血清NSE、ProGRP 與肺癌患者病理學(xué)特征及化療效果的關(guān)系

冷 濤，楊貴萍，吳進軍

肺癌（lung cancer，LC）的整體發(fā)病率和死亡率均明顯上升，全國腫瘤登記中心統(tǒng)計顯示，肺癌每年的新發(fā)病例數(shù)量超過70 萬人，且存在逐年增高的趨勢［1］。 肺癌可導(dǎo)致惡性腫瘤患者短期內(nèi)病情惡化速度的增加，影響患者預(yù)后［2］。 如何評估肺癌的嚴(yán)重程度、制定合適的治療方案及評估療效在綜合治療肺癌方面具有重要意義。 目前的研究結(jié)果顯示，血清學(xué)腫瘤指標(biāo)能夠在肺癌患者的診療和病情評估工作提供一定的參考，指導(dǎo)臨床上預(yù)后和高危隨訪工作。 神經(jīng)源性烯醇化酶（neuron-specific enolase，NSE）的表達上升能夠催化磷酸甘油的降解，參與到丙酮酸的代謝，影響肺泡上皮細胞的異常代謝， 提高上皮細胞的增殖速度， 大量研究也顯示了NSE 在肺癌患者外周血呈高表達，可用于輔助診斷肺癌［3-4］。胃泌素釋放肽前體（pro-gastrin-releasing peptide，ProGRP）既往認為其主要存在在消化道腺體上皮組織中，近年來發(fā)現(xiàn)在呼吸系統(tǒng)上皮細胞中也存在 ProGRP 表達［5］。 ProGRP 的表達上升，能夠反應(yīng)上皮細胞DNA 增殖和分裂的速度，提高上皮細胞的細胞周期調(diào)控異常的風(fēng)險［6］。 肺癌按病理學(xué)類型可分為鱗癌、 腺癌和小細胞癌3 類， 盡管大量研究分析了NSE、ProGRP 在肺癌高表達的意義， 但NSE、ProGRP 與各類肺癌的病變的關(guān)系還尚不完全明晰。 為揭示NSE、ProGRP 的表達與肺癌及與各類病變的關(guān)系， 本次研究選取2017 年1 月 ~2018 年 1 月確診的肺癌患者 180 例，探討 NSE、ProGRP 的表達及其與肺癌患者臨床病理特征和治療預(yù)后的關(guān)系。

1 對象與方法

1.1 對象 選取2017 年1 月 ~ 2019 年1 月云夢縣人民醫(yī)院確診的肺癌患者180 例 （肺癌組）、 健康體檢對象180 例（對照組）。 肺癌組，年齡 44 ~ 76 歲，平均年齡（60.3 ± 11.6）歲 ；男 102 例 、女 78 例 ；體 質(zhì) 量 指 數(shù) （21.56 ± 1.36）kg/m2；TNM 分期Ⅰ期 44 例、Ⅱ期 60 例、Ⅲ期 58 例、Ⅳ期 18 例；病理學(xué)腺癌80 例、鱗癌36 例、小細胞肺癌64 例；其中未接受手術(shù)治療、僅接受化療的患者有76 例。 對照組，年齡45 ~ 78歲，平均年齡（61.6 ± 10.9）歲，男 96 例、女 84 例；體質(zhì)量指數(shù)（21.58 ± 1.45）kg/m2。 兩組研究對象的年齡、性別和體質(zhì)量指數(shù)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05）。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1） 肺癌患者的診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)人民衛(wèi)生出版社《診斷學(xué)》、《外科學(xué)》第八版中的標(biāo)準(zhǔn)；（2）經(jīng)胸部 CT、MRI檢查初步確診，具有影像學(xué)可見的實體病灶，經(jīng)纖支鏡病理學(xué)檢查或術(shù)后病理學(xué)檢查證實；（3）年齡≤79 歲；（4）均為首診患者；（5）對照組為健康體檢志愿者；（6）本研究獲得醫(yī)學(xué)倫理委員會的批準(zhǔn)，患者的各項基礎(chǔ)資料完整。

排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）長期使用免疫抑制劑；（2）既往具有放化療病史；（3）轉(zhuǎn)移性肺癌、其他部位伴有惡性腫瘤；（4）伴有結(jié)締組織疾病、強直性脊柱炎、風(fēng)濕性疾病的患者。

1.2 方法 采集患者入院后24 h 內(nèi)或者治療后6 ~ 8 h 內(nèi)的肘部靜脈血4 ml，離心半徑10 cm、1 500 r/min 離心15 min，收集上清液， 在每個聚苯乙烯板中加入上述液體0.1 ml，4℃過夜孵育，加入磷酸鹽緩沖液洗滌3 次，每次3 min，在每個聚苯乙烯板孔中加入 NSE、ProGRP 抗體（1∶800，購自南京伯斯金生物公司），37℃孵育30 min，加入磷酸鹽緩沖液洗滌 3 次，每次 3 min，每孔中加入 TMB 溶液底物 0.1 ml，37℃、20 min，加入 2 mol/L 硫酸 0.05 ml 終止反應(yīng)，采用 DG5033A酶標(biāo)儀（南京華東電子科技公司）進行OD 值檢測。

1.3 臨床效果評價 近期療效評價標(biāo)準(zhǔn)參照WHO 實體瘤療效評價標(biāo)準(zhǔn)分為完全緩解（complete response，CR）、部分緩解（partial response，PR）、疾病穩(wěn)定（stable disease，SD）、疾病進展（progressive disease，PD）。 CR：可見病灶完全消失，維持一個月以上。 PR：腫瘤最大直徑及最大垂直直徑的乘積縮小達到50%以上。 SD：腫瘤最大直徑及最大垂直直徑的乘積縮?。?0%，增大＜25%。PD：患者出現(xiàn)1 個或多個病灶的腫瘤最大直徑及最大垂直直徑的乘積> 25%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 16.0 統(tǒng)計軟件，計量數(shù)據(jù)表述采用（）表示，組間比較采用t 檢驗、單因素方差分析法，計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗， 以P ＜0.05 說明差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對象血清NSE、ProGRP 水平比較 肺癌組患者 血 清 NSE、ProGRP 為 （29.41 ± 13.30）ng/L 、 （133.12 ±86.72）ng/L， 均顯著高于對照組（4.52 ± 1.40）ng/L、（29.81 ±13.22）ng/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=24.980、15.801，P ＜ 0.05）。

2.2 不同病理學(xué)特征肺癌患者血清NSE、ProGRP 水平比較Ⅲ期、 Ⅳ期肺癌組患者血清NSE、ProGRP 水平顯著的高于Ⅰ期和Ⅱ期肺癌患者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.05）；小細胞肺癌患者血清NSE、ProGRP 水平顯著的高于鱗癌、腺癌患者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P ＜0.05），鱗癌患者血清ProGRP水平顯著的高于腺癌患者（P ＜0.05，表1）。

表1 不同病理學(xué)特征肺癌患者血清NSE、ProGRP 水平比較（）

表1 不同病理學(xué)特征肺癌患者血清NSE、ProGRP 水平比較（）

項目 例數(shù) NSE（ng/L）TNM 分期Ⅰ+Ⅱ期 104 20.71 ± 9.04Ⅲ+Ⅳ期 76 43.91 ± 8.61病理學(xué)類型鱗癌 36 17.33 ± 7.51腺癌 80 19.01 ± 8.21小細胞癌 64 60.13 ± 12.53 t/F 值17.349 368.560 P 值 ProGRP（ng/L） t/F 值 P 值0.000 22.470 0.000 47.82 ± 23.01 238.51 ± 82.33 0.000 389.065 0.000 58.91 ± 28.11 34.22 ± 16.41 251.31 ± 76.22

2.3 不同化療效果的肺癌患者血清NSE、ProGRP 水平比較76 例直接接受化療的肺癌患者， 達到CR 4 例、 達到PR 36例、達到SD 32 例、達到PD 4 例；CR+PR 患者在化療后的血清 NSE、ProGRP 水平為（6.91 ± 3.24）ng/L、（35.81 ± 15.22）ng/L， 均顯著低于 SD+SD 患者（13.42 ± 6.11）ng/L、（84.72 ±39.62）ng/L，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=5.884、7.241，P ＜ 0.05）。

3 討論

肺泡上皮細胞的周期調(diào)控紊亂、上皮細胞腫瘤易感性的改變或者家族性的遺傳因素，均能夠?qū)е路伟┑陌l(fā)生［7］。 肺癌患者的臨床預(yù)后分析研究顯示， 其5 年生存率不足45%，治療后的總體生存時間和中位生存時間均無明顯的改善［8］?，F(xiàn)階段臨床上主要通過血清糖類抗原125（carbohydrate antigen 125，CA125）或者糖類抗原 199（carbohydrate antigen 199，CA199）等腫瘤指標(biāo)評估肺癌患者的臨床轉(zhuǎn)歸。 雖然相關(guān)血清腫瘤相關(guān)指標(biāo)能夠提高肺癌患者的臨床預(yù)后評估水平，但部分研究者認為，采用傳統(tǒng)的CA125 等指標(biāo)評估肺癌臨床轉(zhuǎn)歸的靈敏度較低，不足35%，通過CA125 評估肺癌患者臨床預(yù)后的一致性率不足40%［9］。 而繼續(xù)尋找潛在的血清學(xué)腫瘤相關(guān)指標(biāo)，具有重要的現(xiàn)實指導(dǎo)意義。

NSE 是神經(jīng)源性相關(guān)蛋白，其能夠參與到磷酸肌醇的代謝過程，影響到丙酮酸進入線粒體的速度。 肌醇方面的研究認為，NSE 不僅能夠影響到癌細胞間生物信號通路的傳遞，同時還能夠?qū)е履[瘤細胞內(nèi)PI3K 信號通路的激活， 增加癌細胞的增殖和調(diào)控的異常［10］。 ProGRP 主要存在于消化道或者呼吸道上皮組織， 在作為上皮細胞的骨架成分蛋白之一，在癌細胞異常增殖和凋亡的過程中，ProGRP 可以顯著釋放入血，導(dǎo)致外周血中ProGRP 表達升高。大多數(shù)小細胞肺癌或其他類型的肺癌細胞，能夠通過分泌ProGRP，促進臨近腫瘤細胞膜表面糖蛋白的激活，加劇癌細胞的粘附和轉(zhuǎn)移［11］。 部分研究者以及探討了NSE 或者ProGRP 的表達與肺癌的關(guān)系，認為兩者的高表達與肺癌的發(fā)生密切相關(guān)，但缺乏對于治療后的 NSE、ProGRP 比較［12］。

本研究對于肺癌患者血清中NSE、ProGRP 的表達分析研究可見，在病例組患者中，NSE、ProGRP 的表達濃度均明顯上升，提示了NSE、ProGRP 的表達可能影響到了肺癌的病情進展。 分析其基礎(chǔ)方面的原因，考慮與NSE、ProGRP 的下列幾個方面的作用有關(guān)［13］：（1）NSE 的上升能夠反應(yīng)肺泡上皮細胞的異常核分裂過程，在癌細胞持續(xù)自我增殖的過程中，線粒體功能的增強能夠顯著促進囊泡釋放NSE。 小細胞肺癌作為神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤，可表現(xiàn)神經(jīng)內(nèi)分泌細胞的特性，可產(chǎn)生NSE， 存在轉(zhuǎn)移病灶的患者血清NSE 明顯高于無轉(zhuǎn)移病灶者。 本研究結(jié)果亦顯示，與鱗癌與腺癌相比，小細胞肺癌的NSE 水平明顯增高，具有較高的特異性和靈敏度。張志強等［14］也發(fā)現(xiàn)了與本次研究較為相似的結(jié)論，其認為在非小細胞肺癌患者中，NSE 的表達濃度可平均上升30%以上，在合并有明顯的局部轉(zhuǎn)移或者胸水的患者中，NSE 的表達濃度上升更為顯著。 （2）ProGRP 是肺泡上皮細胞的結(jié)構(gòu)性蛋白，在癌細胞凋亡和碎裂的過程中，ProGRP 可以釋放入血，同時釋放入血的ProGRP 還能夠提高癌細胞內(nèi)蛋白激酶B 或者轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）信號通路的激活程度，進而促進肺癌的病情進展。探討相關(guān)指標(biāo)的表達與肺癌患者臨床病理特征的關(guān)系過程中發(fā)現(xiàn)， 在臨床分期較晚的患者中，NSE、ProGRP 的表達濃度均明顯上升， 提示了相關(guān)指標(biāo)的表達與肺癌患者的臨床病理特征的進展密切相關(guān)， 這主要由于NSE、ProGRP 的上升可影響肺泡上皮細胞的生物學(xué)特征，導(dǎo)致上皮細胞粘附和浸潤能力的增強［15］。在不同的細胞來源類型肺癌中， 鱗癌患者中ProGRP 的表達較高， 這主要由于ProGRP 蛋白在鱗狀上皮化細胞的結(jié)構(gòu)中比例較高有關(guān)；而在小細胞肺癌患者中，但與NSE 相比，ProGRP 在輔助診斷小細胞肺癌的特異度與靈敏度更高。 總體上NSE、ProGRP 在小細胞肺癌均明顯上升，提示兩者的表達與小細胞肺癌的關(guān)系更為密切，臨床上可以通過聯(lián)合檢測進行評估小細胞肺癌的發(fā)生風(fēng)險并降低漏診率。 在不同緩解程度的患者中，治療后緩解程度較高的患者， 其NSE、ProGRP 的表達濃度較低，差異顯著，提示了相關(guān)指標(biāo)與肺癌患者的治療結(jié)局還具有一定的關(guān)系。

綜上所述， 在肺癌患者中，NSE、ProGRP 的表達明顯上升，NSE、ProGRP 的表達與肺癌的臨床分期或者癌細胞分型密切相關(guān)。 臨床上同時檢測NSE、ProGRP 表達可評估肺癌患者的臨床治療轉(zhuǎn)歸。