皮膚惡性腫瘤中P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3的表達情況及相關性研究

楊 靜，蔡 梅

（昆明醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院皮膚科，云南 昆明 650101）

皮膚惡性腫瘤是一類累及表皮、皮膚附屬器或黑色素細胞等成分的疾病，主要包括基底細胞癌（basal cell carcinoma,BCC）、鱗狀細胞癌(squamous cell carcinoma,SCC）、皮膚惡性黑素瘤（cutaneous malignant melanoma,CMM）等。隨著環(huán)境及生活方式的改變國內外皮膚惡性腫瘤的發(fā)病人數均出現了逐年增加的趨勢[1-3]，成為備受世界關注的公共衛(wèi)生問題。惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是一個多因素參與的復雜過程，相關研究表明其主要原因可能是惡性腫瘤細胞的無限增殖與細胞凋亡障礙，即細胞增殖與細胞凋亡失衡所致，而細胞凋亡調節(jié)系統(tǒng)的紊亂又是細胞增殖凋亡失衡的主要原因[4]，皮膚惡性腫瘤作為最常見的腫瘤之一，其發(fā)生發(fā)展也與細胞凋亡有關，從該方面研究皮膚惡性腫瘤具有重要意義。本研究通過檢測皮膚惡性腫瘤組織組織液中的腫瘤凋亡蛋白（P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3）的表達量及彼此的相關性，以期為后續(xù)深入研究細胞凋亡機制在皮膚惡性腫瘤的作用提供依據，為皮膚惡性腫瘤的診治提供新思路。

1 資料與方法

1.1 一般材料 病例為2018年12月至2020年12月期間在昆明醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院皮膚科行皮膚外科手術并進行了病損組織病理學活檢且取得患者知情同意的41例患者。41例病例中病理學活檢診斷為皮膚惡性腫瘤的共25例（BCC10例、SCC10例、CMM10例），男性13例（52.00%），女性12例（48.00%）；年齡（25～93）歲，平均年齡（62.15±14.50）歲；診斷為皮膚良性腫瘤的8例（瘢痕疙瘩），男性4例（50.00%），女性4例（50.00%），平均 年齡（59.07±10.30）歲；診斷為非皮膚腫瘤的8例（表皮囊腫），男性4例（50.00%），女性4例（50.00%），平均年齡（60.23±6.41）歲。把組織病理學檢查診斷為皮膚惡性腫瘤的設為實驗組，診斷為皮膚良性腫瘤的設為良性對照組，診斷為非皮膚腫瘤的設為正常對照組。三組患者年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 不同組間人口學資料比較（±s）

表1 不同組間人口學資料比較（±s）

注：*為Kruskal-Wallis H檢驗，△為卡方檢驗。

變量 實驗組（n=25）良性對照組（n=8）正常對照組（n=8）檢驗統(tǒng)計量 P年齡（歲）62.15±14.5059.07±10.3060.23±6.41 1.031* 0.597性別（例）男性 13（52.00） 4（50.00） 4（50.00） 0.016△0.992女性 12（48.00） 4（50.00） 4（50.00）

1.2 實驗方法 病例行手術切除病損組織后將組織平均分為2份，一份立即倒入4%福爾馬林溶液固定進行常規(guī)組織病理學檢查；另一份即時裝入-70℃超低溫冰箱保存，待病例全部收集完后每一份標本取50mg充分研磨制備成組織勻漿行ELISA檢測腫瘤凋亡蛋白P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3的表達量。P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3 ELISA檢 測試劑盒購自美國基因公司，酶標儀為BIO-RAD model 550（美國）。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 23.0軟件進行統(tǒng)計學分析，P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3的測定數據以（±s）表示，根據分組采用方差分析比較組間差異，兩兩比較使用SNK法。實驗組內P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3表達相關性使用Pearson相關性分析。檢驗水準均為α=0.05。

2 結果

2.1 不同組間P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3表達差異 實驗組患者組織勻漿中P53、Survivin、Bcl-2含量明顯高于良性對照組及正常對照組，Bax及Caspase-3含量低于良性對照組及正常對照組，差異存在統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。良性對照組與正常對照組間P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3的含量差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 不同組間P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表達差異（±s，pg/ml）

表2 不同組間P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表達差異（±s，pg/ml）

注：*為與實驗組比較P＜0.05，#為P＜0.05。

組別 例數 P53 Survivin Bcl-2 Bax Caspase-3實驗組 25 4 924.25±327.20 2 405.76±410.09 409.05±59.30 17.04±1.59 158.85±17.02良性對照組 8 4 536.95±306.92* 1 941.84±204.57* 289.96±35.86* 21.88±2.03* 175.74±10.64*正常對照組 8 4 247.28±458.22* 1 892.57±228.70* 327.40±55.75* 20.78±2.92* 176.66±16.36*F— 6.598 15.017 12.563 12.488 3.437 P—＜0.001# ＜0.001# ＜0.001# ＜0.001# 0.018#

2.2 實驗組不同腫瘤P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3表達差異 實驗組的25例病例中，按照疾病診斷分為BCC組（10例），SCC組（10例）及CMM組（5例），CMM組的Survivin、Bcl-2含量高于BCC組及SCC組，差異存在統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而BCC組及SCC組的Survivin、Bcl-2含量差異無統(tǒng)計學意義。此外，三組間的P53、Bax、Caspase-3含量差異無統(tǒng)計學意義，見表3。

表3 實驗組不同腫瘤P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3表達差異（±s，pg/ml）

表3 實驗組不同腫瘤P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3表達差異（±s，pg/ml）

注：*為與BCC組比較P＜0.05，△為與SCC組比較P＜0.05，#為P＜0.05。

組別 例數 P53 Survivin Bcl-2 Bax Caspase-3 BCC 10 4 823.53±244.52 2 154.75±318.57 383.97±52.27 17.55±1.82 153.20±18.67 SCC 10 4 958.14±413.54 2 389.65±341.53 404.75±62.43 17.10±1.42 162.58±14.33 CMM 5 5 056.91±269.87 2 939.98±58.06*△ 467.79±15.79*△ 15.86±0.93 162.71±18.96 F—0.933 11.462 4.303 2.062 0.912 P—0.408 ＜0.001# 0.026# 0.151 0.416

2.3 實驗組P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3表達相關性 實驗組的P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3進行Pearson相關性分析發(fā)現均無相關性，P＞0.05。

3 討論

細胞凋亡是一種由凋亡相關蛋白調控的程序化死亡，根據細胞凋亡的調控機制將細胞凋亡的相關蛋白分為促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白，當細胞抗凋亡程序被激活和（或）促凋亡程序受抑制，該細胞將不能凋亡而長期存活，相關研究表明細胞凋亡與腫瘤發(fā)生關系密切[5]。本研究納入的P53、Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3均為重要的細胞凋亡調控蛋白。

P53蛋白是重要的凋亡調蛋白，分為野生型和突變型，野生型P53蛋白是目前最為明確的腫瘤抑制蛋白，但同時在超過50%的惡性腫瘤中均發(fā)現P53基因發(fā)生突變，并導致該基因產生的P53蛋白失去了對細胞生長、凋亡和DNA修復的調控作用，因而突變型P53蛋白也被視作抗凋亡蛋白，在腫瘤組織中呈現出高表達，且表達量越高腫瘤惡性增殖能力越強[6-7]，本研究發(fā)現與對照組相比P53蛋白在皮膚惡性腫瘤組呈現出高表達，與前述觀點一致；但在皮膚惡性腫瘤中，惡性程度較高的CMM與惡性程度相對較低的SCC及BCC中P53蛋白表達無明顯差異，與前述結果存在差異，造成這種差異的原因可能是因為本研究納入樣本相對較少，后續(xù)還需要更大樣本及更深入的研究，探討相關原因。Survivin蛋白也稱為生存蛋白，是抗凋亡蛋白家族的新成員，于二十世紀末被發(fā)現，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關，高表達于絕大多數腫瘤組織[8]，本研究也支持上述觀點，該蛋白在皮膚惡性腫瘤組呈現出高表達，且腫瘤惡性程度越高表達越活躍。Bcl-2蛋白，也稱B細胞淋巴細胞瘤/白血病-2蛋白，可以明顯抑制細胞凋亡，在腫瘤細胞凋亡研究中備受重視，本研究發(fā)現該蛋白在皮膚惡性腫瘤組織中呈現出高表達，可能與其主要功能是延長細胞壽命、抑制細胞凋亡[9]，同時其表達能促使腫瘤細胞的增殖相關[10]，同時本研究還發(fā)現皮膚腫瘤惡性程度越高其表達越活躍。

Bax蛋白與Bcl-2蛋白具有高度的同源性，但發(fā)揮了截然相反的功能[11]，本研究發(fā)結果支持了上述觀點，作為一種促凋亡蛋白，Bax蛋白在皮膚惡性腫瘤中表達量更低。Caspase-3蛋白為Caspase家族在細胞凋亡通路中一個最主要的凋亡蛋白，是介導細胞凋亡的重要效應因子，當Caspase-3蛋白激活時，其下游便呈現出一系列級聯(lián)反應，使細胞凋亡不能避免，相關研究指出，Caspase-3可介導多數細胞凋亡因子引起的細胞凋亡[12]，本研究也得出相同結論，作為一種促凋亡蛋白，Caspase-3蛋白在皮膚惡性腫瘤中也出現了表達量更低的情況，細胞凋亡失衡可能是皮膚惡性腫瘤發(fā)病的重要機制，后續(xù)還需開展更深入的研究。

綜上所述，皮膚惡性腫瘤組織中抗凋亡蛋白P53、Survivin、Bcl-2表達量上調，促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表達量下調，抗凋亡蛋白Survivin、Bcl-2表達量在惡性程度更高的CMM中表達上調更明顯，這種細胞凋亡調節(jié)系統(tǒng)的紊亂可能使腫瘤細胞逃避正常的細胞凋亡機制，實現異常分化增殖從而導致皮膚惡性腫瘤的形成和發(fā)展，可能是皮膚惡性腫瘤重要的發(fā)病機制之一，為后續(xù)利用細胞凋亡機制對皮膚惡性腫瘤進行診斷、治療等研究提供了新的線索和思路。但同時我們也要認識到皮膚惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是一個多因素、多步驟及多階段共同參與的復雜過程，后續(xù)還應進行更深入的研究，闡明相關機制。