老年支氣管哮喘患者Th17、IL-17 水平與氣道重塑的關系研究

藍文坪，張建秋，王 挺，卓懷書，覃英嬌，熊 均

支氣管哮喘是以氣道高反應性和慢性氣道炎癥為主要病理特征的呼吸道慢性疾病。一項大規(guī)模流行病學調(diào)查顯示老年人群是支氣管哮喘的高發(fā)群體，且超過 60 歲以上患者以重癥為主［1］。 氣道重塑是支氣管哮喘病情進展的必然結果，隨著氣道重塑的發(fā)生，使支氣管發(fā)生不可逆性呼吸困難［2］。 因而，監(jiān)測氣道重塑對控制支氣管哮喘病情，扭轉(zhuǎn)病理進展具有重要意義。 目前，臨床認為在氣道炎癥早期，因持續(xù)性的接觸變應原，成為氣道重塑的誘發(fā)因素，隨著病情發(fā)展，氣道重塑不依賴于變應原接觸［3］。 在此期間，細胞因子在支氣管病變過程中發(fā)揮重要作用。 既往認為Th1/Th2 失衡是支氣管哮喘發(fā)病的重要病理因素，但近年來有報道顯示部分支氣管哮喘患者不能完全用Th1/Th2 失衡機制來解釋［4-5］。 白介素-17（IL-17）是由輔助性 T 細胞 17（Th17） 細胞分泌的前炎癥細胞因子， 有研究表明IL-17 是支氣管哮喘重要細胞因子， 推測其可能參與氣道重塑［6］。本研究收集98 例老年支氣管哮喘患者資料，回顧性探討IL-17 與氣道重塑的關系。

1 對象與方法

1.1 對象 收集2017 年5 月～2020 年5 月在瓊中黎族苗族自治縣人民醫(yī)院就診的98 例老年支氣管哮喘患者，其中男性60 例，女性38 例；年齡（70.24± 7.83）歲；體質(zhì)量指數(shù)（19.84 ± 1.69）kg/cm2；根據(jù)中華醫(yī)學會呼吸病學分會推薦指南標準，將支氣管哮喘患者分為重度組（44 例）和輕中度組（54 例）［8］。輕中度組和重度組患者性別、年齡及發(fā)病時間差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05），兩組肺功能分級差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05），見表1。納入標準：支氣管哮喘診斷參照共識意見標準進行［7］；年齡≥ 60 歲，均為急性發(fā)作期就診；患者病例資料完整。 排除標準：肝腎功能嚴重不全者；合并有惡性腫瘤者；合并有嚴重肺部感染、肺結核及慢性阻塞性肺疾病者。

表1 兩組老年支氣管哮喘患者基本資料比較

1.2 方法

1.2.1 Th-17 細胞檢測 RNA 提取和反轉(zhuǎn)錄：采集患者清晨空腹外周血5 ml，抗凝處理后送檢。 采用Trizol 法獲取 RNA， 參照劉澤宇等［9］配制 RNA/Primer 和 cDNA 混合物，將 10 μl cDNA 加入 RNA/引物混合物中， 反應后加入RNase H 降解的RNA。PCR 擴增： 設計引物上游5'-GTAAAGACCTCTATG CCAACA-3'， 下游 5'-CCTTCACCGTTCCAGTTT-3'，擴增長度 205 bp。 以 β-action 為內(nèi)參， 上游 5'-CTGAACATCCATAACCGGAATACCA-3'， 下游 5'-AGCGTTGATGCAGCCCAAG-3'，擴增長度 183 bp。將 dNTP 混合物、cDNA 模板、 上下游引物、PCR 緩沖液及Taq 酶置于離心管中，進行PCR 擴增。 擴增條件：92 ℃預變性 5 min，92 ℃變性 0.5 s，55 ℃退火0.5 s，72 ℃延伸 0.5 s，共 45 個循環(huán)。 PCR 半定量分析：取擴增產(chǎn)物5 μl，行電泳處理，記錄積累光密度（IOD）。流式細胞術檢測：采用流式細胞儀上機檢測Th17 水平。

1.2.2 IL-17 水平檢測 取外周血2 ml， 離心后取上清液送檢，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清IL-17，操作方法按試劑盒說明進行，試劑盒購自南京森貝伽生物科技有限公司。

1.2.3 CT 掃描檢查 采用Ingenuity 荷蘭飛利浦CT機進行CT 檢查，管電壓120 kV，管電流240 mA，矩陣512 × 512，層厚、間隔5 mm。掃描時患者取仰臥位，自肺尖至肺底進行掃描，收集數(shù)據(jù)，以CT 診斷儀自帶工作站和Meta Morph 圖像分析系統(tǒng)處理，測量點定位于病變肺葉上支氣管主干內(nèi)（支氣管主干距氣管壁0.5 cm 處），測量記錄支氣管壁厚度（Wat）和氣道平滑肌厚度（Wam）。

1.3 觀察指標 比較兩組患者Th17 細胞和血清IL-17 水平，比較兩組患者 Wat 和 Wam 水平。 分析Th17 細胞、血清 IL-17 水平與 Wat、Wam 相關性，分析Wat 的相關因素。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 20.0 軟件包對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，符合正態(tài)分布時，計量資料以（）表示，組間比較行t 檢驗；計數(shù)資料以（%）表示，組間比較行χ2檢驗，相關性分析采用Pearson 分析，影響因素采用多元線性回歸分析，以P < 0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組Th17 細胞及血清IL-17 水平比較 重度組患者 Th17 細胞比例為（25.09 ± 6.87）%，輕中度組患者 Th17 細胞比例為（21.29 ± 5.65）%，兩組外周血中Th17 細胞比例比較，差異有統(tǒng)計學意義（t=3.005，P=0.003）。 重度組患者血清 IL-17 水平為（74.92 ± 5.76）ng/L， 顯著高于輕中度組 （54.23 ±4.61）ng/L，兩組血清 IL-17 水平比較，差異有統(tǒng)計學意義（t=19.755，P < 0.001）。

2.2 兩組氣道形態(tài)學指標比較 輕中度組患者Wat、Wam 水平（11.47 ± 1.59）、（3.13 ± 0.75）顯著低于重度組（13.62 ± 1.80）、（3.97 ± 0.82），差異均有統(tǒng)計學意義（t=6.274、5.289，P < 0.05）。

2.3 Wat、Wam 與 Th17、IL-17 線 性 相 關 分 析Pearson 分析結果顯示，Wat、Wam 與 Th17、IL-17 水平呈顯著正相關性（r＝0.583、0.379、0.446、0.494，P <0.05）。

2.4 Wat 多元線性回歸分析 多元線性回歸分析結果顯示，Th17、IL-17 及肺功能分級是影響Wat 的獨立影響因素（P < 0.05）。 見表 2。

表2 老年支氣管哮喘患者影響Wat 水平的多元回歸分析結果

3 討論

氣道重塑是支氣管哮喘患者氣道炎癥發(fā)展的必然結果， 而氣道重塑發(fā)生后又將促進炎癥的持續(xù)。 因而，長期以來，炎性因子與支氣管哮喘的關系一直是臨床關注重點。 Th17 是具有促炎效應，且能特異性分泌IL-17 的輔助性T 細胞，研究證實Th17可通過促進中性粒細胞和嗜酸性粒細胞表達，加重氣道炎癥，加快支氣管哮喘病情進展［10］。

IL-17 能激活和誘導氣道嗜酸性粒細胞浸潤，加快慢性炎癥的發(fā)生發(fā)展，同時IL-17 分泌增加可促進蛋白酶3 和髓過氧化物酶合成，進而誘導基質(zhì)金屬蛋白酶-9 等因子的釋放，成為氣道重塑的誘因［11］。 但臨床也有報道發(fā)現(xiàn)健康志愿者與支氣管哮喘患者 IL-17 水平無顯著性差異［12］。陸光輝等［13］的研究還顯示哮喘患者單個核細胞體外培養(yǎng)血清IL-17 低于健康志愿者， 提示IL-17 可能存在雙向調(diào)節(jié)作用。 邵莉等［14］采用健康小鼠動物模型，給予IL-17 抗體后，氣道反應性顯著增強，這提示IL-17可能對支氣管哮喘的建立存在負性調(diào)節(jié)機制，但在哮喘發(fā)生后，IL-17 則可能加重病理進展，成為氣道重塑的促發(fā)因素［15］。

本研究收集98 例老年支氣管哮喘作為研究對象， 結果顯示輕中度組與重度組患者Th17 和血清IL-17 水平差異顯著， 且 Th17、IL-17 與 Wam、Wat呈顯著相關性， 提示Th17、IL-17 與氣道重塑密切相關，這也證實上述觀點。 多元線性回歸分析進一步顯示 Th17、IL-17 是 Wat 的獨立影響因素， 提示對于老年支氣管哮喘患者， 監(jiān)測Th17、IL-17 水平可為判斷氣道重塑程度提供依據(jù)。 但本研究為回顧性分析，未收集健康正常老年人相關資料，因而有關Th17、IL-17 在老年支氣管哮喘建立前的作用機制還有待今后進一步研究證實。

綜上， 老年支氣管哮喘患者Th17 細胞、 血清IL-17 水平與氣道重塑相關，監(jiān)測Th17、血清IL-17有助于判斷氣道重塑情況。