷學》、《外科學》第八版中的標準；（2）經(jīng)胸部 CT、MRI檢查初步確診，具有影像學可見的實體病灶，經(jīng)纖支鏡病理學檢查或術(shù)后病理學檢查證實；（3）年齡≤79 歲；（4）均為首診患者；（5）對照組為健康體檢志愿者；（6）本研究獲得醫(yī)學倫理委員會的批準，患者的各項基礎(chǔ)資料完整。

排除標準：（1）長期使用免疫抑制劑；（2）既往具有放化療病史；（3）轉(zhuǎn)移性肺癌、其他部位伴有惡性腫瘤；（4）伴有結(jié)締組織疾病、強直性脊柱炎、風濕性疾病的患者。

1.2 方法 采集患者入院后24 h 內(nèi)或者治療后6 ~ 8 h 內(nèi)的肘部靜脈血4 ml，離心半徑10 cm、1 500 r/min 離心15 min，收集上清液， 在每個聚苯乙烯板中加入上述液體0.1 ml，4℃過夜孵育，加入磷酸鹽緩沖液洗滌3 次，每次3 min，在每個聚苯乙烯板孔中加入 NSE、ProGRP 抗體（1∶800，購自南京伯斯金生物公司），37℃孵育30 min，加入磷酸鹽緩沖液洗滌 3 次，每次 3 min，每孔中加入 TMB 溶液底物 0.1 ml，37℃、20 min，加入 2 mol/L 硫酸 0.05 ml 終止反應(yīng)，采用 DG5033A酶標儀（南京華東電子科技公司）進行OD 值檢測。

1.3 臨床效果評價 近期療效評價標準參照WHO 實體瘤療效評價標準分為完全緩解（complete response，CR）、部分緩解（partial response，PR）、疾病穩(wěn)定（stable disease，SD）、疾病進展（progressive disease，PD）。 CR：可見病灶完全消失，維持一個月以上。 PR：腫瘤最大直徑及最大垂直直徑的乘積縮小達到50%以上。 SD：腫瘤最大直徑及最大垂直直徑的乘積縮?。?0%，增大＜25%。PD：患者出現(xiàn)1 個或多個病灶的腫瘤最大直徑及最大垂直直徑的乘積> 25%。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 16.0 統(tǒng)計軟件，計量數(shù)據(jù)表述采用（）表示，組間比較采用t 檢驗、單因素方差分析法，計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗， 以P ＜0.05 說明差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對象血清NSE、ProGRP 水平比較 肺癌組患者 血 清 NSE、ProGRP 為 （29.41 ± 13.30）ng/L 、 （133.12 ±86.72）ng/L， 均顯著高于對照組（4.52 ± 1.40）ng/L、（29.81 ±13.22）ng/L，差異有統(tǒng)計學意義（t=24.980、15.801，P ＜ 0.05）。

2.2 不同病理學特征肺癌患者血清NSE、ProGRP 水平比較Ⅲ期、 Ⅳ期肺癌組患者血清NSE、ProGRP 水平顯著的高于Ⅰ期和Ⅱ期肺癌患者，差異具有統(tǒng)計學意義（P ＜0.05）；小細胞肺癌患者血清NSE、ProGRP 水平顯著的高于鱗癌、腺癌患者，差異具有統(tǒng)計學意義（P ＜0.05），鱗癌患者血清ProGRP水平顯著的高于腺癌患者（P ＜0.05，表1）。

表1 不同病理學特征肺癌患者血清NSE、ProGRP 水平比較（）

表1 不同病理學特征肺癌患者血清NSE、ProGRP 水平比較（）

項目 例數(shù) NSE（ng/L）TNM 分期Ⅰ+Ⅱ期 104 20.71 ± 9.04Ⅲ+Ⅳ期 76 43.91 ± 8.61病理學類型鱗癌 36 17.33 ± 7.51腺癌 80 19.01 ± 8.21小細胞癌 64 60.13 ± 12.53 t/F 值17.349 368.560 P 值 ProGRP（ng/L） t/F 值 P 值0.000 22.470 0.000 47.82 ± 23.01 238.51 ± 82.33 0.000 389.065 0.000 58.91 ± 28.11 34.22 ± 16.41 251.31 ± 76.22

2.3 不同化療效果的肺癌患者血清NSE、ProGRP 水平比較76 例直接接受化療的肺癌患者， 達到CR 4 例、 達到PR 36例、達到SD 32 例、達到PD 4 例；CR+PR 患者在化療后的血清 NSE、ProGRP 水平為（6.91 ± 3.24）ng/L、（35.81 ± 15.22）ng/L， 均顯著低于 SD+SD 患者（13.42 ± 6.11）ng/L、（84.72 ±39.62）ng/L，差異具有統(tǒng)計學意義（t=5.884、7.241，P ＜ 0.05）。

3 討論

肺泡上皮細胞的周期調(diào)控紊亂、上皮細胞腫瘤易感性的改變或者家族性的遺傳因素，均能夠?qū)е路伟┑陌l(fā)生［7］。 肺癌患者的臨床預(yù)后分析研究顯示， 其5 年生存率不足45%，治療后的總體生存時間和中位生存時間均無明顯的改善［8］。現(xiàn)階段臨床上主要通過血清糖類抗原125（carbohydrate antigen 125，CA125）或者糖類抗原 199（carbohydrate antigen 199，CA199）等腫瘤指標評估肺癌患者的臨床轉(zhuǎn)歸。 雖然相關(guān)血清腫瘤相關(guān)指標能夠提高肺癌患者的臨床預(yù)后評估水平，但部分研究者認為，采用傳統(tǒng)的CA125 等指標評估肺癌臨床轉(zhuǎn)歸的靈敏度較低，不足35%，通過CA125 評估肺癌患者臨床預(yù)后的一致性率不足40%［9］。 而繼續(xù)尋找潛在的血清學腫瘤相關(guān)指標，具有重要的現(xiàn)實指導意義。

NSE 是神經(jīng)源性相關(guān)蛋白，其能夠參與到磷酸肌醇的代謝過程，影響到丙酮酸進入線粒體的速度。 肌醇方面的研究認為，NSE 不僅能夠影響到癌細胞間生物信號通路的傳遞，同時還能夠?qū)е履[瘤細胞內(nèi)PI3K 信號通路的激活， 增加癌細胞的增殖和調(diào)控的異常［10］。 ProGRP 主要存在于消化道或者呼吸道上皮組織， 在作為上皮細胞的骨架成分蛋白之一，在癌細胞異常增殖和凋亡的過程中，ProGRP 可以顯著釋放入血，導致外周血中ProGRP 表達升高。大多數(shù)小細胞肺癌或其他類型的肺癌細胞，能夠通過分泌ProGRP，促進臨近腫瘤細胞膜表面糖蛋白的激活，加劇癌細胞的粘附和轉(zhuǎn)移［11］。 部分研究者以及探討了NSE 或者ProGRP 的表達與肺癌的關(guān)系，認為兩者的高表達與肺癌的發(fā)生密切相關(guān)，但缺乏對于治療后的 NSE、ProGRP 比較［12］。

本研究對于肺癌患者血清中NSE、ProGRP 的表達分析研究可見，在病例組患者中，NSE、ProGRP 的表達濃度均明顯上升，提示了NSE、ProGRP 的表達可能影響到了肺癌的病情進展。 分析其基礎(chǔ)方面的原因，考慮與NSE、ProGRP 的下列幾個方面的作用有關(guān)［13］：（1）NSE 的上升能夠反應(yīng)肺泡上皮細胞的異常核分裂過程，在癌細胞持續(xù)自我增殖的過程中，線粒體功能的增強能夠顯著促進囊泡釋放NSE。 小細胞肺癌作為神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤，可表現(xiàn)神經(jīng)內(nèi)分泌細胞的特性，可產(chǎn)生NSE， 存在轉(zhuǎn)移病灶的患者血清NSE 明顯高于無轉(zhuǎn)移病灶者。 本研究結(jié)果亦顯示，與鱗癌與腺癌相比，小細胞肺癌的NSE 水平明顯增高，具有較高的特異性和靈敏度。張志強等［14］也發(fā)現(xiàn)了與本次研究較為相似的結(jié)論，其認為在非小細胞肺癌患者中，NSE 的表達濃度可平均上升30%以上，在合并有明顯的局部轉(zhuǎn)移或者胸水的患者中，NSE 的表達濃度上升更為顯著。 （2）ProGRP 是肺泡上皮細胞的結(jié)構(gòu)性蛋白，在癌細胞凋亡和碎裂的過程中，ProGRP 可以釋放入血，同時釋放入血的ProGRP 還能夠提高癌細胞內(nèi)蛋白激酶B 或者轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）信號通路的激活程度，進而促進肺癌的病情進展。探討相關(guān)指標的表達與肺癌患者臨床病理特征的關(guān)系過程中發(fā)現(xiàn)， 在臨床分期較晚的患者中，NSE、ProGRP 的表達濃度均明顯上升， 提示了相關(guān)指標的表達與肺癌患者的臨床病理特征的進展密切相關(guān)， 這主要由于NSE、ProGRP 的上升可影響肺泡上皮細胞的生物學特征，導致上皮細胞粘附和浸潤能力的增強［15］。在不同的細胞來源類型肺癌中， 鱗癌患者中ProGRP 的表達較高， 這主要由于ProGRP 蛋白在鱗狀上皮化細胞的結(jié)構(gòu)中比例較高有關(guān)；而在小細胞肺癌患者中，但與NSE 相比，ProGRP 在輔助診斷小細胞肺癌的特異度與靈敏度更高。 總體上NSE、ProGRP 在小細胞肺癌均明顯上升，提示兩者的表達與小細胞肺癌的關(guān)系更為密切，臨床上可以通過聯(lián)合檢測進行評估小細胞肺癌的發(fā)生風險并降低漏診率。 在不同緩解程度的患者中，治療后緩解程度較高的患者， 其NSE、ProGRP 的表達濃度較低，差異顯著，提示了相關(guān)指標與肺癌患者的治療結(jié)局還具有一定的關(guān)系。

綜上所述， 在肺癌患者中，NSE、ProGRP 的表達明顯上升，NSE、ProGRP 的表達與肺癌的臨床分期或者癌細胞分型密切相關(guān)。 臨床上同時檢測NSE、ProGRP 表達可評估肺癌患者的臨床治療轉(zhuǎn)歸。