硫化氫對白樺懸浮細胞中IAA·ABA和次生代謝物累積的影響

葉子諾 翟明霞 周文洋 肖婉瑩 詹亞光 范桂枝

摘要 [目的]探究硫化氫（H2S）對白樺懸浮細胞中吲哚乙酸（IAA）、脫落酸（ABA）以及多酚和三萜等次生代謝物累積的影響。[方法]采用酶聯(lián)免疫吸附法、實時熒光定量PCR和比色法等分析IAA和ABA含量及其關(guān)鍵酶基因表達水平、黃酮和三萜等次生代謝物含量。[結(jié)果]H2S供體硫氫化鈉（NaHS）處理對白樺懸浮細胞中IAA、ABA的累積存在濃度和時間效應(yīng)，其中1.0 mmol/L H2S供體NaHS處理12 h時ABA含量達最高值，比對照增加了196.46%，而IAA含量在0.1 mmol/L H2S供體NaHS處理3 h時達最高值，比對照增加了5.55%。ABA或H2S處理后白樺懸浮細胞中次生代謝產(chǎn)物積累呈增加趨勢，而IAA處理則相反。1.0 mmol/L H2S供體NaHS與不同濃度的IAA和ABA分別處理白樺懸浮細胞24 h后，不同程度地提高了白樺懸浮細胞中多酚、黃酮、三萜含量。其中，1.0 mmol/L ABA與 NaHS共同處理后白樺懸浮細胞中多酚、黃酮、三萜含量均達到最大值，分別比NaHS單獨處理增加了17.89%、14.74%和8.87%。[結(jié)論]H2S處理促進白樺懸浮細胞中IAA、ABA和次生代謝物的累積，H2S與IAA或ABA共同處理可進一步促進次生代謝產(chǎn)物的累積。

關(guān)鍵詞 H2S;白樺;IAA;ABA;次生代謝產(chǎn)物

中圖分類號 S792.153 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2021）17-0117-05

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.17.032

Abstract [Objective]The purpose of this study was to clarify the effect of hydrogen sulfide （H2S） on the accumulation of indoleacetic acid （IAA）， abscisic acid （ABA） and secondary metabolites in birch （Betula platyphylla Suk.） suspension cultures.[Method]The colorimetric method， real-time quantitative PCR and enzyme-linked immunosorbent assay were used to analyze the contents of flavones， polyphenols， triterpenes， IAA and ABA， and the gene expression level of IAA and ABA-related key enzyme.[Result]The results showed the concentration and time effects of H2S donor sodium sulfide （NaHS） on the accumulation of IAA and ABA in the birch suspension cells. Among the cells， the highest level of ABA was at 1.0 mmol/L H2S donor NaHS after 12 h treatment， with increasing rates of 196.46% compared to the control.And the highest level of IAA was at 0.1 mmol/L H2S donor NaHS after 3 h treatment， with increasing rates of 5.55% compared to the control. The accumulation of secondary metabolites in the birch suspension cells showed an increasing trend after ABA or H2S treatment， while the opposite was observed after IAA treatment. Treatment on birch suspension cell with 1.0 mmol/L H2S donor NaHS and different concentrations of IAA and ABA for 24 h increased the polyphenols， flavones and triterpenes levels， respectively. Polyphenols， flavonoids and triterpenes reached maximum levels after combined treatment with 1.0 mmol/L ABA and NaHS; the levels increased by 17.89%， 14.74% and 8.87%， compared to NaHS treatment， respectively.[Conclusion]H2S treatment induced the synthesis of IAA and ABA and the accumulation of secondary metabolites in the birch suspension cells. Co-treatment with H2S and IAA or ABA respectively， could further promote the accumulation of secondary metabolites.

Key words H2S;Betula platypylla Suk.;IAA;ABA;Secondary metabolites

白樺（Betula platyphylla Suk.）為樺木科（Betulaceae）樺木屬（Betulalinn）的落葉喬木，適應(yīng)性強，在我國分布范圍廣[1]。白樺富含三萜類、黃酮類、多酚類等次生代謝物，其中白樺酯醇和白樺酯酸等三萜物質(zhì)是白樺的代表性次生代謝物，具有抗菌、抗病毒、提高機體免疫力、抗腫瘤等多重功能[2-4]。為了安全并可持續(xù)地利用白樺次生代謝物資源，筆者前期利用組織培養(yǎng)技術(shù)建立了白樺懸浮細胞培養(yǎng)體系，并證實白樺懸浮細胞中含有白樺酯醇、白樺酯酸和齊墩果酸等三萜物質(zhì)、多酚和黃酮等次生代謝物。同時發(fā)現(xiàn)，外源添加腐胺、一氧化氮、水楊酸、茉莉酸以及硫化氫（H2S）等誘導(dǎo)子可以顯著地促進白樺懸浮細胞中黃酮、白樺酯醇等次生代謝產(chǎn)物的累積[5]。

H2S作為繼一氧化氮與一氧化碳之后的新興氣體信號分子[6]，在調(diào)節(jié)植物生長發(fā)育、延緩植物衰老等多種植物生理活動中發(fā)揮著重要作用。同時有研究證明，外源的H2S處理可以促進多種次生代謝產(chǎn)物的合成[7-9]，但其機制卻鮮見報道。有研究證明，植物體內(nèi)H2S信號與吲哚乙酸（IAA）及脫落酸（ABA）之間存在著相互作用：H2S供體NaHS可以促進IAA缺陷型黃瓜的不定根生長，同時通過抑制IAA轉(zhuǎn)運也可以逆轉(zhuǎn)NaHS誘導(dǎo)的不定根生長[10];H2S介入ABA的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)引發(fā)保衛(wèi)細胞的氣孔關(guān)閉，同時外源的ABA處理可以明顯提高植物內(nèi)H2S含量[11]。由此推測，H2S引起的白樺次生代謝產(chǎn)物累積可能與IAA和ABA相關(guān)。為此，筆者以初期發(fā)現(xiàn)的促進白樺懸浮細胞中多酚、三萜等次生代謝產(chǎn)物累積的誘導(dǎo)子H2S為研究對象，分析H2S對白樺懸浮細胞中IAA和ABA累積的影響，探究H2S與IAA、ABA共同處理對白樺懸浮細胞內(nèi)次生代謝產(chǎn)物累積的影響，以期為解決植物培養(yǎng)物中次生代謝物的低產(chǎn)問題提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

白樺懸浮細胞來自白樺組培苗莖段誘導(dǎo)的愈傷組織，白樺組培苗來自東北林業(yè)大學白樺強化種子園5～7 年生嫁接優(yōu)樹（接穗30年生）的腋芽。將白樺懸浮細胞接種于附加0.1 mg/L 6-BA+0.01 mg/L TDZ，1 g/L酸水解酪蛋白，20 g/L蔗糖的B5液體培養(yǎng)基中，pH為5.5～6.0。100 mL搖瓶內(nèi)加入50 mL培養(yǎng)液，每瓶接種6 g白樺懸浮細胞，每隔7 d繼代1次，培養(yǎng)溫度為25～27 ℃，光照時間16 h/d，光照強度為2 000 lx，搖床轉(zhuǎn)速為130 r/min。

1.2 方法

1.2.1 外源H2S和IAA、ABA處理。

將H2S供體硫氫化鈉（NaHS）溶液加入到培養(yǎng)8 d的白樺懸浮細胞培養(yǎng)體系中，使其最終濃度分別為0.1、0.5、1.0、5.0 mmol/L，對照（CK）中加入等體積的無菌水，處理3、6、12、24、48、96 h后分別取樣，每處理3次重復(fù)。

H2S分別與IAA、ABA共處理：將IAA、ABA、NaHS+IAA、NaHS+ABA溶液分別加入到培養(yǎng)8 d的白樺懸浮細胞培養(yǎng)體系中，使NaHS終濃度為1.0 mmol/L，IAA及ABA終濃度分別為0.1、0.5、1.0、5.0 mmol/L，對照（CK）中加入等體積無菌水，處理24 h后取樣。

1.2.2 次生代謝產(chǎn)物的測定。

1.2.2.1 三萜含量的測定。采用比色法，取200 μL樣品于5 mL試管中，置于70 ℃水浴蒸干，加入200 μL新配的5%香草醛冰醋酸溶液，再加入800 μL高氯酸混勻，置于70 ℃水浴15 min后冷卻至室溫。用乙酸乙酯定容至4 mL，利用分光光度計測定551 nm處吸光值。對照組加入200 μL乙酸乙酯，以白樺酯醇作為標準品制作標準曲線，得到回歸方程為y=45.030x+0.041（R2=0.995），線性范圍為0.004～0.024 mg/mL。

1.2.2.2 黃酮含量的測定。采用比色法，以硼酸-乙酸鈉絡(luò)合試劑（硼酸0.8%，乙酸鈉1.0%，均為M/V）為顯色劑，吸取2 mL提取液于10 mL離心管中，再加入2 mL絡(luò)合試劑，混勻后于384 nm處測定吸光值。以試劑空白為對照，利用蘆丁為標準品得到回歸方程y=2.541x-0.030（R2=0.993），線性范圍為0.058～0.348 mg/mL。

1.2.2.3 多酚含量的測定。采用比色法，取5 mL提取液，加入4%現(xiàn)配的香草醛-甲醇溶液，再加1.5 mL濃鹽酸，用甲醇定容至10 mL，混勻后于500 nm處測定吸光值。以試劑空白為對照，用沒食子作為標品，得回歸方程y=100.700x+0.014（R2=0.998），線性范圍0.001～0.006 mg/mL。

1.2.3 IAA及ABA含量的測定。

采用間接酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immuneosorbent ass-ays，ELISA）測定，ELISA試劑盒購自中國農(nóng)業(yè)大學作物化學控制中心。按試劑盒操作說明在490 nm處測定OD值，各樣品測定3次。以IAA為標品，回歸方程y=-0.254 9x-0.198 6（R2=0.995 3）;以ABA為標品，回歸方程y=-0.643 8x+2.724 6（R2=0.988 4）。

1.2.4 IAA和ABA合成關(guān)鍵基因的表達量檢測。

取新鮮的白樺懸浮細胞經(jīng)Takara公司的MiniBEST Universal RNA提取試劑盒提取得到總RNA。測定濃度后，利用Oliga dt（18）和M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶（Takara）反轉(zhuǎn)錄合成cDNA（Takara，code No.2641A）后進行普通PCR電泳驗證cDNA與引物質(zhì)量。通過實時熒光定量PCR測定IAA調(diào)控基因GH3.5A、GH3.5B、GH3.9A和ABA合成基因NCED4、ZEP6的表達情況：以白樺微管蛋白基因TU（tublin）為內(nèi)標參照基因，反應(yīng)體系總計20 μL，循環(huán)40次，具體操作參照說明書。相關(guān)引物序列見表1，目的基因的相對表達量用公式2-△△Ct進行計算。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理與作圖。

使用Excel 2016進行數(shù)據(jù)整理，用SPSS 19.0（SPSS Inc.，Chicago）軟件和Duncans的方法進行單因素方差分析（ANOVA）及數(shù)據(jù)的差異性檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1 H2S處理對白樺懸浮細胞中IAA含量及其調(diào)控關(guān)鍵酶基因表達的影響

將0.1、0.5、1.0和5.0 mmol/L H2S供體NaHS分別加入到培養(yǎng)8 d的白樺懸浮細胞培養(yǎng)體系中，處理3～96 h，分別于3、6、12、24、48、96 h取樣測定IAA含量，結(jié)果見圖1。從圖1可見，IAA含量隨著處理時間的增加而降低。處理時間相同時，NaHS處理濃度越大，IAA含量越低，但0.1 mmol/L H2S供體NaHS處理時細胞中IAA含量比CK高。其中，0.1 mmol/L H2S供體NaHS處理3 h時IAA含量達到最高，較CK增加了5.55%;5.0 mmol/L H2S供體NaHS處理96 h時IAA含量最低，比CK降低了73.95%。

進一步利用熒光定量PCR技術(shù)測定IAA調(diào)控基因GH3的相對表達量，結(jié)果見圖2～4。除5.0 mmol/L H2S供體NaHS處理GH3.5B基因表達水平呈下降趨勢以外，GH3.5A、GH3.5B和GH3.9A對NaHS的響應(yīng)基本相同，即隨著處理時間增加，基因表達量都呈先上升后下降趨勢。其中，5.0 mmol/L H2S供體NaHS處理6 h時GH3.5A基因表達水平達到最高，比CK增加了374.17%;5.0 mmol/L H2S供體NaHS處理24 h時GH3.5A基因表達水平降到最低，比CK減少了89.44%。1.0 mmol/L H2S供體NaHS處理24 h時GH3.5B基因表達水平最高，比CK增加了306.57%。5.0 mmol/L H2S供體NaHS處理96 h時GH3.5B基因表達水平最低，比CK降低了80.08%。1.0 mmol/L H2S供體NaHS處理24 h時GH3.9A基因表達水平最高，比CK增加了508.98%;5.0 mmol/L H2S供體NaHS處理96 h時GH3.9A基因表達水平最低，比CK降低了93.17%。

2.2 H2S處理對白樺懸浮細胞中ABA累積和ABA調(diào)控關(guān)鍵基因表達的影響

從圖5可見，ABA含量隨著NaHS處理濃度和處理時間的增加呈先升高后降低趨勢，且濃度越高，峰值出現(xiàn)越早。其中，1.0 mmol/L H2S供體NaHS處理12 h時ABA含量最高，比CK增加了196.46%;1.0 mmol/L H2S供體NaHS處理3 h時ABA含量最低，比CK降低了15.26%。

進一步利用熒光定量PCR技術(shù)測定ABA調(diào)控基因的相對表達量，結(jié)果見圖6、7。除5.0 mmol/L NaHS處理NCED4基因表達水平呈下降趨勢以外，NCED4和ZEP6對NaHS的響應(yīng)基本相同，呈先上升后下降趨勢。其中，1.0 mmol/L H2S供體NaHS處理6 h時NCED4基因表達水平最高，比CK增加了540.72%，0.5 mmol/L H2S供體NaHS處理48 h時NCED4基因表達水平最低，比CK降低了92.13%;1.0 mmol/L H2S供體NaHS處理24 h時ZEP6基因表達水平最高，比CK增加了253.18%，0.5 mmol/L H2S供體NaHS處理96 h時ZEP6基因表達水平最低，比CK降低了76.61%。

2.3 H2S與激素（IAA和ABA）處理對白樺懸浮細胞中細胞產(chǎn)量和次生代謝物累積的影響

前人研究發(fā)現(xiàn)，1.0 mmol/L H2S供體NaHS處理24 h后白樺懸浮細胞中三萜和多酚等次生代謝產(chǎn)物積累最高[5]。為此，該研究選用1.0 mmol/L H2S供體NaHS與不同濃度IAA、ABA共處理白樺懸浮細胞，分析NaHS與IAA或ABA共同處理對白樺次生代謝物積累的影響，結(jié)果見表2。由表2可知，經(jīng)1.0 mmol/L H2S供體NaHS處理24 h后，白樺懸浮細胞中多酚、黃酮和三萜含量分別比CK提高了38.74%、33.85%和47.64%。0.1、0.5、1.0和5.0 mmol/L ABA處理可增加白樺懸浮細胞中的多酚、黃酮和三萜含量，增幅在2.18%～29.88%;0.1、0.5、1.0和5.0 mmol/L IAA處理降低白樺懸浮細胞中的多酚、黃酮和三萜含量，降幅在2.65%～21.09%。NaHS與不同濃度的IAA、ABA分別處理后不同程度地提高了白樺懸浮細胞中多酚、黃酮和三萜含量，其中0.1 mmol/L IAA+1.0 mmol/L NaHS共同處理黃酮、三萜含量達到最大值，分別比0.1 mmol/L IAA處理增加了33.98%和12.50%;0.5 mmol/L IAA+1.0 mmol/L NaHS共同處理多酚含量達到最大值，比0.1 mmol/L IAA處理增加了67.81%。1.0 mmol/L ABA+1.0 mmol/L NaHS處理多酚、黃酮和三萜含量達到最大值，分別比1.0 mmol/L ABA單獨處理增加了34.23%、18.25%和34.76%，比1.0 mmol/L H2S供體NaHS處理增加了17.89%、14.74%和8.87%。由上述結(jié)果可知，在經(jīng)NaHS處理的白樺懸浮培養(yǎng)體系中添加適當濃度的外源IAA或ABA可進一步促進其次生代謝物的積累。

3 討論

（1）IAA是發(fā)現(xiàn)最早的一類天然植物激素，在植物的組織分化、器官發(fā)育、向性表現(xiàn)與成熟衰老等方面發(fā)揮著重要作用[12-14]。研究表明，擬南芥H2S信號與IAA之間存在相互作用，IAA參與外源H2S介導(dǎo)的擬南芥主根發(fā)育抑制過程[15]，同時外源H2S通過影響IAA轉(zhuǎn)運蛋白的表達減少IAA在擬南芥根尖的分布[16]。而白樺懸浮體系中H2S對IAA的影響是否與擬南芥報道相同尚未明確。文獻報道GH3基因是植物生長素初期響應(yīng)基因家族之一[17]，同時有研究證明，樺樹GH3.5[18]、GH3.6、GH3.9和GH3.3基因參與調(diào)節(jié)IAA含量，其表達量與IAA含量呈負相關(guān)[17]。為此，該研究分析了H2S對白樺懸浮體系中IAA含量和GH3調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄水平的影響，發(fā)現(xiàn)低濃度NaHS處理促進IAA的合成，但在NaHS濃度為0.5 mmol/L及以上時IAA含量持續(xù)降低，其中5 mmol/L NaHS處理96 h時IAA含量最低，僅為CK的26.05%。而GH3.5A、GH3.5B、GH3.9A 3個GH3基因的轉(zhuǎn)錄水平在H2S處理6～48 h時呈增加趨勢，其中1.0 mmol/L H2S處理24 h時GH3.5A、GH3.5B和GH3.9A表達量最高，分別比對照提高了126.84%、257.96%和436.17%。由此推測，外源H2S處理后介導(dǎo)白樺懸浮細胞中GH3家族蛋白合成并與細胞內(nèi)IAA結(jié)合，氨基化使IAA失活[19]，導(dǎo)致IAA含量降低。

（2）ABA參與植物生長和發(fā)育的各個過程，在營養(yǎng)生長、芽休眠、氣孔運動以及應(yīng)答鹽、低溫、滲透脅迫等方面發(fā)揮著多重作用[20-24]。研究表明，蠶豆內(nèi)H2S參與ABA的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，同時ABA處理可以提高H2S含量[11]。而白樺懸浮體系中H2S對ABA的影響是否與蠶豆報道相同尚未明確。有文獻報道玉米黃質(zhì)環(huán)氧酶（ZEP）、醛氧化酶（AAO）和9-順-環(huán)氧類雙加氧酶（NCEDs）在ABA間接途徑合成中發(fā)揮主要調(diào)節(jié)作用[25]，同時也有研究證明，白樺ZEP和NCEDs是ABA合成途徑中的關(guān)鍵酶及主要控制節(jié)點[26]。為此，該研究分析了H2S對白樺懸浮體系中ABA含量和ZEP6及NCED4調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄水平的影響，結(jié)果表明，NaHS處理后，細胞內(nèi)ABA的含量先升高后下降，并且峰值集中在6～12 h。其中1.0 mmol/L H2S供體NaHS處理12 h時ABA含量達到最高值，較對照增加了196.46%，而在96 h時下降到對照的80.86%。而NCED4和ZEP6基因轉(zhuǎn)錄水平分別在H2S處理3～12 h和12～48 h時呈增加趨勢，1.0 mmol/L H2S供體NaHS處理12 h分別比對照增加了431.00%和99.49%。由此推測，NCED4是H2S處理誘導(dǎo)ABA合成增加的主要基因，外源H2S通過上調(diào)白樺懸浮細胞中NCED4的轉(zhuǎn)錄水平進而誘導(dǎo)ABA合成增加，與李丹丹等[27]研究得出的NaHS通過上調(diào)黃瓜幼苗葉片的NCED活性以促進ABA合成的結(jié)果一致。

（3）H2S在植物抗逆中具有不可或缺的作用，外源H2S處理可以激活植物細胞防御機制，促進植物細胞內(nèi)多種次生代謝產(chǎn)物積累[7-9]，同樣該研究在初期也發(fā)現(xiàn)，H2S處理可以促進桑黃和白樺懸浮體系中次生代謝物的累積[5]，但其促進機制尚未明確。大量研究表明，H2S在植物體內(nèi)通過與一氧化氮（NO）、IAA、ABA、乙烯（ETH）等信號分子發(fā)生相互作用，從而協(xié)助植物對抗逆境，以利于其生長發(fā)育。陸健敏等[28]研究發(fā)現(xiàn)，H2S與ETH發(fā)生交互作用從而加速了大豆種子的萌發(fā);在蠶豆中，H2S與ABA共同作用調(diào)節(jié)其氣孔的閉合，并且這種閉合是ABA依賴性的[11];于立旭等[29]用H2S處理黃瓜，發(fā)現(xiàn)了黃瓜不定根的生長，同時IAA含量也有短暫提高。因此，對植物生長發(fā)育起到重要作用的植物激素IAA、ABA可能介導(dǎo)H2S在植物細胞內(nèi)引起次生代謝物的合成。為此，該研究進一步對比分析了H2S、IAA、ABA、H2S與ABA和H2S與IAA對白樺次生代謝物累積的影響。研究發(fā)現(xiàn)，H2S處理不同程度地提高了白樺懸浮細胞中的多酚、黃酮、三萜含量，分別比對照提高了38.74%、33.85%和47.64%，0.1～5.0 mmol/L ABA處理也增加了白樺懸浮細胞中的多酚、黃酮和三萜含量，增幅在2.18%～29.88%，而0.1～5.0 mmol/L IAA處理降低了白樺懸浮細胞中多酚、黃酮和三萜含量，降幅在2.65%～21.09%。但是，0.1 mmol/L IAA與NaHS共同處理后白樺懸浮細胞中黃酮、三萜含量達到最大值，分別比IAA單獨處理增加了33.98%和12.50%，0.5 mmol/L IAA與NaHS共同處理后白樺懸浮細胞中多酚含量達到最大值，比IAA單獨處理增加了67.81%。同樣，1.0 mmol/L ABA與NaHS共同處理后白樺懸浮細胞中多酚、黃酮和三萜含量上升至最大值，分別比NaHS單獨處理增加了17.89%、14.74%和8.87%。由上述結(jié)果可知，H2S與IAA或ABA互作處理可進一步促進白樺懸浮細胞中次生代謝物的積累，但其機制還需進一步利用基因工程等技術(shù)進行研究。

（4）綜上所述，外源H2S處理促進了白樺懸浮細胞培養(yǎng)體系中ABA的合成，抑制了IAA的合成，進而對多酚、黃酮和三萜等的積累分別起到促進或抑制作用，同時H2S與IAA或ABA互作可進一步促進次生代謝物合成。

參考文獻

[1] 楊洋.白樺BpTCP7基因的功能研究[D].哈爾濱：東北林業(yè)大學，2016.

[2] 傅增輝，金艷，林再紅，等.白樺脂醇對慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠行為及神經(jīng)營養(yǎng)因子表達的影響[J].解剖學雜志，2020，43（3）：200-205.

[3] 段曉玲，王海英，楊國亭，等.白樺葉精油的抑菌和抗氧化活性成分分析[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2014，42（33）：11746-11748，11777.

[4] 王躍華，劉益麗，馬良良，等.TTC—脫氫酶還原法測定滇重樓細胞活力優(yōu)化條件篩選[J].成都大學學報（自然科學版），2011，30（1）：1-3.

[5] 周文洋.H2S誘導(dǎo)白樺懸浮細胞中次生代謝物累積的激素生理機制的初步研究[D].哈爾濱：東北林業(yè)大學，2015.

[6] 金竹萍，喬增杰，張麗萍，等.硫化氫通過抑制鎘離子內(nèi)流降低擬南芥體內(nèi)的鎘毒性[J].中國生物化學與分子生物學報，2020，36（1）：61-70.

[7] ZHANG H，HU L Y，HU K D，et al.Hydrogen sulfide promotes wheat seed germination and alleviates oxidative damage against copper stress[J].Journal of integrative plant biology，2008，50（12）：1518-1529.

[8] LISJAK M，SRIVASTAVA N，TEKLIC T，et al.A novel hydrogen sulfide donor causes stomatal opening and reduces nitric oxide accumulation[J].Plant physiology and biochemistry，2010，48（12）：931-935.

[9] WANG Y Q，LI L，CUI W T，et al.Hydrogen sulfide enhances alfalfa（Medicago sativa）to-lerance against salinity during seed germination by nitric oxide pathway[J].Plant and soil，2012，351（1/2）：107-119.

[10] 汪偉，張偉，朱麗琴，等.植物硫化氫生理效應(yīng)及機制研究進展[J].中國農(nóng)學通報，2013，29（31）：78-82.

[11] 劉菁，侯智慧，趙方貴，等.H2S介導(dǎo)ABA誘導(dǎo)蠶豆氣孔運動的生理機制研究[J].西北植物學報，2011，31（2）：298-304.

[12] SCARPELLA E，MARCOS D，F(xiàn)RIML J，et al.Control of leaf vascular patterning by polar auxin transport[J].Genes & development，2006，20（8）：1015-1027.

[13] 金敏，張倩，陶書田，等.IAA及其運輸載體PIN對庫爾勒香梨萼片脫落與宿存影響的研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2020（8）：46-49.

[14] KERR I D，BENNETT M J.New insight into the biochemical mechanisms regulating auxin transport in plants[J].The biochemical journal，2007，401（3）：613-622.

[15] 羅瓊.H2S影響擬南芥根系發(fā)育的生理及分子調(diào)控機制[D].西寧：青海師范大學，2016.

[16] JIA H L，HU Y F，F(xiàn)AN T T，et al.Hydrogen sulfide modulates actin-dependent auxin transport via regulating ABPs results in changing of root development in Arabidopsis[J].Scientific reports，2015，5（1）：707-735.

[17] 孫濤，柴團耀，張玉秀.擬南芥GH3基因家族啟動子序列分析[J].中國科學院研究生院學報，2010，27（6）：847-852.

[18] YANG G，CHEN S，WANG S，et al.BpGH3.5，an early auxin-response gene，regulates root elongation in Betula platyphylla×Betula pendula[J].Plant cell，tissue and organ culture，2015，120（1）：239-250.

[19] ZHANG R S，WANG Y C，WANG C，et al.Time-course analysis of levels of indole-3-a-cetic acid and expression of auxin-responsive GH3 genes in Betula platyphylla[J].Plant molecular biology reporter，2011，29（4）：898-905.

[20] 李紅，李波，楊曌.外源ABA對蘇打鹽堿脅迫的紫花苜蓿內(nèi)源激素含量的影響[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2020（6）：103-106，111.

[21] 郭文雅，趙京獻，郭偉珍.脫落酸（ABA）生物學作用研究進展[J].中國農(nóng)學通報，2014，30（21）：205-210.

[22] SEO M，KOSHIBA T.Complex regulation of ABA biosynthesis in plants[J].Trends in plant science，2002，7（1）：41-48.

[23] 姚俠妹，偶春，張源麗，等.脫落酸對鹽脅迫下香椿幼苗離子吸收和光合作用的影響[J].東北林業(yè)大學學報，2020，48（8）：27-32.

[24] WASILEWSKA A，VLAD F，SIRICHANDRA C，et al.An update on abscisic acid signaling in plants and more…[J].Molecular plant，2008，1（2）：198-217.

[25] 朱攀攀，劉長英，趙愛春，等.桑樹脫落酸生物合成相關(guān)基因的鑒定及轉(zhuǎn)錄表達分析[J].中國農(nóng)業(yè)科學，2015，48（5）：1011-1022.

[26] ZHANG R S，YANG C P，WANG C，et al.Time-course analyses of abscisic acid level and the expression of genes involved in abscisic acid biosynthesis in the leaves of Betula platyphylla[J].Molecular biology reports，2012，39（3）：2505-2513.

[27] 李丹丹，張曉偉，劉豐嬌，等.H2S與ABA緩解低溫脅迫對黃瓜幼苗氧化損傷的交互效應(yīng)[J].園藝學報，2018，45（12）：2395-2406.

[28] 陸健敏，沈芮同，李忠光.硫化氫和乙烯交互作用對大豆種子萌發(fā)的影響[J].種子，2018，37（1）：88-90.

[29] 于立旭，尚宏芹，張存家，等.外源硫化氫對鎘脅迫下黃瓜胚軸和胚根生理生化特性的影響[J].園藝學報，2011，38（11）：2131-2139.