86例淋巴瘤患者外周血造血干細(xì)胞采集影響因素分析

程沈菊 聶 波 楊金榮 賀振新 李艷紅 羅 珊 武 坤▲

1.昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科，云南昆明650032；2.云南省檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南昆明650032；3.臨床檢驗(yàn)診斷省創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)，云南昆明650032；4.昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液科，云南昆明650032；5.云南省血液病研究中心，云南昆明650032

惡性淋巴瘤是機(jī)體造血系統(tǒng)常見的一類惡性腫瘤，目前其治療方案是主要以化療為主的綜合療法，對(duì)于部分預(yù)后不良因素較多的患者，單純化療效果較差[1-2]。自20世紀(jì)90年代開始，隨著對(duì)淋巴瘤發(fā)病機(jī)制研究的不斷深入，自體外周血造血干細(xì)胞移植（autologous hematopoietic stem cell transplantation，Auto-HSCT）在治療惡性淋巴瘤患者中取得了顯著療效[3-4]。孫穎等[5]研究表明，Auto-HSCT治療淋巴瘤能夠增強(qiáng)腫瘤緩解率，降低復(fù)發(fā)率并延長(zhǎng)患者生存時(shí)間。然而由于造血干細(xì)胞自動(dòng)員到采集時(shí)的環(huán)節(jié)較多，接近5%～46%患者進(jìn)行外周血造血干細(xì)胞采集時(shí)難以達(dá)到移植需要的細(xì)胞數(shù)目，影響治療效果[6]。故本研究收集昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院86例惡性淋巴瘤患者的臨床資料，分析影響患者外周血造血干細(xì)胞采集的相關(guān)因素，為進(jìn)一步提高患者干細(xì)胞采集效率提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院2014年2月至2020年6月收治的86例惡性淋巴瘤患者的臨床資料，所有患者均行Auto-HSCT方案治療，其中男52例，女34例，年齡15～65歲，平均（42.06±11.37）歲。86例患者中非霍奇金淋巴瘤64例，包括彌漫性大B淋巴瘤31例、T細(xì)胞淋巴瘤8例、NK/T細(xì)胞淋巴瘤5例、間變大細(xì)胞淋巴瘤5例、其他類型15例。霍奇金淋巴瘤22例，包括結(jié)節(jié)硬化型16例、混合細(xì)胞型6例。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①臨床資料完整；②符合惡性淋巴瘤的診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]，并經(jīng)病理學(xué)確診；③精神狀態(tài)正常，能順利配合治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤；②妊娠、哺乳期婦女；③合并自身免疫性疾?。虎芩幬镞^(guò)敏者。

1.2 外周血造血干細(xì)胞的動(dòng)員與采集

1.2.1 采集檢測(cè)儀器 德國(guó)費(fèi)森尤斯COM.TEC型血細(xì)胞分離機(jī)（北京?？松萍加邢薰?，批號(hào)：9008021）；美國(guó)BD FACSCantoⅡ型流式細(xì)胞儀（北京眾力挽生物科技有限公司，批號(hào)：V145687）；日本SysmexXN型血細(xì)胞分析儀（涵飛醫(yī)療科技有限公司，批號(hào)：2400324）。

1.2.2 建立靜脈通路 首先采用兩側(cè)正中或貴要靜脈進(jìn)行穿刺，穿刺失敗或血管條件差者可選擇股靜脈穿刺留置雙腔管，以保證采集順利。

1.2.3 采集方法 根據(jù)患者病情的差異選擇相應(yīng)的化療方案并聯(lián)合重組人粒細(xì)胞集落刺激因子（recombinant human granulocyte colony stimulating factor，rhG-CSF）（輝瑞制藥生物科技有限公司，批號(hào)：S20063065）進(jìn)行動(dòng)員，化療過(guò)程中密切監(jiān)測(cè)患者外周血白細(xì)胞（white blood cell，WBC）水平，當(dāng)WBC水 平 低 于1.0×109/L時(shí) 注 射rhGCSF[5～10μg/（kg·d）]，同時(shí)每天復(fù)查外周血WBC，當(dāng)外周血WBC水平升至（6～15）×109/L，并且單個(gè)核細(xì)胞（mononuclear cell，MNC）超過(guò)30%，開始造血干細(xì)胞采集。選擇血細(xì)胞分離機(jī)autoMNC程序，輸入患者性別、體重、身高、外周血WBC、血小板等相關(guān)參數(shù)，采集時(shí)根據(jù)患者具體情況隨時(shí)調(diào)整。使用ACD-A型抗凝劑（青島捷世康生物科技有限公司，批號(hào)：T2574），循環(huán)血量設(shè)為2.5～3.5倍患者血容量（量約8～12 L），全血流速為45～55 ml/min，采集時(shí)間為2～4 d。采集過(guò)程中嚴(yán)密觀察患者癥狀，一旦出現(xiàn)不良反應(yīng)需及時(shí)予以對(duì)癥處理。

1.3 觀察指標(biāo)

采集結(jié)束后根據(jù)血常規(guī)計(jì)算采集液MNC數(shù)量，使用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)CD34+細(xì)胞百分比，同時(shí)計(jì)數(shù)采集標(biāo)本有核細(xì)胞數(shù)目，CD34+細(xì)胞數(shù)量（×106/kg）=采集液白細(xì)胞總數(shù)×CD34+細(xì)胞所占有核細(xì)胞百分比/采集者體重。分析采集者每千克體重CD34+細(xì)胞數(shù)量與患者性別、年齡、淋巴瘤病理類型及分期、血常規(guī)指標(biāo)、動(dòng)員采集時(shí)間、化療時(shí)間、病程時(shí)間、是否輸血等因素間的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 患者一般資料描述

本研究中，86例患者共行288次外周血造血干細(xì)胞采集，所有患者一般資料統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1。

表1 患者一般資料（±s）

表1 患者一般資料（±s）

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2.2 不同病理類型及分期間CD34+細(xì)胞數(shù)比較

霍奇金淋巴瘤與非霍奇金淋巴瘤間，不同病理類型及分期的淋巴瘤采集者每千克體重CD34+細(xì)胞數(shù)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 不同病理類型及分期間CD34+細(xì)胞水平差異比較（±s）

表2 不同病理類型及分期間CD34+細(xì)胞水平差異比較（±s）

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2.3 影響采集CD34+細(xì)胞水平單因素分析

不同性別、不同動(dòng)員時(shí)間、是否輸血、外周血WBC水平采集者每千克體重CD34+細(xì)胞數(shù)量無(wú)明顯差異（P＞0.05），而患者年齡、病程時(shí)間、化療療程、有核細(xì)胞水平是影響CD34+細(xì)胞采集數(shù)的重要因素，年齡越大、病程時(shí)間越長(zhǎng)、化療療程越多、外周血MNC越低，CD34+細(xì)胞采集數(shù)量越少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 影響CD34+細(xì)胞采集水平單因素分析（±s）

表3 影響CD34+細(xì)胞采集水平單因素分析（±s）

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2.4 影響采集CD34+細(xì)胞水平多因素logistic回歸分析

將單因素分析有意義的指標(biāo)設(shè)為自變量（賦值情況見表4），采集CD34+細(xì)胞水平高于平均值為高水平，否則為低水平，CD34+細(xì)胞采集水平設(shè)為因變量（0=高水平，1=低水平），全部納入多因素logistic回歸分析，結(jié)果顯示病程時(shí)間、化療療程、有核細(xì)胞水平是影響CD34+細(xì)胞采集水平的獨(dú)立性危險(xiǎn)因素。見表5。

表4 不同指標(biāo)賦值情況

表5 影響CD34+細(xì)胞采集水平多因素logistic回歸分析

3 討論

Auto-HSCT是治療白血病、淋巴瘤、骨髓增生異常綜合征等各類血液系統(tǒng)疾病的重要方法，其在患者治療的合適時(shí)期采集自身造血干細(xì)胞進(jìn)行特殊處理后保存，當(dāng)患者進(jìn)行放化療后進(jìn)行回輸繼而促進(jìn)造血功能的恢復(fù)[7-8]。喬營(yíng)等[9]報(bào)道顯示確保移植成功的關(guān)鍵因素是獲取足夠數(shù)量的干細(xì)胞，以確保進(jìn)行移植時(shí)達(dá)到最低閾值數(shù)，才能夠在患者體內(nèi)增殖分化。由于造血干細(xì)胞的動(dòng)員到采集過(guò)程復(fù)雜，部分患者難以采集足夠數(shù)量的細(xì)胞，故探討影響Auto-HSCT細(xì)胞采集數(shù)量的因素對(duì)提高采集效率具有重要的臨床意義。目前臨床醫(yī)生多采用CD34+細(xì)胞數(shù)作為評(píng)估采集造血干細(xì)胞水平的指標(biāo)[10]，本研究中筆者以CD34+細(xì)胞數(shù)量代表造血干細(xì)胞的采集水平進(jìn)行分析。

本研究結(jié)果顯示，患者年齡、病程時(shí)間、化療療程、外周血MNC是影響CD34+細(xì)胞采集數(shù)量的重要因素，其中年齡越大、病程時(shí)間越長(zhǎng)、化療療程越多、外周血MNC越低患者CD34+細(xì)胞采集數(shù)量越少，而患者性別、動(dòng)員時(shí)間、是否輸血及WBC水平與CD34+細(xì)胞采集水平無(wú)關(guān)，值得臨床醫(yī)生關(guān)注。具體原因分析如下，年齡越高，CD34+細(xì)胞采集水平越低，主要由于隨著年齡的增長(zhǎng)，患者自身骨髓儲(chǔ)備能力逐漸減退，同時(shí)化療的不良反應(yīng)引起骨髓抑制，提高了造成干細(xì)胞的動(dòng)員采集難度[11]。因此對(duì)于老年患者，應(yīng)慎重選擇Auto-HSCT進(jìn)行治療，必要時(shí)需要進(jìn)行兩次動(dòng)員采集，同時(shí)應(yīng)盡早進(jìn)行首次動(dòng)員采集[12]。

患者動(dòng)員采集前的病程時(shí)間和化療療程對(duì)采集效率有一定的影響。本研究結(jié)果顯示患者病程時(shí)間越長(zhǎng)、所經(jīng)歷的化療療程越多，CD34+細(xì)胞采集數(shù)量越少，這一結(jié)果與Cottler-Fox等[13]的研究結(jié)論一致，主要由于患者經(jīng)過(guò)多次大劑量的重復(fù)化療，引起患者多潛能造血干細(xì)胞損耗過(guò)多，同時(shí)機(jī)體骨髓造血功能的抑制作用增強(qiáng)，降低了骨髓再生能力，影響干細(xì)胞采集效率。本研究對(duì)CD34+細(xì)胞采集水平與患者血常規(guī)指標(biāo)分析發(fā)現(xiàn)，CD34+細(xì)胞采集水平與患者外周血WBC水平無(wú)相關(guān)性，而與外周血單個(gè)核細(xì)胞的絕對(duì)值密切相關(guān)。因此患者外周血單個(gè)核細(xì)胞的絕對(duì)值能夠作為預(yù)測(cè)患者CD34+細(xì)胞水平的簡(jiǎn)易指標(biāo)，這一結(jié)果與陸華等[14]報(bào)道類似。本研究也存在一定局限性，首先本研究結(jié)果僅代表云南地區(qū)患者的研究結(jié)果，病例數(shù)有限，對(duì)于其他地區(qū)能否得到同樣的結(jié)果值得進(jìn)一步研究[15]；另外本研究為回顧性分析，研究過(guò)程中可能存在極端值的情況和醫(yī)師的回顧偏倚；同時(shí)由于不同醫(yī)師的采集水平可能對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響，本研究未對(duì)醫(yī)師的采集水平進(jìn)行量化評(píng)估。

綜上所述，對(duì)于年齡大、病程時(shí)間長(zhǎng)、化療療程多、有核細(xì)胞數(shù)低患者，外周血造血干細(xì)胞的采集效率較低，對(duì)于淋巴瘤患者外周血干細(xì)胞采集要取得更好的效果，應(yīng)盡早進(jìn)行動(dòng)員，必要時(shí)需進(jìn)行兩次動(dòng)員采集，以提高成功采集的幾率和安全性。